不同基因组组合的鱼类抗原基因剂量效应的研究(英文)

本文采用经典免疫遗传学方法研究了鲤鱼不同基因组组合的基因剂量与抗原表达的关系。分别从红鲤（RC）、红鲫（RA）、镜鲤（MC）和鲤鲫二倍体杂种（CA）采血样,制备红细胞悬液。常规方法免疫兔子,使效价高于64,制备抗RC、RA、MC、CA血清。Tab．1为2N、3N、4N鲤鱼来源的红细胞与四种抗血清的凝集实验结果,表明：亲缘关系越近,滴度越高;不过,不同倍性鲤鱼之间,差异不显著。Tab．2为2N、3N、4N鲤鱼来源的红细胞与四种抗血清吸附反应后,与各自靶细胞RC、RA、MC、CA的吸收实验结果,表明：抗血清被吸附后的残留活性与受试者的亲缘关系呈反比,即：亲缘关系越近,残留活性越低。以CA／antiCA组为例,CCA为16,MC为32,表明：两者均含有镜鲤基因组,而后者多一套镜鲤基因组,吸收效价亦有随之增高的趋势。基于Tab．2可以推演出鲤鱼不同基因组组合的系（种）血清学检索表（Tab．3）。     

应用RAPD技术对不同基因组组合生物型遗传多态性的研究

利用RAPD技术对不同基因组合的鱼类进行了基因组指纹图谱构建,在DNA水平上对基因组成分进行了分析,探讨陈春遗传多态性。PARD结果发现,在26个随机引物扩增的产物中,平均每个个体观察到约142个RAPD标记,单个的扩增图谱（Fig.1)可将红鲫（RA）与其它组合区分开,还可将鲫鲫杂种二倍体（CA)鲫鲤杂种三倍体（CAA）和人工复合三倍体鲤（CCA）区分开;S－8引物（Fig.2)可区分开红鲤（RC）和镜锂（MC）;S－45引物（Fig.3)可区分开RC和CA;S－22引物则可区分开CAA和CCA。六种生物型均存在基因组特异性的图谱即各种独特的“诊断性”图谱,作者由此建立了详细的分子标记检索表（Table1）。通过对RAPD图谱的量化分析。利用UPGMA构建了不同生物型的遗传关系树图,反映了鲤鲫及各种组合生物型之间的遗传相似关系:RC的MC属同一种系,聚为一族;CAA和CA基因组类型相同,聚为一族;CCA虽自成一体,但可与各种生物型内个体间的遗传相似率均大于群体间的（P＜0．05）。此外,本研究还对基因剂量效应对PAPD扩增图谱的影响进行了探讨。综合以上结果,RAPD技术有简捷,灵魂、花费少等特点、在鱼类品系鉴定和遗传多态性研究方面具有血型血清学和蛋白质多态性等其它技术无可比拟的优势。     

鲤鱼不同品种（系）红血球抗原特异性的初步研究

用血球凝集和血清吸收试验的方法,对若干个鲤鱼品种及鲤鱼人工雌核发育系的红血球中的某些同种异型抗原纯合性进行了初步研究。①以抗雌核发育红鲤抗血清(abs／R)为试剂,三个雌核发育系(R8305,R8413,RMGF1)的RBC反应值分别为1521—2360,1521-2028,853—1521,普通红鲤、镜鲤、白鲢的反应值在80—782。②abs／8305,与abs／8413经靶细胞相互吸收后的残留活性显著降低(均为320),而以白鲢RBC吸收后抗血清活性不变。作者认为这部分抗原在鲤鱼种以下的品种和品系中具有特异性,可考虑将其作为鱼类品系鉴定的一种手段。     

人工复合三倍体鲤与亲本相对DNA含量及倍性分析

本文通过显微荧光光度术测量了人工复合三倍体鲤的红细胞及亲本红鲤、红鲫与散鳞镜鲤个体的红细胞和精子的相对DNA含量。结果表明：每一种亲本的精子DNA含量是其红细胞DNA含量的二分之一,人工复合三倍体鲤DNA含量等于三个亲本精子DNA含量之和,为三个亲本血液红细胞DNA含量之和的二分之一。以外周血淋巴细胞制备染色体标本,人工复合三倍体鲤染色体数为150,其亲本红鲤、红鲫和散鳞镜鲤的二倍体染色体数均为100。研究进一步证明人工复合三倍体鲤与二倍体亲本的染色体倍性和相对DNA含量存在着明显的相关性。     

