首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
大鼠动情周期以及胚胎着床过程中,子宫内膜会发生结缔组织的降解与重构。胶原酶3(MMP-13)是降解纤维类胶原的主要蛋白水解酶类之一。其活性在这些过程中的变化值得研究。采用液体闪烁计数测定~3H标记胶原的方法,对大鼠动情周期及早期妊娠子宫中胶原酶-3(MMP-13)的活性进行了测定。结果表明:在动情周期中;激活型MMP-13在间情期最低,酶原型及激活型的MMP-13在动前期达高峰,动情后期酶原型和激活型MMP也明显高于间情期(P<0.05)(Fig.1)。妊娠第1、2天酶原型的MMP-13的活性显著高于第3~7天,第3、4天酶原型和激活型MMP-13的活性均低于妊娠第1、2天(P<0.05);而第5天酶原型MMP-13的活性却显著高于第4、6两天(P<0.05);激活型MMP-13的活性也高于第4天(P<0.05)(Fig.2)。着床部位酶原型MMP-13的活性明显高于非着床部位(P<0.05),而激活型MMP-13的活性则无明显差异(P>0.05)(Fig.3)。大鼠假孕早期子宫中MMP-13的活性变化与正常早期妊娠相似,但其活性却明显低于正常早期妊娠(Fig.4)。结果提示:大鼠子宫中MMP-13参与大鼠动情周期及早期妊娠过程,尤其是在胚胎着床过程中可能起着重要作用。  相似文献   

2.
RT—PCR测定大鼠妊娠早期子宫孕激素受体基因的表达   总被引:4,自引:1,他引:3  
孕激素在妊娠的建立和维持过程中起着非常重要的作用,但目前为止未见有关大鼠子宫 激素受体(PR)基因在该过程中表达情况的系统报道。本和反转偶联聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定了大鼠动情周期和妊娠早期子宫孕激素受体基因的转录,结果表明:1.动情周期中,子吕PRmRNA水平在动情期最高,在动情后期最低,动情期水平约为动情后期的2倍。2.妊娠开始后,子宫PRmRNA水平迅速上地d3-d4(着床前)达  相似文献   

3.
用酶谱法测定了大鼠动情周期以及正常妊娠早期和假孕早期不同时间卵巢中明胶酶A活性的变化,并观察了甾体激素对明胶酶A活性变化的影响,结果表明:在不同的周期及妊娠期卵巢中均存在67kD为主的明胶酶A,但未发现有明胶酶B存在。明胶酶A活性变化如下:1)在大鼠的动情前期明胶酶A的活性最高,间情期最低;2)在妊娠早期(1-7天)的卵巢中,明胶酶A的活性在妊娠第4天达到最高,第1-3天及第5、6天其活性也较高,  相似文献   

4.
目的:观察正常及异位子宫内膜中基质金属蛋白酶-1,-2(MMP-1,-2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因表达的变化,以探讨其与子宫内膜异位症的关系。方法:应用原位技术,采用地高辛生物素标记的cDNA探针(MMP-1,MMP-2,TIMP-1)对子宫内膜异位症患者(EM组)的子宫内膜(14例)、异位病灶组织(20例)及非子宫内膜异位症患者(对照组)的子宫内膜(12例),分3批进行分子杂交检测,结果:3批结果相似。MMP-1,-2,TIMP-1mRNA在腺上皮细胞和间质细胞均有表达,EM组的子宫内膜MMP-1,-2及TIMP-1mRNA表达量与对照组无显著性差异(P>0.05),异位病灶组织的MMP-1,-2mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05),而TIMP-1mRNA表达量则低于对照组(P<0.05)。结论:子宫内膜异位症患者的异位病灶中,存在MMP-1,-2和TIMP-1明显的平衡失调,这可能与子宫内膜异位症的发生、发展和不孕有关。  相似文献   

