脑啡肽基因的合成 Ⅰ.d-GATCCTAGA的合成

本文报道了脑啡肽基因下链二十六核苷酸中九核苷酸d-GATCCTAGA的合成。合成系采用改良的三酯法,即先合成d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~(Bs)T_(?OH)、d-_(Dmt)C_?~(An)C_?~(An)T_(?OH)和d-_(Dmt)A_?~(Bs)G_?~(ib)A_(OBs)~(Bz)三个片段,然后由d-_(Dmt)A_?(Bs)G_?~(ib)A_(OBz)~(Bz)脱去5′-Dmt基后依次同d-_(Dmt)C_?~(An)C_?~(An)T_(?OH)和d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~(Bz)T_(?OH)向5′端延伸缩合得到产物d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~BsT_?C_?~(An)C_?~(An)T_?A_?~(Bs)G_?~(ib)A_((OBs)_o)~(Bs) d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~(Bs)T_(?OH)和d-_(Dmt)C_?~(An)C_?~(An)T_(?OH)是通过d-_(Dmt)G_?~(ib)A_(?OH)~(Bs)和d-_(Dmt)C_?~(An)C_(?OH)~(An)分别同过量的d-T缩合,然后再用对氯苯磷酰双三唑对产物的3′-OH进行磷酰化得到。d-_(Dmt)A_?~(Bs)G_?~(ib)A_(OBz)~(Bs)则是由d-_(Dmt)A_?~(Bz)G_(?OH)~(ib)同d-A_(OBs)~(Bs)反应得到。在所有的缩合反应中,都采用2,4,6-三甲基苯磺酰硝基咪唑为缩合剂,缩合产物都以硅胶短往层析分离纯化。除保护的九核苷酸未进行硅胶柱层析纯化之外,各中间片段经硅胶柱层析纯化后的收率都在75%以上。合成的全保护九核苷酸用浓氨水和80%醋酸相继脱去全部保护基后,以DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析(含7M尿素)分离纯化,经去盐后得到d-GATCCTAGA,收率31.7%。产物的5′-OH用~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后,作电泳-同系层析双向图谱,证明核苷酸排列顺序正确。     

脑啡肽基因的合成——Ⅱ.d-GGAAACCA的合成

本文报道了脑啡肽基因下链26核苷酸中八核苷酸片段d-GGAAACCA(10～17)的合成。合成系采用改良的三酯法,先合成和,再用对氯苯基磷酰二氯在1,2,4-三氮唑存在下磷酰化得到和,然后由bzAobz开始,依次同和缩合得到。在所有的缩合反应中,缩合剂均采用2,4,6-三甲基苯磺酰硝基咪唑。所得的全保护八核苷酸用浓氨水和80%醋酸脱去保护基后再经DEAE-葡聚糖凝胶A-25(7M尿素)柱层析分离纯化并去盐后,即得到d-GGAAACCA。产物经5'-~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的电泳-同系层析双向图谱能够得到预期的核苷酸排列顺序。     

脑啡肽基因的合成 Ⅱ.d-GGAAACCA的合成

本文报道了脑啡肽基因下链26核苷酸中八核苷酸片段d-GGAAACCA(1～17)的合成。合成系采用改良的三酯法,先合成(DMT)ibG?ibG?bzA(DMT)bzA?bzA和(DMT)anC?anC(?2代表),再用对氯苯基磷酸二氯在1,2,4-三氮唑存在下磷酰化得到(DMT)ibG?ibG?bzA?OH、(DMT)bzA?bzA?OH和(DMT)anC?anC?OH,然后由bzAobz开始,依次同(DMT)anC?anC?OH、(DMT)bzA?bzA?OH和(DMT)ibG?ibG?bzA?OH缩合得到(DMT)ibG?ibG?bzA?bzA?bzA?anC?anC?bzAobz。在所有的缩合反应中,缩合剂均采用2,4,6-三甲基本磺酰硝基咪唑。所得的全保护八核苷酸用浓氨水和80%醋酸脱去保护基后再经DEAE-葡聚糖凝胶A-25(7M尿素)柱层析分离纯化并去盐后,即得到d-GGAAACCA。产物经5′-~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的电泳-同系层析双向图谱能够得到预期的核苷酸排列顺序。     

多核苷酸合成的研究 Ⅹ.GpCpm~1Ⅰ和pGpCpm~1Ⅰ的合成

本文报导了GpCpm~1Ⅰ和pGpCpm~1Ⅰ的化学合成和酶促合成。同用DCC缩合并脱去3′-磷酸上的苯胺保护基后得到,后者再同缩合,然后脱去全部保护基经DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析和电泳分离纯化而得到GpCpm~1Ⅰ纯品。而同用DCC缩合并脱去全部保护基后可得到Cpm~1Ⅰ,然后在核糖核酸酶N_1作用下同pG>p联结并经DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析和电泳分离纯化则得到pGpCpm~1Ⅰ。GpCpm~1Ⅰ和pGpCpm~1Ⅰ均经酶解后得到预期的核苷酸组成比例。     