几种鲤鱼染色体核仁组织者的银染观察

本文对鲤属（Cyprinus）春鲤C.longipectoralis杞麓鲤C.carpio chilia、以及鲤鱼C.carpio四种品系的核型与核仁组织者（NORs）进行了银染观察,结果表明: 1.几种鲤鱼的染色体数均为2n=100,核型组成均包括中着丝点（A组）、亚中着丝点（B组）和端着丝点或近端着丝点（C组）染色体,但构成比例彼此稍有差异。春鲤及杞麓鲤核型为22m 30sm 48st.t（昝瑞光,1980）;鲤鱼四种品系:荷包鲤、玻璃鲤、兴国红鲤及青鲤的核型为28m 22sm 50st.t,在C组第3对上有一对具随体的染色体,四种品系鲤鱼随体的形态,大小各不相同。 2.几种鲤鱼均有一对同源染色体带有NORS,且均出现在St染色体的短臂上。 3.几种鲤鱼的NORs均呈现显著的多态性。此外还观察到Ag-NORs的联合现象。     

人工复合三倍体鲤鱼多精受精的细胞学基础研究(英文)

为了获取一个可育的、没有遗传分离的、快速生长的养殖品系,我们通过人工方法诱导了人工复合三倍体鲤鱼。它含有两套鲤鱼（一套是散鳞镜鲤、一套是兴国红鲤）和一套鲫鱼（红鲫）共三套完整的染色体组。在这种复合三倍体中,发现有些受精卵具有罕见于硬骨鱼类中的受精生物学现象,即多精受精。这是一个非常有趣的生物学现象。为了了解其潜在的机制,我们以普通红鲤作为父本、经过干法授精,通过扫描电子显微镜对其受精的早期过程进行了超微结构研究,并以普通二倍体鲤鱼受精的早期过程作为对照。（１）通过对三次产卵季节收集的近１０００余粒未受精的成熟人工复合三倍体卵细胞进行观察,发现：每个成熟卵子在其动物极上只有一个敞开的受精孔。它由前庭和精孔管组成。前庭对外开口的平均半径为１０～１２微米。精孔管的外孔径为３．００～３．５０微米（Ｆｉｇ．Ａ＆Ｂ）,只比精子头部直径（２．８０～３．００微米）稍大一点。排除了人工复合三倍体鲤鱼成熟卵细胞一次允许两个精子并排进入的可能性。（２）人工复合三倍体鲤鱼在受精后约１５～３０秒,可以看见大量精子聚集在受精孔的前庭区域（Ｆｉｇ．Ｃ）。而在卵子表面的其它区域,没有发现有精子附着的现象。表明：在受精孔的前庭区域有一些吸引     

杂交鲤的生产和推广

1974年湖北省水生生物研究所送给我场一批散鳞镜鲤、龙州镜鲤和兴国红鲤。1975和1976年并派出技术人员到我场协助进行鲤鱼品种间的杂交试验,两年共繁殖了杂交鲤苗7113,000多尾,经过饲养,效果良好,深受群众欢迎,并把它誉为“丰鲤”。     

杂交鲤的生产和推广

1974年湖北省水生生物研究所送给我场一批散鳞镜鲤、龙州镜鲤和兴国红鲤。1975和1976年并派出技术人员到我场协助进行鲤鱼品种间的杂交试验,两年共繁殖了杂交鲤苗713,000多尾,经过饲养,效果良好,深受群众欢迎,并把它誉为“丰鲤”。       

散鳞镜鲤与兴国红鲤杂种一代生产效果的初步观察

鲤鱼是我国分布最广泛的经济鱼类,在淡水渔业中一向占很重要的地位。但现有的鲤鱼品种在经济性状上都存在着某些缺点,如野鲤瘦长,红鲤头大腹大,镜鲤竞争力差等等;由于近亲交配带来的不良影响,也在生产中不同程度地表现出来。因此,选育生长快、适应性和抗病力都较强的鲤鱼优良品种,具有重要的渔业价值。     