5.
基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制(TIMPs)的平衡对于维持正常生理过程(如胚胎植入)是至关重要的。MMPs和TIMPs之间平衡机制调节的缺失将会导致肿瘤的转移和发展,近年来,MMP-26和TIMP-4相继被克隆鉴定,但是它们的功能,尤其是在正常胎盘建成和绒癌的功能仍属空白,本应用免疫细胞化学,免疫印迹,酶谱分析,RTPCR和Northen blot等方法检测了二在人早孕细胞滋养层细胞(Cyto)和绒癌细胞系JEG-3中的表达,免疫细胞化学和免疫印迹研究显示,MMP-26在JEG-3中的表达显高于在Cyto中的表达,TIMP-4在JEG-3中的表达显高于在Cyto中的表达(P<0.05);酶谱分析表明:Cyto中MMP-26水解明胶的活性明显低于JEG-3中MMP-26和TIMP-4的mRNA表达,并且MMP-26 mRNA在JEG-3中的表达显高于在Cyto中的表达(P<0.05),以上结果表明,MMP-26和TIMP-4在与正常妊娠和肿瘤转移浸润等有关组织重建过程中起着一定的作用。  相似文献   

6.
卵泡刺激素(FSH)对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生命作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同,关于表皮生长因子(EGF)对腔前卵泡的作用尚不确切,本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素(rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用,利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞-颗粒细胞复合体(OGCs)(Fig.1)。体外每孔30-40个培养物并分别添加胎牛血清(FBS),rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相,结果显示,rechFSH显著促进小鼠OGCs 及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强(P<0.05)(Fig.2),但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内期生长对照组(P<0.05)(Fig.3),说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。  相似文献   

7.
目的 通过大鼠生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)感染模型研究CT初次感染后妊娠大鼠在子宫内膜植入窗期基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的表达对胚胎着床的影响。方法选择成年雌性SD大鼠30只,随机均分为对照组和感染组,感染组通过阴道接种CTD型株,而后在妊娠大鼠的植入窗期(即妊娠第5、6、7天)分别处死大鼠,采用链菌生物素蛋白一过氧化酶连接法和免疫组化测定两组子宫内膜种植窗期MMP-9及TIMP-1。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文小报告管理系统测定感染组和对照组中MMP-9\T1MP-1在单位面积中各项免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度值,并通过SPSS软件对数据差异显著性进行分析。结果在两组大鼠的子宫内膜中MMP-9均呈阳性表达。腺上皮细胞、腔上皮细胞和基质细胞胞浆内均可见棕黄色颗粒沉着,上皮细胞染色强度大于基质;感染组的表达较对照组弱,差异有显著性(P〈0.05)。TIMP-1表达特点和MMP-9相似,感染组的表达也较对照组弱,差异有显著性(P〈0.05)。结论生殖道感染CT后,妊娠大鼠子宫内膜植入窗期MMP-9及TIMP-1的低表达,可能是影响胚胎着床、导致不孕的重要因素。  相似文献   

8.
基质金属蛋白酶(MMPs)家族的作用是降解所有细胞外基质,其活性受其特异性组织抑制因子(TIMPs)的抑制。细胞外基质成分的降解与重组在动物生殖生长过程中起重要作用,其变化可以通过MMPs和TIMPs两者表达水平的变化进行监测。大鼠虽然没有月经形成,但是在其子宫内膜也出现类似灵长类的生殖生物学变化。本文从MMPs和TIMPs两者的表达水平,对大鼠子宫内膜的这些变化进行了研究。于大鼠动情周期的不同时期,将其处死、取子宫制备酶粗提液和组织切片,采用酶谱法(zymoyranhn)和原位杂交方法研究动情周期大鼠子宫中MMP-2和-9的活性变化以及MMP-2、-9和TIMP-1、-2、-3mRNA的表达。并通过光密度扫描方法对酶谱结果进行半定量分析。所用杂交探针见Table1。酶谱结果显示:在动情周期大鼠子宫中只检测到67kDa的MMP-2活性,而没有检测到MMP-9的活性(Fig.1)。MMP-2的活性在动情前期最高,动情期和动情后期次之,间情期最低(Fig.2)。原位杂交结果显示:MMP-2、-9、TIMP-1、-2、-3mRNA主要在子宫内膜基底部的基质细胞中表达。MMP-2和-9mRNA在动情前期、动情期和动  相似文献   

