豌豆球蛋白及其亚基的分离提纯

本文详细地叙述了提取、分离、提纯豌豆球蛋白及其亚基的方法:用硼酸钠缓冲液提取豌豆球蛋白,用85%饱和度硫酸铵沉淀除去其它蛋白质杂质,再用凝胶柱进一步提纯;提纯的豌豆球蛋白通过DE_(52)-纤维素阴离子树脂柱(8M尿素作为变性分离试剂)和S_(200)凝胶柱(70%甲酸作为变性分离试剂)则可分离出豌豆球蛋白的各个亚基;试验结果还表明:在pH8.5时,33,000的亚基携带少量负电荷;而12,000的亚基携带大量负电荷。     

有关动物学国外学术会议消息(二)

1987年 (1)3月29—4月4日 蛋白质提纯的微观和宏观机理学术讨论会,在美国,科洛拉多费斯科召开。讨论题目是:1.微提纯的分析;2.提纯和贮存蛋白质的保护层析法和新的分离概念。联系地址:UCLA Symposia,Molecular Biology Institute,University of Califor     

多种血清小分子蛋白分离提纯方法比较研究

目的:比较不同磁珠及超滤离心管时血清小分子蛋白的分离提纯能力,筛选较优的分离提纯方法.方法:分别利用Cu2+螯合磁珠(MB-IMAC Cu)、弱阳离子磁珠(MB-WCX)、反相C18磁珠(MB-RPC18)及3种不同型号的超滤离心管对同样4例血清标本进行血清小分子蛋白的分离提纯,比较6种方法对血清高丰度大蛋白的去除能力和处理后血清小分子蛋白质谱图的质量.结果:6种不同的方法均有明显对血清高丰度蛋白的去除能力,其中以超滤离心管效果最明显.在血清小分子蛋白质谱图质量上,磁珠处理后血清生成的质谱图质量更好,其中MB.WCX处理后血清质谱图中总峰数量最多,且在各分子量范围均分布均匀,适于后期鉴定.结论:利用MB.WCX对原始血清进行分离提纯能够获得质量较好的血清小分子蛋白质谱图,可以为进一步实验中寻找差异小分子蛋白并实现兴趣蛋白鉴定奠定良好基础.     

纤维结合蛋白的作用与临床意义

纤维结合蛋白(fibronectin,Fn)是近15年中被人们重视的一种蛋白质。早在1948年Morrison等发现,血液在低温条件下有一种与纤维蛋白原组分相仿,但又不同于纤维蛋白原的蛋白质析出,称为冷非溶性球蛋白。1957年Smith等发现,正常人或病人的血浆中,加肝素后,在较低温度下,都可获得该冷沉淀物。直到1970年Mosesson等才分离和提纯了这种蛋白质。近十余年,国外许多学者对这一种蛋白质的结构、性质、生物学活性和临床意义进行了大量的研究,认为它是一种多功能的蛋白质,对它的命名不下十余种。目前,倾向用纤维结合蛋白的名称。一、Fn的生化性质和分子结构Rennard等通过鼠-人细胞杂交试验,应用特异的酶免疫法定位研究,进一步证实     

拮抗放线菌Y-71的鉴定及其代谢活性物质的性质

本研究从云南采集的腐质土壤样品中分离筛选到一株拮抗放线菌Y-71,通过形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞化学组分和基于16SrRNA基因序列的相似性分析等研究,鉴定菌株Y-71为脱叶链霉菌(Streptomyces exfoliatus)。抗菌谱测定及稳定性研究结果表明,菌株Y-71发酵液抑菌谱较广,对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌都有较好的抑制作用;其抑菌活性物质对温度敏感,在70°C处理后抑菌活性丧失;在pH2-8条件下稳定;不能被蛋白酶降解,可初步判定此活性物质不属于蛋白质或肽类物质。本研究为该菌株今后的应用、抗生素的分离提纯奠定了基础。     

男性滤泡刺激素分泌的调节——抑制素及血浆性激素的作用

本文讨论:(1)抑制素是睾丸支柱细胞分泌的蛋白质,它选择性地抑制垂体分泌FSH。目前尚无提纯的制剂。(2)切除睾丸即无抑制素时,血浆睾丸酮水平的降低及伴随的血浆雌二醇水平的相对升高也可导致上述血清FSH及LH分泌的分离,此时血清PRL水平也升高。著者认为可能这两种调节因素的作用是相辅相成的。     

男性滤泡刺激素分泌的调节——抑制素及血浆性激素的作用

本文讨论: (1) 抑制素是睾丸支柱细胞分泌的蛋白质,它选择性地抑制垂体分泌 FSH.目前尚无提纯的制剂. (2) 切除睾丸即无抑制素时,血浆睾丸酮水平的降低及伴随的血浆雌二醇水平的相对升高也可导致上述血清 FSH 及 LH 分泌的分离,此时血清 PRL 水平也升高.著者认为可能这两种调节因素的作用是相辅相成的.     