散鳞镜鲤与兴国红鲤杂种一代生产效果的初步观察

鲤鱼是我国分布最广泛的经济鱼类,在淡水渔业中一向占很重要的地位。但现有的鲤鱼品种在经济性状上都存在着某些缺点,如野鲤瘦长,红鲤头大腹大,镜鲤竞争力差等等;由于近亲交配带来的不良影响,也在生产中不同程度地表现出来。因此,选育生长快、适应性和抗病力都较强的鲤鱼优良品种,具有重要的渔业价值。       

应用RAPD技术对不同基因组组合生物型遗传多态性的研究(英文)

利用ＲＡＰＤ技术对不同基因组合的鱼类进行了基因组指纹图谱构建,在ＤＮＡ水平上对基因组成分进行了分析,探讨了其遗传多态性。ＲＡＰＤ结果发现,在２６个随机引物扩增的产物中,平均每个个体观察到约１４２个ＲＡＰＤ标记,单个引物获得的标记平均为５．４。其中４个引物扩增的图谱可将不同的生物型区分开：Ｓ－２６引物的扩增图谱（Ｆｉｇ．１）可将红鲫（ＲＡ）与其它组合区分开,还可将鲤鲫杂种一倍体（ＣＡ）与鲫鲤杂种三倍体（ＣＡＡ）和人工复合三倍体鲤（ＣＣＡ）区分开;Ｓ－８引物（Ｆｉｇ．２）可区分开红鲤（ＲＣ）和镜鲤（ＭＣ）;Ｓ－４５引物（Ｆｉｇ．３）可区分开ＲＣ和ＣＡ;Ｓ－２２引物则可区分开ＣＡＡ和ＣＣＡ。六种生物型均存在基因组特异性的图谱即各自独特的“诊断性”图谱,作者由此建立了详细的分子标记检索表（Ｔａｂｌｅ１）。通过对ＲＡＰＤ图谱的量化分析,利用ＵＰＧＭＡ构建了不同生物型的遗传关系树图;反映了鲤鲫及各种组合生物型之间的遗传相似关系：ＲＣ和ＭＣ属同一种系,聚为一族;ＣＡＡ和ＣＡ基因组类型相同,聚为一族;ＣＣＡ虽自成一体,但可与ＣＡＡ和ＣＡ聚为一族;而ＲＡ与其它组合遗传距离较远,自成一族。ＲＡＰＤ的结果也表明各种生物型内个体间     

异源四倍体鲫鲤及其原始父母本细胞周期蛋白B基因克隆与分子遗传分析

细胞周期蛋白(cyclin)B是真核细胞周期运转中调控G2期至M期转化的关键因子.本实验根据斑马鱼细胞周期蛋白 B1基因的剪切方式,设计3对特异于金鱼和银鲫细胞周期蛋白B基因外显子区兼并引物,首次扩增出异源四倍体鲫鲤及其原始亲本红鲫和鲤鱼细胞周期蛋白B基因2条大小分别约为2.4 kb和2.1 kb的片段.测序及比对分析表明：这3种鱼的细胞周期蛋白B基因2个片段均包含8个外显子和7个内含子.内含子剪切位点符合GT/AG规则,推测细胞周期蛋白B基因2个片段可能是细胞周期蛋白B基因的2种存在形式.异源四倍体鲫鲤与其原始父母本细胞周期蛋白B基因片段序列的比较结果表明：无论是外显子区还是内含子区,异源四倍体鲫鲤与其原始亲本都具有较高的遗传相似性,在1 025 bp的外显子序列中相同的碱基位点数达963个,为异源四倍体鲫鲤来源于红鲫和鲤鱼提供了分子证据;同时,异源四倍体鲫鲤与其原始亲本差异碱基位点的存在又表明这一独特的多倍体物种与其原始亲本存在着进化上的变异.此外,还分别以细胞周期蛋白B基因外显子和内含子序列构建了包括异源四倍体鲫鲤及其原始父母本在内的系统进化树.结果初步表明：对于亲缘关系较近的物种,用外显子和内含子序列构建的系统进化树与传统的物种进化树一致;而对于亲缘关系较远的物种,用内含子序列构建的进化树与传统的物种进化顺序存在较大差异.     