9.
Qi JS  Qiao JT 《生理学报》2001,53(3):198-204
为了确定β-淀粉样蛋白(AβP)在影响神经元电生理特性并导致神经毒作用时的最短活性序列,实验采用片钳技术,在急性分离的大鼠海马CA1区锥体细胞的“内面向外”式膜片上,观察了AβP的31-35和25-35片段对C^2 a激活大电导钾(BK)通道活动的影响,结果显示,浴液中给预5umol/L的AβP31-35后,BK通道的平均开放概率(P0)和开放频率在1-3min内分别减少了85.8%(P<0.01)和72.1%(P<0.01),平均开放时间减少了41.1%(P<0.01),平均电流幅度则无明显改变(P>0.05),给予同样摩尔浓度的AβP25-35后,BK通道平均P0减少了85.5%(P<0.01),平均开放时间减少51.4%,(P<0.05),结果提示:两种AβP片段对海马神经元BK通道具有抑制作用,。这可能与AβP的神经性作用有关,AβP-31-35片段可能是AβP分子中影响细胞电生理特性的最小活性序列。  相似文献   

10.
采用生物活性法和/或酶联免疫吸附法以及乳酸脱氢酶释放法,研究了人类疱疹病毒6型(HHV-6)南京地方株CNS对人外周血单个核细胞(PBMCs)的IL—6、IL-8的诱生和NK活性的影响,并与国外的GS株作比较。结果发现,HHV—6CN8、GS两株病毒感染均可诱导PBMCs产生IL-8,48h达到峰值。两株病毒所诱生的IL-8水平并无显著性差异(P>0.05),并可抑制IL-6的产生,但GS株的抑制作用强于CNS株(P<0.05)。HHV-6体外感染12~24h可以增强NK活性,且CN8株诱导的NK活性高于GS株(P<0.05),之后NK活性逐渐减弱。以上结果提示:HHV-6感染可以通过诱生细胞因子和改变NK活性而影响人的免疫功能,而A组的GS株对免疫功能的抑制作用大于B组的CN8株。  相似文献   

11.
本实验利用原位杂交对小鼠妊娠不同时期胎盘中MMP-2,TIMP-2,-3mRNA的表达进行了研究。结果表明;MMP-2主要在具有很强的侵润能力的海绵滋养层细胞中表达,到妊娠13.5天时,MMP-2的表达明显降低,说明此时的滋养层细胞基本上失去侵润能力。TMIP-1和TMIP-3在滋养层细胞和蜕膜细胞中都有表达,这两种抑制因子的协同表达,一方面能够调控滋养层细胞侵入子宫内膜的深度,另一方面,滋养层细胞自身既表达MMP-2又表达TIMPs,可能对其自身有保护作用,使得MMP的水解功能局限于子宫蜕膜的特定区域。在妊娠10.5天,滋养层巨细胞同时表达TIMP-1,-3mRNA,这可能与其功能的转换是一致的;因为此时小鼠滋养层巨细胞体积最大,且不再增殖,同时其功能屯从侵入型向内分泌型转换。所以,MMPs和TIMPs在小鼠滋养层细胞和子宫蜕膜中的协同表达表明其在着床过程中可能发挥重要作用。  相似文献   

12.
目的:探讨冷束缚应激大鼠血浆及胃黏膜中β-内啡肽(β-endorphine)的变化及作用。方法:制作大鼠冷束缚应激模型,以放免法测定应激0,1/4,2,8h血浆及胃黏膜中β-内啡肽的含量,同时测定胃液pH,胃黏膜溃疡指数(UI),另设两预处理组,分别于应激前15分钟用纳洛酮(1.6mg/kg)和等容量生理盐水颈静脉注射,测定其UI及胃液pH,结果:整个应激过程中血浆及胃黏膜中β-内啡肽的含量无显著变化(P>0.05),应激各组胃黏膜UI均显著高于未应激组(P<0.01),应激15分钟组胃液pH显著高于未应激组(P<0.01),临终前(应激8h组)胃液pH显著高于对照组(P<0.05),阻断阴UI及胃液pH较对照组均无显著变化(P>0.05),结论:应激过程中血浆及胃黏膜β-内啡肽含量稳定,阻断β-内啡肽不影响胃液pH及UI,外周β-内啡肽变化对应激所致胃黏膜损伤可能不起重要作用。  相似文献   