农用抗菌素402的研究 Ⅱ.分离、提纯和理化性质

直丝淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulorectus)“402”产生的农用抗菌素“402”(以下简称“402”),不论在离体或整体条件下对麦类赤霉病都有抑制作用。本文报道“402”的分离、提纯和理化性质的研究结果。     

应用亲和层析法提纯鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H_(19)识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。     

日本学者发现生物体内能量转换的机制

德岛大学药学院副教授樋口富彦等人在世界上首先发现并分离和提纯出一种蛋白质,这种蛋白质在细胞内制造一切生物的活动能源——腺苷三磷酸时起着极其重要的作用,据认为,它把以食物形式摄取的能源转换为生物体可利用的能源,在某种意义上说就是一种能源转换装置.过去,人们还根本不知道存在着具有这种性质的蛋白质,因此,这作为一个在生物化学和     

山溪鲵皮肤分泌物抗菌活性的初步研究

山溪鲵皮肤分泌物和经两次SephadexG-25层析分离得到的初步提纯样品经抗菌实验,发现具有抗菌活性。其中的抗菌活性成分为蛋白质性质,分子量约为20kD,具有在高温下短时间、常温下长时间保持稳定的特性。初步提纯样品经尿素SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为两条带;经反相高效液相层析(RP-HPLC)检测为13个峰。此提纯方法的活性回收率为46．7％。这为进一步的纯化和性质鉴定工作奠定了基础。     

大肠杆菌溶菌物的羟基磷灰石柱层析分离

我们在进行脱氧核糖核酸(DNA)复制的调节控制研究时,感到有必要建立某些分离DNA与RNA、蛋白质的技术,特别是小量实验材料中各种生物大分子物质的分离,以提供     

基因工程国内外进展和差距

基因工程是分子水平上的遗传工程。它主要运用重组DNA技术,在特殊酶的作用下,在体外人工连接来自不同生物体的目的基因于有自主复制能力的载体(质粒)DNA中,建成重组DNA的质粒:将此重组质粒送入受体生物细胞去复制和表达,达到遗传物质的转移,产生所需蛋白质。重组DNA技术的主要环节有:目的基因的分离或克隆、体外重组、载体传递或转染和复制、受体细胞繁殖和表达、蛋白质提纯和制备等。基因工程的最大特点是,打破了生物种间界限,使微生物、动植物、甚至人类之间的遗传物质可以互相转移和重组。     

亲和层析法分离纯化猪肺血管紧张素转换酶

亲和胶合成实验以双环氧化合物1,4-丁二醇-2-缩水甘油醚(1,4-butanediol diglycidyl ether)为活化体及连接臂,在硼氢化钠(NaBH)存在的碱性条件下,将载体Sepharose CL―4B与雷诺普利(lisinopril)共价连接在一起,成功合成亲和层析胶,并利用亲和层析胶对猪肺血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme, ACE）进行分离提纯.猪肺组织匀浆经1.6～2.6 mol/L硫酸铵分级沉淀、透析平衡、亲和柱分离等步骤,从200 g猪肺中提纯得到0.79 mg ACE蛋白,酶活力回收11.9％,比活力38.8 U/mg.与层析前的酶液比较,亲和层析一步提纯可达264倍;与肺匀浆液比较提纯达808倍.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见,提纯的猪肺ACE为一条带,分子质量约为180 ku.     

小鼠肝白蛋白信息核糖核酸的提纯

特定蛋白质的信息核糖核酸(mRNA)的提纯,是分子生物学的重要研究课题。纯化的mRNA除用来作结构分析外,是一个非常重要的工具,经过同位素标记后,可以进行核酸的分子杂交(包括原位杂交)以探测细胞基因的组成和定位,也可以通过反转录酶合成互补性脱氧核糖核酸(。DNA)用以检测基因转录产物,研究基因表达的调控;进一步还可应用于遗传工程的研究。目前已有十种左右的mRNA得到提纯(佐野浩,1977)。本文报道了我们依据mRNA分子量大小和3‘末端聚腺漂岭核昔酸的结构特性,用亲和层析和制备型凝胶电泳,与ROsen等(1975)提纯卵清蛋白mRNA的方法近似,从小鼠肝中提纯白蛋白mRNA,为我们进一步研究肝癌细胞白蛋白基因表达失常提供必要条件。     