应用微卫星标记对不同基因组组合生物型遗传多态性的研究(英文)

微卫星ＤＮＡ在真核基因组中分布频率为每２０～３０ｋｂ一个,具有片段长度短、序列 高度重复、种类多以及高度多态的特点,极适于遗传变异研究。本文报道：采用微卫星 标记对不同基因组组合的鱼类进行了基因组指纹图谱构建。受试材料为红鲤（ＲＣ）、红鲫 （ＲＡ）、镜鲤（ＭＣ）、鲤鲫杂种二倍体（ＣＡ）鲫鲤杂种三倍体（ＣＡＡ）,人工复合三倍体（ＣＣＡ） 等六种生物型。微卫星ＤＮＡ座位（探针）ＭＦＷ２、ＭＦＷ８和ＭＦＷ１６各自存在１２、１６和 １０个等位基因（Ｆｉｇ．１,２,＆３）。通过对微卫星标记图谱的量化分析,利用ＵＰＧＭＡ构建了 不同生物型的遗传关系树系图（Ｔａｂｌｅ　１,Ｆｉｇ．４）。本研究发现,徽卫星和ＲＡＰＤ分析两种 手段反映六种生物型之间的聚类模式完全一致。然而由微卫星标记获得的生物型内和生 物型之间的遗传距离均大于ＲＡＰＤ的,此结果表明微卫星标记在揭示群体内个体间差 异上有独到之处。     

鲤鲫人工多倍体谱系中同工酶和蛋白的基因表达

通过对红鲤、红鲫、镜鲤、鲤鲫杂种二倍体一代,二代,鲤鲫杂种三倍体,鲤鲫复合三倍体,鲤鲫杂种四倍体一代,二代的同工酶及蛋白电泳谱型和扫描数据分析表明,在鲤鲫人工多倍体谱系中,亲代的等位基因在杂交子代中共有四种表达模式;（1）两亲本基因在子代中共同表达,即共显表达;（2）父本的基因表达受到部分或完全的抑制,即母本的基因优先得到表达;（3）母本的基因表达受到抑制,父本的基因得到表达;（4）双亲本的基因表达均受到一定程度的抑制或都不表达。其中第一种表达模式是主要的模式。根据以上基因在杂交子代中的表达特点,可用同工酶和蛋白电泳图谱将鲤鲫人工多倍体谱系的各种生物型逐一加以区分。     

藏北3种裸鲤同工酶的电泳分析及物种分化的探讨

对藏北高原３种裸鲤的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）和脂酶（ＥＳＴ）进行电泳分析的结果表明,３种裸鲤酶谱均表现出种间的差别,而且在同一种群个体之间也存在着明显的分化,但无性别差异。３种裸鲤被检测的３种同工酶均有沉默基因表达的现象,重复基因ＬＤＨ－Ａ^2、ＬＤＨ－Ｂ^2、s-MDH-A^2和m-MDH-B^2也在部分个体中表达。遗传距离分析表明,色林错裸鲤（Ｇ.selincuoensis)与错鄂裸鲤（Ｇ．cuoensis)之间较之于与纳木错裸鲤（Ｇ．namensis)有更近的亲缘关系。与其他四倍体鱼类相比,裸鲤鱼类同工酶在重复基因和沉默基因上都有较高的表达频率,这种情况说明裸鲤鱼类目前可能还外于多倍化后进化的早期过程并早于胭脂鱼类所处的相应时期,这与裂腹鱼类起源较晚以及青藏高原业已存在的恶劣环境条件直接相关。     

红细胞嘧啶-5′-核苷酸酶的纯化及其抗血清的制备

利用UMP-ADH-Sepharose4B亲和层析的方法纯化正常人红细胞嘧啶-5′-核苷酸酶（P5′N, EC.3.1.3.5）.结果表明：利用UMP-ADH-Sepharose4B亲和层析柱可有效、专一性吸附P5′N,纯化液经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条蛋白质带,测定纯化物相对分子质量28×10³,等电点（pI）5.2. 纯化物免疫家兔后,得兔抗人P5′N抗血清,为探讨遗传性及获得性P5′N缺陷奠定了基础.     