13.
基质金属蛋白酶(MMPs)家族的作用是降解所有细胞外基质,其活性受其特异性组织抑制因子(TIMPs)的抑制。细胞外基质成分的降解与重组在动物生殖生长过程中起重要作用,其变化可以通过MMPs和TIMPs两者表达水平的变化进行监测。大鼠虽然没有月经形成,但是在其子宫内膜也出现类似灵长类的生殖生物学变化。本文从MMPs和TIMPs两者的表达水平,对大鼠子宫内膜的这些变化进行了研究。于大鼠动情周期的不同时期,将算处死,取子宫制备酶粗提液和组织切片,采用酶谱法(zymography)和原位杂交方法研究动情周期大鼠子宫中MMP-2和-9的活性变化以反MMP-2、-9和TIMP-1、-2、-3mRNA的表达。并通过光密度扫描方法对酶谱结果进行半定量分析。所用杂交探针见Table 1.酶谱结果显示:在动情周期大鼠子宫中只检测到67kDa的MMP-2活性,而没有检测到MMP-9的活性(Fig.1)。MMP-2的活性在动情前期最高,动情期和动情后期次之,同情期最低(Flg.2)。原位杂交结果显示:MMP-2、-9、TIMP-1、-2、-3m RNA主要在子宫内膜基底部的基质细胞中表达。MMP-2和-9 mRNA在动情前期、动情期和动情后期子宫内膜基底部的基质细胞和动情期子宫环行肌层中表达均较强,在间情期表达较弱。MMP-9 mRNA在动情期腔上皮和腺上皮细胞中也有较弱的表达(Fig.3)。TIMP-1 mRNA在动情期和动情后期子宫内膜基底部的基质细胞中以及动情期腔上皮和腺上皮细胞中表选较强,在动情前期和间情期表达较弱(Fig.4)。TIMP-2 mRNA在动情期和间情期子宫内膜基底部的基质细胞中以度在动情期上皮细胞中表达较强,在动情前期和动情后期表逮较弱(Fig.4)。TINP-3 mRNA在动情期子宫内膜基底部的基质细胞中表达最强,在动情后期和间情期次之,动情前期表达最弱。TIMP-3 mRNA在动情期子宫环行肌层中也有较强的表达(Fig.5)。由此可见,MMP-2的活性和MMIP-2的基固表达基本一致,MMP-2和-9及其组织抑制因子TIMPs在时间和空间上的表达也基本一致。提示:MMP-2,-9及TIMP-1、-2、-3共同参与了动情周期大鼠子宫内膜的周期性变化。  相似文献   

14.
目的:比较三种不同内膜准备方法中复苏胚胎移植的妊娠结局。方法:对因女方输卵管因素不孕的248个冻融囊胚移植周期的临床资料进行回顾性分析。将内膜准备方法分为自然周期组、全激素替代周期组和半激素替代周期组三种,分别对各组的着床率、临床妊娠率、生化妊娠率和早期流产率进行分析比较。结果:自然周期组的子宫内膜厚度显著高于全激素周期组和半激素替代周期组(P〈0.05),差异有统计学意义。而这三组病人在年龄、不孕年限和移植胚胎数目上则均无明显差异(P〉0.05)。另外,三种内膜准备方法的着床率、临床妊娠率、早期流产率及生化妊娠流产率亦无显著性差异(P〉O.05)。结论:冻融胚胎移植中,对于排卵正常患者我们建议采用自然周期法更为经济、方便。而对于月经周期不正常,排卵障碍的病人应依实际情况采用全激素周期或半激素周期方案。  相似文献   

