乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

目的 分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法 用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果 纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×10^3和27×10^3左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论 成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。     

兔抗蜡质芽孢杆菌抗血清的制备及鉴定

近年来,用微生态制剂所产生的生物效应有利于增强动物体质,促进生长,以及防治等方面的研究成果,在国内外均有报道。Ｔｏｒｔｕｅｒｏ等进行在肉鸡日粮中添加蜡质芽孢杆菌显著提高增重和改善饲料效率。     

草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备

采用盐析法、重组蛋白A(HiTrapr Protein A Sepharose)亲和层析法分离纯化草鱼血清中的IgM,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较并制备兔抗IgM抗血清。结果表明:33%硫酸铵溶液可以沉淀血清中大部分蛋白,但电泳条带仍较多,其中含有78kD和28kD的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;而rProtein A亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链(78kD)和轻链(28kD)。Western-blot显示,鼠抗人Ig抗体可与78kD及28kD条带发生发应。rProtein A亲和法提纯蛋白的纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯草鱼IgM的有效方法。将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达1:25600的兔抗鱼IgM血清,并测得血清蛋白总量和IgM含量分别为25.87mg和4.5mg,IgM占血清蛋白总量的17.39%。本实验所采用的蛋白A亲和层析法提取草鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。同时本研究所制备的兔抗草鱼IgM血清也为今后的相关研究工作打下基础。     

视黄醇结合蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

建立了经硫酸铵分级、DEAE-Sephadex A25柱、Sephadex G200柱、Ultrogel ACA44柱和 Sephadex G100柱层析分离纯化人血浆视黄醇结合蛋白的方法.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,其纯度达到电泳纯.以此电泳纯的视黄醇结合蛋白免疫家兔得到了高效价的抗血清.     

人血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文应用超迷离心,盐酸胍处理、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析分离纯化了人血清载脂蛋白AⅡ。经等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳等鉴定,其纯度达到电泳纯和免疫纯。以此载脂蛋白AⅡ纯品免疫家兔产生的抗血清,效价较高,特异性强,与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E和白蛋白没有交叉反应。     

貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的 制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法 采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果 貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论 建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。     

脂蛋白(a)的分离纯化及其抗血清的制备

脂蛋白(a)简称Lp(a),是血清中一种具特殊结构、抗原成分和生理功能的脂蛋白,近年来国外学者高度重视Lp(a)的研究并确定为动脉粥样硬化危险因素的良好指标,为了探索有关动脉粥样硬化防治的新领域,我们进行了Lp(a)的分离纯化及其抗血清的制备。     

人肝脏特异的F抗原分离纯化及其抗血清制备

取新鲜的人肝脏,充分洗涤,制备匀浆,上清液经Sephadex-G200、DE52层析,聚丙烯酰胺凝胶电泳,得到电泳纯Ｆ抗原,并免疫制备抗血清.     

豌豆铁蛋白的纯化及其抗血清的制备

干豌豆种子粗提物经MgCl2 盐析、AcA2 2 凝胶过滤和DEAE 纤维素阴离子交换柱层析等方法进行纯化 ,以邻菲咯啉显色法检测铁蛋白 ,最后获得纯的铁蛋白 .纯化的铁蛋白在PAGE上显示一条带 ,SDS PAGE显示该蛋白仅含 2 8kD一条亚基 .纯化的豌豆铁蛋白免疫兔 7周后 ,琼脂糖双扩散法检测抗血清效价达 1∶32 .用分级盐析法纯化抗血清 ,纯化后的抗体用琼脂糖双扩散法对大豆铁蛋白粗提物有免疫交叉反应     

蓖麻蚕卵黄磷蛋白鉴定、纯化及抗血清制备

本文通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)法,分析了蓖麻蚕卵黄蛋白质组分,对即黄磷蛋白(Vitellin Vn.)进行了鉴定、纯化,并制备了抗血清。对卵黄磷蛋白的分子量及相对含量进行了测定。并证明卵黄磷蛋白若处在酸性pH条件下能降解。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法 采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果 7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论 建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

人蛋白二硫键异构酶的纯化及其抗血清制备

人蛋白二硫键异构酶的纯化及其抗血清制备吴秉毅,冯桂湘,吕静,张帆,冯永清,王福琴（第一军医大学珠江医院广州５１０２８０）关键词蛋白二硫键异构酶,分离与纯化,抗血清制备二硫键在维持蛋白质的空间结构、生物学活性中起重要作用。二硫键的形成是蛋白质翻译后修饰...     