杂交鲤的养殖试验小结

为了探索北京地区杂交鲤鱼的放养密度和生长规律,我们进行了杂交鲤的养殖试验。一、材料与方法试验用的散鳞镜鲤和兴国红鲤,由湖北省水生生物研究所赠送本站。并根据湖北省水生生物研究所的经验,我站于1975年开始进行了本试验。       

应用微卫星多态分析四个鲤鱼群体的遗传多样性

选择12个斑马鱼功能基因的微卫星标记和12个鲤鱼微卫星标记,检测黑龙江鲤(Cyprinus carpiohaematopterusTemminck et Schlegel)、散鳞镜鲤(C.carpio)、荷包红鲤抗寒品系(C.carpiovar.wuyuanensis)、松浦鲤(C.carpioSongpu carp)的群体遗传多样性。共检测到3882个扩增片段,长度为126～489bp,在群体间扩增出1～5个等位基因不等,共计59个等位基因,平均等位基因2.46个。数据经PHYLIP V3.6软件估算和MEGA3软件作图,确立4个群体间的亲缘关系。并应用Bootstrap检验估计系统树中节点的自引导值,并进行了系统发生分析。结果表明①4个群体检测的有效等位基因数都在55个以上,平均观测杂合度为0.36～0.43,平均期望杂合度为0.49～0.53,平均多态信息含量为0.21～0.25,说明这几个群体多态性属于中度偏高水平,遗传多样性较高;②群体间相似系数都在0.84以上,遗传距离较近,为0.067～0.170,与前人研究结果一致。聚类分析显示,松浦鲤与散鳞镜鲤亲缘关系最近,荷包红鲤抗寒品系与它们的亲缘关系较黑龙江鲤更近;③在3个斑马鱼功能基因相关的微卫星位点上,黑龙江鲤缺失特异扩增条带,这可能与几种鱼类的育成史有关。     

中国红鲤线粒体COⅡ基因的遗传变异和亲缘关系

通过线粒体COⅡ基因的序列分析,研究了我国4种红鲤——兴国红鲤(C．c．var．singuonensis)、荷包红鲤(C．c．var．wuyuanensis)、玻璃红鲤(C．c．var．wananensis)、瓯江彩鲤(C．c．var．color)和1种野鲤(Cyprinus carpio)的遗传变异和亲缘关系。结果表明：在所分析的607bp片段中,共有19个核苷酸变异位点,可归结为15种基因单倍型,其中5个变异位点可作为群体鉴别的单核苷酸标记(SNP);荷包红鲤的基因多样性(h)和核苷酸多样性(π)最高,玻璃红鲤最低;所有红鲤均存在极显著的遗传分化,其中兴国红鲤与玻璃红鲤的遗传分化指数(Fst)最高,而兴国红鲤与瓯江彩鲤的遗传分化指数最低。用邻接法构建的分子系统树表明,兴国红鲤与瓯江彩鲤属同一进化分支,而玻璃红鲤与荷包红鲤属另一进化分支。     

红芪、黄芪及配伍当归对环磷酰胺所致血虚模型小鼠的干预作用

目的：观察红芪、黄芪及配伍当归对环磷酰胺（CTX）所致血虚模型小鼠的干预作用。方法：昆明种小鼠随机分为7组,每组10只。采用CTX复制小鼠血虚模型,正常组与模型组小鼠用生理盐水灌胃,阳性对照组小鼠给予驴胶补血颗粒,四个给药组分别灌胃红芪、黄芪、红芪-当归组（5：1）及黄芪-当归组（5：1）,连续灌胃7 d后,采用血细胞分析仪测定各组小鼠外周红细胞（RBC）、淋巴细胞（LYM）、红细胞压积（HCT）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）,取脾脏、胸腺、股骨,计算脾脏指数（SI）、胸腺指数（TI）的变化,进行网织红细胞计数（RC）、骨髓有核细胞计数,并对股骨进行病理切片观察。结果：与正常组比较,模型组小鼠RBC、WBC、HCT、PLT、LYM等含量均降低（P<0.05）,与模型组比较,红芪及不同配伍各组小鼠中SI、TI均显著升高（P<0.05）,红芪-当归组及黄芪-当归组可显著提高外周RBC、HCT、WBC、PLT、LYM的含量（P<0.05）,可升高RC及骨髓有核细胞数量（P<0.05）,股骨病理切片显示有所改善。结论：红芪-当归（5：1）与黄芪-当归（5：1）配伍对血虚模型小鼠的改善作用及补血作用优于红芪、黄芪的单独作用,黄芪-当归（5：1）效果更佳。