番茄幼苗盐胁迫响应蛋白质组分析

采用营养液栽培,以盐敏感型番茄品种M82为试材,利用双向电泳(2-DE)研究盐胁迫处理下幼苗叶片蛋白质的表达谱,并采用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术进行差异蛋白质的分离及质谱鉴定。结果表明:(1)盐胁迫处理下,利用2-DE获得差异显著蛋白点20个,其中17个蛋白质点丰度上调表达,3个蛋白质点丰度下调表达。(2)通过质谱分析和蛋白质NCBInr数据库检索,共鉴定出19个差异蛋白,分别为果糖-二磷酸醛缩酶、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等及3个功能未知蛋白;这些鉴定出的差异蛋白质与能量代谢、光合作用、蛋白合成、氧化还原平衡等过程相关,暗示所分离鉴定的蛋白可能参与了番茄的盐胁迫响应,为进一步研究番茄抗逆机制奠定基础。     

钙调素

钙调素(Calmodulin)是美国(田纳西州立大学张槐耀于1967年在研究磷酸二酯酶活性时偶然发现的,是一种和钙结合的蛋白质.超初还认为它是磷酸二酯酶的激活剂,后来经分离,证明它是蛋白质(1～3).1978年,命名为Calmodulin.根据全国第一     

淋巴因子的研究——Ⅰ.正常人淋巴因子的分离及鉴定

本文作者对正常人外周血淋巴细胞的大量分离和激活条件以及淋巴因子的分离提纯进行了研究,并获得一定量的淋巴因子(不含正常血清蛋白成分或外源凝集素)。通过琼脂糖电泳、连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和交联葡聚糖凝胶过滤证明淋巴因子是一组在泳动速度、分子量、等电点等方面都极不均一的蛋白质。用淋巴因子制备的多价抗血清进行线状免疫电泳证明:正常人少量全血经PHA或CbnA激活6～24小时,在去血球的上层液中,在pH8.6向正极和向负极泳动的某些淋巴因子生成量均较对照组明显增多,这种差别有可能在一定程度上反映T淋巴细胞的功能。     

淋巴因子的研究——Ⅰ.正常人淋巴因子的分离及鉴定

本文作者对正常人外周血淋巴细胞的大量分离和激活条件以及淋巴因子的分离提纯进行了研究,并获得一定量的淋巴因子(不含正常血清蛋白成分或外源凝集素)。通过琼脂糖电泳、连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和交联葡聚糖凝胶过滤证明淋巴因子是一组在泳动速度、分子量、等电点等方面都极不均一的蛋白质。用淋巴因子制备的多价抗血清进行线状免疫电泳证明:正常人少量全血经PHA 或ConA 激活6～24小时,在去血球的上层液中,在pH8.6向正极和向负极泳动的某些淋巴因子生成量均较对照组明显增多,这种差别有可能在一定程度上反映T 淋巴细胞的功能。     

藻胆体核亚基ApcD定点突变及体内重组功能研究

在对Anabaena sp.PCC7120藻胆体核亚基ApcD结合色素PCB的体内重组中,发现色素蛋白在提纯前后最大吸收峰和荧光峰发生了红移,从提纯前的605nm及633nm变为提纯后的650nm及665nm.为了研究该现象的原因,构建了ApcD的8个突变体,重组结果显示:突变体ApcD(Y88I)色素蛋白在提纯后的吸收光谱和荧光光谱较提纯前均多出一个峰,分别为668nm,690nm;ApcD(W59Q)、ApcD(Y73A)、ApcD(W87E)色素蛋白在提纯前后的吸收光谱和荧光光谱一致;ApcD(M126S)、ApcD(Y116S)、ApcD(M160T)色素蛋白在提纯前后的吸收光谱一致,而提纯后的荧光峰位置较提纯前分别红移了5nm、7nm和10nm;ApcD(M115I)色素蛋白在提纯前后的吸收光谱和荧光光谱均发生了红移,从提纯前的605nm和633nm变为提纯后的638nm和655nm.这些色素蛋白在酸性尿素溶液变性条件下的最大吸收峰始终在662nm,表明辅基色素仍然是藻蓝胆素;在对PCB-ApcD、PCB-ApcD(Y116S)及PCB-ApcD(M160T)的圆二色谱分析发现,该两个氨基酸的突变均...