兔抗人NESTIN抗血清的制备与鉴定(简报)

巢蛋白(nestin)属Ⅵ类中等纤维蛋白。最初在神经系统发育早期发现有该蛋白的表达。后在正常神经系统中发现仅在未分化的神经前体细胞中有nestin的短暂表达,分化后在神经元和神经胶质细胞中分别被NF(neurofilament,神经丝)和GFAP(Glial fibrillary acidic protein,神经胶质元纤维酸性蛋白)所代替。所以nestin的表达通常被视为神经前体细胞的标志之一。就我们所知,目前商品化nestin的抗体都是鼠抗鼠(克隆Rat401)的抗体,而人鼠之间该蛋白序列的同源性仅为50%左     

钙蛋白酶抑制蛋白功能结构域Ⅳ在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗血清的制备

为了研究钙蛋白酶系统在细胞发育及其它生理过程的功能 .应用 PCR从鼠钙蛋白酶抑制蛋白 ( calpastatin) c DNA中扩增了保守的具有功能的结构域 ( 40 4 bp) ,克隆于 p GEX- KG载体 .重组质粒 p GEX- Calp4在大肠杆菌中经 IPTG诱导可表达分子量约 4 5 k D融合蛋白 GST- Galp4 .诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽 - Sepharose4 B亲和层析柱得到纯化的 GST- Calp4融合蛋白 ,纯度达电泳纯 .纯化的 GST- Calp4免疫兔 8周后 ,抗血清的效价达 1∶ 64 .Western- blot分析表明制备的抗血清确实可以与肌细胞中分子量为 1 4 0 k D左右蛋白 (亦即完整 calpastatin)发生特异的免疫交叉反应 ,此表明实验获得了高特异性多克隆抗体     

人胎盘碱性磷酸酶的纯化及其抗血清的制备

人胎盘匀浆经过正丁醇抽提,丙酮沉淀以及ＤＥＡＥ－纤维素,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００,羟基磷灰石３种柱层析等步骤,从中分离出电泳纯的胎盘碱性磷酸酶,纯化系数达１０００倍以上,以此酶作为抗原,免疫新西兰纯种白兔,制备出１：５０００以上滴度的抗血清,该抗血清已用于科研和临床诊断工作中。     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

抗血管紧张素原多克隆抗血清的制备及鉴定

为深入研究血管紧张素原（angiotensinogen,AGT)的表达和组织分布特征,我们以原核表达的AGT蛋白C末端片段为免疫原免疫家兔,制备了针对AGT的多克隆抗血清,并对其进行了ELISA、Western印迹分析及免疫组化鉴定。结果发现,经多次免疫后获得的多克隆抗血清不仅效价高（1：25600）,而且能特异性地针对组织内源性及原核表达的AGT蛋白,同时在人和大鼠组织AGT之间会发生交叉反应。以此抗血清进行免疫组化染色,观察到人胰腺的胰岛细胞及杆内胆管上皮细胞胞浆均有AGT蛋白表达。以上结果提示,利用大鼠杆菌融合表达的AGT蛋白可有效刺激家兔产生AGT抗体。本工作为进一步研究AGT乃至局部RAS的生理、病理意义提供了重要的实验工具。     

基因免疫和蛋白免疫制备抗P16抗血清

蛋白免疫,是传统的抗体制备法,基因免疫是新型的抗体制备法。为了制备抗这Ｐ１６抗血甭以及比较基因免疫和蛋白免疫制备抗体,分别以融合谷胱甘肽２－转移酶－Ｐ１６５和克隆有ｐ１６肿瘤抑制基因相关ｃＤＮＡ的裸露真核表达载体ｐＣＭＶ－ｐ１６经皮内多点注射接种家兔,制备抗Ｐ１６抗血清,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测到蛋白免疫的抗Ｐ１６抗血清滴度为１：６２５,明显高于基因免疫制备的Ｐ１６抗血清滴度。     

香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备

本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E.coli BL21(DE3)为材料,于25℃、0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,集菌后超声波破碎,获得以包涵体形式表达的约20 kD的融合蛋白.实验结果表明,将沉淀的融合蛋白溶于含6 mol/L尿素的Binding Buffer中,再经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,可获得高纯度的融合蛋白.将纯化融合蛋白经12%SDS-PAGE电泳,切胶回收目的带,液氮研磨并按1:1(W/V)混合佐剂,4次免疫家兔,获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清.以融合蛋白作抗原,间接ELISA法测定其抗血清效价为1:5 000.田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1:500.Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合.本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础.