15.
目的了解2型糖尿病模型GK大鼠生长曲线、主要脏器重量、糖代谢等生物学特性,评价GK大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力。方法采用51只雄性GK大鼠及15只年龄性别匹配的Wistar大鼠作为研究对象。测定13周龄GK、Wistar大鼠空腹血糖、23周龄GK大鼠空腹及随机血糖。随访GK及Wistar大鼠生长曲线,34~46周龄期间血糖、糖化血红蛋白。46周龄时行腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT),计算相关参数评价β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力;之后处死大鼠,脏器称重。比较GK及Wistar大鼠间上述各指标差异。结果13周龄GK大鼠空腹血糖4.74±0.41mmol/L,对照Wistar大鼠1.85±0.44mmol/L(P〈0.001)。23周龄GK大鼠空腹血糖7.88±1.96mmol/L,随机血糖9.91±3.52~13.46±4.13mmol/L。7~20及34~45周龄期间GK大鼠体重高于对照Wistar大鼠(P〈0.05),46周龄时无显著性差异。34~45周龄期间GK大鼠空腹血糖、进食后血糖、HbAlc均高于对照Wistar大鼠(P〈0.05)。IPGTT曲线下面积分析示GK大鼠胰岛素曲线下面积(AUCi)、葡萄糖曲线下面积(AUCg)高于对照Wistar大鼠,胰岛素与葡萄糖曲线下面积比值(AUCi/AUCg)低于对照Wistar大鼠,差异均有显著性(P〈0.05)。GK大鼠肾脏重量高于对照Wistar大鼠(P〈0.05),余主要脏器重量差异无显著性。结论GK大鼠空腹血糖、进食后血糖、HbAlc水平升高,葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力(GSIS)减退,葡萄糖刺激后胰岛素分泌早期相消失,晚期相代偿性增加,具有2型糖尿病特点;体重、血糖等生物学特性稳定。  相似文献   

16.
采用结扎大鼠冠脉造成急性心肌缺血模型,观察了络泰(三七总皂甙的新型剂)抗实验性心肌缺血作用。结果表明,络泰对大鼠实验性急性心肌缺血有一定程度的保护作用,本品50mg/kg显著减少心电图S-T段的上多(P<0.01);络泰5mg/kg、50mg/kg和100mg/kg均显著降低血清CPK(P<0.05,P<0.01);在缩小心肌梗塞范围方面也有一定作用,但统计学上没有显著性。络泰三个剂量组能显著提高SOD活性(P<0.01),降低MDA水平(P<0.05);本品50mg/kg和100mg/kg还能显著增加心肌缺血时血中PGI2水平(P<0.05),提示络泰心肌缺血的保护作用与抗脂过氧化作用有关,其促进PGI2合成作用可能与其抗心肌缺血有关。  相似文献   

17.
目的:观察羌活地黄汤对大鼠佐剂性关节炎软骨中基质金属蛋白酶-1(marxmetalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(matrixmetalloproteinase.13,MMP-13)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissueinhibitorofmetalloprotease-1,TIMP-1)表达的影响。方法:Wistar大鼠32只,随机分为正常对照组、模型组、雷公藤对照组、羌活地黄汤组。制作大鼠佐剂性关节炎模型,造模第14天开始给药。羌活地黄汤组予混有羌活地黄汤的颗粒饲料,雷公藤组给予混有雷公藤多甙的饲料,正常组及模型组均给予普通饲料。第28天分别取各组胫骨平台关节软骨,采用免疫组织化学染色测定软骨中MMP-1、13及T1MP—1表达的阳性指数。结果:模型组MMP-1、MMP-13及TIMP—1表达的阳性指数水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P〈0.01),羌活地黄汤组MMP-1、13及TIMP-1表达阳性指数低于模型组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:羌活地黄汤可能是通过调控软骨细胞外基质中MMP.1、MMP—13及TIMP-1表达变化而维持软骨的动态平衡,从而延缓RA骨骼破坏。  相似文献   

