一种在两栖类胚胎的免疫组织化学研究中有多种用途的方法

本文介绍了我们最近发展的一项用于两栖类胚胎的免疫组织化学研究的技术。两栖类胚胎经过适当的化学固定以后,用振动切片机可以得到50—100 μ的切片。我们用这样的切片进行免疫萤光和免疫酶标染色,均得到满意的结果,可以进行光镜(共聚焦显微镜,普通显微镜)及透射电镜的观察。由于在整个过程中避免了使用有机溶剂及包埋剂,所以最大限度地保存了抗原性。与传统的各种免疫组化技术比较,切片的各部分组织均能迅速与抗体反应,组织保存相当完好,可以满足电镜观察的要求。运用这种方法,还可以将同一胚胎的不同切片分别用于光镜和电镜观察,使结果更具说服力。     

观察梯形穿孔板的好材料——桦木导管分子

取二、三年生新鲜桦木枝条用FAA固定液固定保存。实验时用徒手切片或滑走切片机切片,经番红·固绿染色;如用离析材料观察效果     

一种简单快速植物组织冰冻切片方法

比较不同冷冻方法对植物细胞超微结构的影响,结果表明:直接包埋法处理的植物细胞超微结构保存较好,而液氮冷冻处理的植物细胞内膜系统损伤严重.建立了一种直接包埋冷冻和适当回温相结合的方法,不仅可以制作出植物细胞基本结构保存完整的组织切片,而且避免了使用冰冻保护剂的弊端.其操作程序是:样品固定→冰冻与包埋→适当回温→快速切片→展片→染色.此法制作的切片可进行不同的染色和组织细胞化学测定,具有操作简便,易于推广的特点.     

microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U。探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-23l爬片细胞进行U。探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR_375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的u。表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg／ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg／ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg／ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为lng／ml和l00ng／ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。     

草履虫的纤毛染色方法

(一)杀死固定 1.固定液配制酒精95％5毫升,苦味酸(饱和液)15毫升,冰醋酸20毫升,甲醛60毫升,蒸馏水100毫升。将上面四种药物混合后,再加等量的蒸馏水稀释,即成200毫升的固定液。如要少配或多配,可依次按1∶3∶4∶12∶20的比例进行。此固定液可长期保存,效果不变,也适应其他原生动物和动物组织的固定。 2.固定的方法用吸管吸取培养草履虫的烧杯边缘的培养液,可得到高浓度的草履虫,投入离心管中,然后以9∶1的比例加入固定液(即草履虫培养液9份,固定液1     

青蛙胚胎三色染色法

一.杀死与固定青蛙产卵一般在四月中至六月底之间,在稻田及河沟中都可以采到,采集后选择所需要的发青时期,固定于施氏固定液中,固定时间24小时.固定后以流水冲洗24小时.然后依次换入30%、50%、70%、酒精中各2小时.胚胎就可以保存在70%酒精中.     

盐生肉质草本植物海马齿叶片石蜡切片简易方法

海马齿是海边盐生肉质草本植物,由于叶片的肉质化,传统石蜡切片制作路线不能制作出结构完整,效果较好的切片.本实验以传统的石蜡切片方法为基础,在固定方法选择,脱水时间控制,包埋温度,染色等方面做了适合海马齿叶片特点的改良,固定方法采用戊二醛固定液固定24 h,并洗脱;脱水每级梯度时间为1 h,包埋温度在100℃,染色方法采用固绿染色法.结果表明:采用这种改良的方法可以制作出染色清晰,组织结构完整的海马齿叶片切片.这对其它肉质化植物的石蜡切片制作有着借鉴作用.     

振荡法在组织石蜡制片中的应用

本文成功地把振荡法应用于组织石蜡制片中,采取鸡的各种组织,用常规、加温、振荡三种方法进行固定、脱水、透明和浸蜡,然后常规切片染色试验比较。结果表明,用振荡法从固定到浸蜡仪用2小时20分钟,提高功效10倍以上。具有传统方法所不及的简便、快速、切片薄及质量好等优点,尤其适用于临床病理检验的快速诊断。完全可以代替一般的快速石蜡切片和冰冻切片。     

适于研究形成层活动的不脱蜡苏木精—番红染色法

描述了一种适用于研究形成层浩大活动的石蜡切片法,材料用加甘油的ＦＡＡ固定液固定,用代氏或哈氏苏木精番红对不胶蜡的切片同时染色、同样条件下分色,脱蜡后直接封片。此法快速有效,所制切片的重量不亚于、甚至更铖于常规染色法,制片可以长期保存而不退色．     

