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中国人白细胞介素-12 cDNA基因的克隆及序列分析与比较 总被引:3,自引:0,他引:3
为研究中国人IL-12的基因特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nPCR)从中国人脐带血单核细胞中分别克隆了P35、P40两亚基cDNA基因,包括完整的前体蛋白编码序列,其中P35 cDNA编码219个氨基酸的多肽,P40 cDNA编码328个氨基酸的多肽,与国外序列(NKSF、CLMF)比较结果发现:所克隆序列P35同NKSF相比,第44aa密友子由GTC(Val)→GTG(Val),但未改 相似文献
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人蛋白C cDNA基因的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为实现人蛋白C cDNA在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性,针对人蛋白C cDNA序列设计引物,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从人胎肝总RNA中钓取人蛋白C cDNA,将其克隆入pIRES neo载体中,通过酶切和PCR鉴定出重组体并进行测序分析。结果表明,获得大小为1386bp的人蛋白C cDNA基因,成功构建人蛋白C cDNA载体pIRES/hPC,为进一步进行人蛋白C cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。 相似文献
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河套蜜瓜ACC合成cDNA酶片段的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)合成酶是高等植物中乙烯生物合成的关键酶。以成熟河套蜜瓜果实的RNA为模板,经反转录和PCR扩增得到预期大小的DNA片段,插入到PUC19的SmaI位眯后转化E.coliJM109,筛选出重组子PHMAS1。离列分析表明获得了627bp的ACC合成酶cDNA片段。与已报道的ACC合成酶基因相应离理比较有很高的同源性。 相似文献
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大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
胰岛β-细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶(Glutamicaciddecarboxylase,GAD,EC4.1.1.15)同源物,以双链cDNA为模权,用PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑GAD基因的cDNA将此包括编码593个氨基酸的全长DNA片段重组入pUC质粒并用双脱的氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为1779bp,经比较发现Wistar大鼠脑与Russell报导的大鼠脑G 相似文献
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华南农业大学广东省果蔬保鲜重点实验室陆旺金博士对香蕉果实expansin cDNA做了研究,他提取成熟香蕉果肉的RNA并分离mRNA,以mRNA反转录合成cDNA,以该cDNA为模板,设计expansin的简并引物,进行RT-PCR圹增,利用退火温度为50℃得到扩增产物纯化后与pGEM-T-Ea-Sy载体连接转化大肠杆菌,任意桃选2个阳性克隆,进行序列分析,结果得到2个序列相同的expansin的cDNA基因片段,命名为MA-EXP3,以示与登录的香蕉MA—EXP1和MA—EXP2相区别。MA—EXP3中存在expansin基因的保守区域即8个半胱氨酸残基和3个色氨酸残基,它编码为177个氨基酸与MA—EXP1的核苷酸同源性为74.2%,与氨基酸的同源性为86.4%。 相似文献
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使用RT-PCR方法克隆了Wistar大鼠脑α_1型甲状腺激素受体的cDNA,得到包含起始及终止密码子共1233bp、编码409个氨基酸的受体全长编码序列.酶切分析后,将此特异DNA片段重组入质粒pUC系统,得重组质粒pTRA.双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序,结果与文献报导的SD大鼠的结果一致,同时对长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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田间采集辽宁地区烟叶脉坏死病标样所得分离物,在测定的12个科35种植物中只侵染茄科的一些烟草品种及洋酸浆(physalisfloridana),可由桃蚜(Myzuspersicae)传播。病叶汁液稀释限点(DEP)为10 ̄(-2)-v10 ̄(-3);失毒温度(TIP)为55一60℃;体外保毒期(L)为48-72小时。病毒粒体形态呈线条状720×12nm,病叶脉坏死部细胞质中含风轮状内含体。病毒提取物的紫外最大吸收为265nm,最小吸收为245nm,A_(280)/A_(260)为0.82。该病毒分离物与PVY ̄0抗血清呈阳性反应。以病毒RNA为模板,按国外报道的PVY ̄N序列合成引物经逆转录合成cDNA。用PCR扩增出约0.80kb的CP基因片段,将这一片段插入载体pGEM7Z-f(+)中转化E.coliDH5a菌株得到了CP基因的克隆。cDNA序列分析表明,和国外报道的PVY ̄N序列同源性极高,初步表明引起辽宁地区烟叶脉坏死病的毒原为PVY ̄N。 相似文献
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人乳铁蛋白cDNA的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从北京正常人乳腺组织中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增人乳铁蛋白(hLF)的cDNA,将其克隆到pGEM-T载体上并进行DNA序列测定。结果表明,所克隆的hLF cDNA序列全长为2136bp,其DNA序列与GenBank中另外5个hLF cDNA序列相比,有2个碱基与这5个序列不同:1740位这5个序列是G,本文序列是C;1756位这5个序列是T,本文序列是C。其中1740位碱基的变化导致了第580位氨基酸由Glu变为Asp。 相似文献
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以高转移性人肺巨细胞癌细胞系PG的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人尿激酶受体(uPAR)的cDNA。将其亚克隆至pGEM-T载体后进行测序,结果表明,我们所克隆的uPAR cDNA片段与文献报道的人uPAR基因编码区cDNA序列高度同源(达99%),其中第705、746和755碱基分别由A、A和G替代了文献中的T、G和A,从而导致了第249和252位氨基酸由Gly和Glu变为Asp和Gly,我们已将此序列申请登录GenBank,登录号为AF257789。 相似文献
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Identification of Sequence Motifs Causing Band Compressions on Human cDNA Sequencing 总被引:1,自引:0,他引:1
In order to characterize DNA sequences leadingto band compressionsin an automated dideoxy-DNA sequencing system which uses fluorescentdye primers, we compiled DNA sequences at compression sitesfrom accumulated sequence data of human cDNAs (about 205 kbin total length). The results clearly showed that almost allthe 3'-end regions at the compression sites (> 98%) carriedtwo types of common sequence motifs. The predominant one (about68%) contained a sequence of 5'-Y'GN12AR'-3' (Y' andR': pyrimidine and purine residues capable of base pairing).The remainder (about 32%) carried a hairpin motif with a relativelystable GC-rich stem ( 3 bp) connected by a loop consistingof3 or 4 nucleotides. The occurrence of compressions at thesemotif sites was further confirmed by using synthetic DNAs withrandom sequences (about 58 kb in total length). Since DNA sequencesat compression sites analyzed so far shared either of the typeof motifs in the sequencing system employed here, it was possibleto predict the nucleotide residue to be located at a compressionsite by carefully checking the sequence preceding the site. 相似文献
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柿果实多聚半乳糖醛酸酶基因克隆与序列分析 总被引:4,自引:3,他引:4
以'富平尖柿'(Diospyros kaki L.cv.Fuping Jianshi)为材料,采用RACE方法,首次获得了柿果实多聚半乳糖醛酶(PG)基因的3个全长cDNA(登录号为EU816197、EU816198、EU816199),分别命名为DKPG1、DKPG2、DKPG3.DKPG1全长1 616 bp,DKPG2全长1 654 bp,DKPG3全长1 545 bp.3个基因均含有一个1 326 bp的开放阅读框,共编码441个氨基酸.通过Blast比对发现该基因核苷酸序列与其他植物已报道的PG基因具有74%~78%的相似性;其氨基酸序列与其他植物的相似性为60%~73%.对GenBank同源性搜索获得的其他植物PG基因氨基酸序列进行系统进化分析,发现其与葡萄、猕猴桃、桃的亲缘关系近,与大豆亲缘关系较远. 相似文献