18.
Wang XT  Wu LL  Sun YP  Bai H  Gao ZF  Xu JT 《生理学报》2001,53(3):231-234
采用大鼠主动脉球囊内皮剥脱术制备主动脉狭窄模型,观察Gop/11和GDGF信号转导通路在大鼠主动脉球囊损伤后狭窄时血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用,实验分假手术组,损伤1d组和损伤14d组,观察形态学变化,检测血管紧张素转换酶(ACE)活性和主动脉磷脂酶C(PLC)活性,用免疫印迹法测定主动脉血小板源生长因子(PDGF)受体β和Gaq/11蛋白含量,结果显示,损伤1d,主动脉内皮完全剥脱,VSMC无明显增殖和迁移,内膜无增厚,与假手术组比较,ACE 性增加382.7%(P<0.01),PDGE受体β表达和PLC活性无明显变化,Gaq/11蛋白含量下降20.0%(P<0.05),损伤14d组,主动脉局部有新生内皮出现,中层VSMC大量增殖并向内膜下选移,内膜显著增厚,ACE活性,PDGF受体β表达和PLC活性分别较假手术组升高420.2%(P<0.01),85.0%(P<0.05)和186.2%(P<0.05),Gaq/11蛋白下降33.1%(P<0.01),结果提示,PDGF介导的信号转导通路可能是再狭窄时VSMC增殖的重要信号转导机制。  相似文献   

19.
目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGBl)、核因子-kBp65(NF-kBp65)和基质金属蛋白酶2(MMP2)在子宫内膜腺癌的表达及三者在子宫内膜腺癌的相关性。方法收集本地医院妇科手术的子宫内膜组织存档蜡块126个,其中子宫内膜癌66例,不典型增生性子宫内膜36例,同期其他原因进行诊断性刮宫获得正常增生期子宫内膜24例,采用免疫组化法检测子宫内膜癌,不典型增生性子宫内膜和正常增生期子宫内膜的组织标本中HMGBl、NF-kBp65和MMP2的表达并分析其相关性。结果HMGBl蛋白和NF-kBp65均在子宫内膜细胞的胞核和胞浆中有表达,HMGBl在肿瘤样本、增生样本和正常样本中阳性表达率分别为78.79%、55.56%和25.00%,P%0.05;NF-kBp65在肿瘤样本、增生样本和正常样本阳性表达率分别63.64%,38.89%和0.00%,P%0.05;MMP2主要在细胞胞浆中表达,MMP2在肿瘤样本、增生样本和正常样本阳性表达率分别71.2l%、50.00%和8.33%,P〈O.05。此外,HMGBl在子宫内膜癌的表达与NF-kBp65的表达呈正相关(r=0.67,P〈0.05),且HMGBl、NF-kBp65的表达均与MMP2的表达呈正相关(r=0.41,r=0.36,P〈0.05)。结论HMGBl、NF-kBp65和MMP2在子宫内膜癌组织高表达,且两两表达成正相关,HMGBl、NF-kBp65和MMP2在子宫内膜癌的发生、发展中起促进作用。  相似文献   

20.
复方抗敏灵对哮喘大鼠ICAM—1表达及PLA2的影响   总被引:4,自引:0,他引:4  
李刚  李莉 《微生物学杂志》2000,20(2):39-40,64
采用卵蛋白等致敏大鼠哮喘模型,观察正常组、哮喘组和中药治疗组大鼠支气管肺泡上皮细胞粘附分子(ICAM-1)的表达情况及支气管肺泡灌洗液(BALF)中磷脂酶A2(PLA2)活性变化,以及BALF中细胞总数及细胞分类情况。结果表明:复方抗敏灵能够抑制哮喘大鼠肺组织ICAM-1表达(P<0.01);显著降低哮喘大鼠BALF中PLA2活性(P<0.01);同时,具有降低哮喘大鼠BALF中各种炎性细胞的作用(P<0.01)。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号