细鳞泥鳅味蕾的形态初步研究

一、材料与方法 本研究所用材料为细鳞泥鳅(Misgurnus mizolepis Günther.)土名为肉泥鳅。 将捕来的细鳞泥鳅先放入水族箱中生活1—2天,然后破坏脑脊髓(杀死),放入盛有生理盐水的直径为12厘米的大培养皿中,剪下口须、唇、舌、口腔顶壁和底壁、咽等部位的材料,再分别放入带标签儿的已盛好波恩式固定液的指管中固定,经8—12小时后,用50％酒精冲洗,待黄色变浅后放入70％酒精中保存。然后做石蜡切片。切片的厚度为7—8微米,用窦来飞-苏木精染色,伊红复染,使胞核呈蓝色,胞质     

组织学石蜡切片制作中固定方法的改良

固定方法是组织学中制作优良石蜡切片的基础。通过对小鼠组织取材方法的改进、不同固定液的对比、固定方法的改良,探索出一种简单且易于本科生实验教学的石蜡切片固定方法。     

乳腺恶性肿瘤标本固定方法比较

目的 通过对比3种乳腺根治术标本的取材方式和固定时间,摸索制备高质量乳腺根治术标本切片的最佳固定方法。方法 随机收集上午、下午接收乳腺根治术标本50例,上午每例标本各取一块肿物、腺体组织和淋巴结组织,固定9 h后放入脱水机;下午每例肿物、腺体和淋巴结各取2块,1块固定4 h后放入脱水机,另1块固定28 h后放入脱水机。各组织常规脱水、石蜡包埋、切片后,进行HE染色、E-cadherin酶标法免疫组织化学检测和Her-2荧光原位杂交染色。比较3种固定方法的制片质量,探讨乳腺根治术标本最佳固定方法。结果 固定4 h即开始脱水的肿物和腺体组织的切片不完整发生率显著高于固定9 h和28 h;固定4h和9h的淋巴结切片不完整发生率高于固定28 h;固定4 h、9 h、28 h肿物、腺体HE染色质量无明显差异,但固定9 h与28 h的肿物、腺体E-Cadherin酶标法免疫组织化学正常率高于固定4 h,固定28h淋巴结染色质量高于固定4 h与9 h;固定4 h肿物Her-2荧光原位杂交成功率低于固定9 h与28 h。结论 乳腺根治术标本的肿物与腺体固定9 h后即可放入脱水机,淋巴结则需延长固定时间...     

一种在两栖类胚胎的免疫组织化学研究中有多种用途的方法

本文介绍了我们最近发展的一项用于两栖糊不胎的免疫组织化学研究的技术。两栖类胚胎经过适当的化学固定以后,用振动切片机可以得到５０－１００μ的切片,我们用这样的切片进行免疫萤光和免疫酶标染色,均得到满意的结果,可以进行光镜（共聚焦显微镜,普通显微镜）及透射电镜的观察。由于在整个过程中避免了使用有机溶剂及包埋剂,所以最大限度地保存了抗原性。与传统的各种免疫组化技术比较,切片的各部分组织均能迅速与抗体反应     

微小组织冰冻快速制片技术

目的摸索提高微小组织冰冻快速制片质量的方法。方法针对小组织冰冻切片中常常出现组织切完、多粒组织切片不全、冰晶、染色不均匀等问题,采用预先制作冷冻平台、快速冷冻等方法来制作优质的冰冻切片。结果组织铺平可使组织切片完整,快速冷冻可减少冰晶形成,使组织结构更清晰,及时固定和加温染色可使细胞核染色更鲜艳,核、质对比明显。结论组织铺平、速冻、固定、染色等都是提高微小组织制片质量的关键。     

两栖纲和爬行纲动物的采集和保存法(二)

两栖纲和爬行纲动物的保存,包括以下内容。 (一) 保存的主要步骤杀死和固定保存的工作可在室内进行。 1.颜色记录和照像两栖动物死后颜色常会改变。所有两栖类和爬行类在福尔马林和酒精中保存一个时期以后都将褪色,因此在杀死这些动物以前,应当把身体各部分的颜色确切的记录下来。如果可能,还应当进行彩色拍照。     

利用微波固定组织的收缩率

目的探讨利用微波辐射固定、微波辐射与固定液结合固定组织的收缩程度。方法将组织分成40组,用一定强度的微波辐射或一定强度的微波辐射与不同固定液结合方法固定动物组织,并制做石蜡组织切片和HE染色,在此过程中测定各步骤前后的组织块体积,计算出收缩率。结果与结论一定强度的微波辐射和一些微波辐射与固定液结合方法固定的组织收缩率低,这些组织的切片具有细胞质均匀,染色鲜艳,细胞核大而清晰的良好效果。     

脂肪组织石蜡切片制作方法探讨

目的探讨脂肪组织石蜡切片制作方法,改善和提高其切片质量。方法将送检的脂肪组织切开固定于中性甲醛液中;取材后将标本放入脱水机中,调整脱水机设置程序,在常规方法的基础上适当增加组织再固定及脱水、透明时间;包埋时采取挤压组织等改进方法。结果通过改进和调整后制作的脂肪组织蜡块平整无塌陷,石蜡切片优良,厚薄均匀,完整,无空洞、无挤压、镜下组织结构完整清晰,细胞无挤压、重叠等现象。细胞形态清晰,着色均匀艳丽。结论通过上述方法的改进,能尽可能多地减少脂肪组织的脂滴,增加脂肪组织的硬度,使组织和石蜡能很好的融合在一起,有利于切出完整的厚薄均匀的石蜡切片,提高制片质量。     

利用冰冻切片机快速制作木质茎显微切片技术

植物的木质茎,因次生维管组织含量多,细胞壁木质化程度高,质地较硬,徒手切片和石蜡切片均难以获得满意的切片效果。冰冻切片机可对一定硬度的组织进行切片,是制件植物木质茎的制片的有效工具之一。【方法】利用冰冻切片机可在不经化学固定,对一些质地均匀,含水量较高的木质茎直接切片;而对木质坚硬、含水量较少的茎,经过FAA等固定剂固定后,OCT包埋,(-30)～(-25)℃切片,用0.1%甲苯胺蓝染色液染色。【结果】木质茎的冰冻切片结构完整,图像清晰、色彩丰富。【结论】冰冻切片机可用于木质茎的显微切片制作,再结合甲苯胺蓝染色,具有简便、高效、易操作的优点。     

鱼卵切片技术

鱼类成熟的游离卵球,卵黄十分丰富,连续切片很不容易。若按过去的一般方法,切片易碎,显微照相亦欠佳,同时容易褪色,镜片标本不易长期保存。如果在固定、脱水、染色等方面加以改进,切片即不易脆碎,可得比较满意的结果,且处理过程也较简单。     

球孢白僵菌不同感染方式侵染棉铃虫幼虫的毒性比较及组织病理变化

为明确球孢白僵菌在不同感染方式下对棉铃虫的侵染能力, 采用饲喂法和浸渍法测定了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner) 2龄幼虫的致病力, 并通过组织切片显微技术、 扫描电镜技术观察了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫的致病方式。结果表明: 白僵菌HFW-05可通过消化道（饲喂法）成功侵染2龄棉铃虫, 接种感染6 d后的校正死亡率为75.8%。经由体表（浸渍法）接种白僵菌HFW-05的试虫, 试验中体重的变化和取食量与对照相近（6 d校正死亡率仅为17.3%, 不能通过体表达到致病效果）。组织病理学变化表明: 26±1℃条件下, HFW-05菌株对棉铃虫以消化道侵染为主, 侵染后可导致寄主中肠微绒毛脱落严重, 肠壁组织溶解并最终只剩余底膜; 马氏管变形萎缩, 边缘向外突出隆起, 管径变大; 脂肪体萎缩解体, 结构松散; 表皮下的细胞被菌丝侵染破坏。浸渍法接种的试虫, 切片观察处理6 d后试虫, 体内未发现菌丝, 肠壁组织正常完整。扫描电镜观察, 浸渍法接种的分生孢子未能穿透棉铃虫表皮, 而是贴于寄主表皮表面生长, 在湿度合适的条件下, 菌丝生长到一定时间后断裂成为芽生孢子。白僵菌HFW-05可经由消化道对棉铃虫达到较高的致病效果, 在一定程度上弥补外界环境对白僵菌侵染的不利影响, 对今后应用白僵菌进行生物防治具有重要意义。