电针刺激加速大鼠中枢脑啡肽的合成

应用放射免疫分析法测定大鼠纹状体、下丘脑、丘脑、桥延脑内甲啡肽和亮啡肽样免疫活性物质(Ir-MEK,Ir-LEK)的含量。脑室注射氨基肽酶抑制剂 bestatin(B)或“脑啡肽酶”抑制剂 thiorphan(T)各50μg 并不影响脑内 Ir 脑啡肽含量,合并应用 B T 各50μg 仅引起下丘脑 Ir-MEK 含量轻度上升。这说明安静状态下中枢脑啡肽的更新率不高。给大鼠电针30min 使纹状体和下丘脑 Ir-MEK 和 Ir-LEK 含量升高约40%(33—52%)(P<0.01)。在脑室注射 B T 各100μg 以及腹腔注射非特异性肽酶抑制剂 D-苯丙氨酸250mg/Kg的基础上电针,则使 Ir-MEK 和 Ir-LEK 含量升高约120%(94—147%)(P<0.01)。以上结果说明30min 电针刺激既促进脑啡肽的合成,也促进其释放。由于前者超过后者,因此静态含量升高。在中枢脑啡肽含量升高的同时,电针镇痛效果加强。说明由于肽酶抑制剂的保护作用而积聚于脑内的脑啡肽是具有功能意义的。     

弹状病毒研究的新进展Ⅰ.病毒的基因结构

弹状病毒组是与人类疾病及工农业生产密切相关的一个重要病毒组,例如VSV（水泡性口膜炎病毒）引起的家畜口膜炎,RV（狂犬病毒）引起的狂犬病,IHNV（传染性造血器官坏死病毒）引起的鲑鱼造血器官坏死病,以及对我国农业生产有重大危害的小麦丛矮病毒引起的小麦丛矮病和由水稻黄矮病毒引起的水稻黄矮病等。弹状病毒可以从两个方面的特征区别于其它病毒：首先是形态特征,大多数弹状病毒有子弹状形态,少数为两个子弹状以底部相连的杆状形态;其次,弹状病毒基因组由一条不分节段的负链RNA构成。目前已知的弹状病毒超过100种。弹状病毒…     

白皮松的保育遗传学研究Ⅰ.基因保护分析

在白皮松主要分布区抽取了10个天然群体进行酶电泳分析,共测定了16种酶系统,得到31个清晰酶位点和53个等位基因。按照基因频率进行分类,53个基因中有32个全局基因、14个广域基因、6个局域基因和1个特异基因。通过计算机模拟建立基因捕获曲线的结果表明,随机抽取5个群体可平均捕获99.9%的基因。群体的等位基因频率与地理生态因子的相关分析表明,Idh与Pgi^-2两个位点的基因频率呈现明显的梯度变异。该项研究为有效保护白皮松天然群体的基因资源提供了依据。     

脑啡肽基因多态性与阿尔茨海默病的文献综合分析

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是痴呆最常见的类型,以记忆减退、认知障碍和行为异常为主要临床表现,可能与遗传和环境因素有关。研究认为β淀粉样蛋白肽(amyloid beta,Aβ)的蓄积是AD发病的中心环节。脑啡肽(Neprilysin,NEP)作为脑内Aβ的主要降解酶,是AD研究的热点。现阶段关于NEP基因多态性和AD发病的关联研究颇多,但尚未证实两者间的关系,存在许多不一致的结论。该文利用文献检索系统,对NEP基因多态性与AD临床相关性的文献进行检索分析,了解目前研究现状,分析可能造成的原因,探索进一步的研究方案。     

酵母菌杂交育种——Ⅰ.酵母菌麦芽糖基因对麦芽糖发酵力的效应

为了研究酵母菌麦芽糖基因对麦芽糖发酵力的效应,我们从酵母菌分离出4个不连锁的麦芽糖基因。MALA、MALB和MALC是从啤酒酵母分离出的,MAL6是从卡尔斯伯酵母分离出的。用显微操作技术共组成20种不同基因组合和65个杂种。用不同基因型的二倍体杂种测定麦芽糖基因对麦芽糖发酵力的效应,结果表明: (1)根据单因子杂种产生CO_2的量可分为两类杂种,含MALA和MALB单因子杂种比含MALC和MAL6单因子杂种产生的CO_2量多。 (2)含MALA与MALB基因的纯合子与杂合子麦芽糖发酵力一样,而含其余两个基因的纯合子比杂合子产生CO_2量多。 (3)双因子杂种产生CO_2的量变化很大(2.8—4.9克),值得注意的是双因子杂种(MALB×MALA)产生的CO_2量最高,同时发现凡由MALB与另一MAL基因组成的双因子杂种表现出麦芽糖发酵力的相加效应(杂种优势),而由其他三个MAL基因组成的双因子杂种发酵力和亲株一样。 (4)多因子杂种(三因子、四因子杂种)麦芽糖发酵力和其双因子杂种相同。 这些实验结果提示在MAL基因和麦芽糖发酵力间有明显的相关性。     

碳水化合物的合成研究——Ⅰ.D-果糖-1-磷酸酯及 D-果糖的酶促合成

本文报道了用化学与酶促相结合的方法,由二羟基丙酮磷酸酯与D-甘油醛在兔肌醛缩酶的存在下进行酶促不对称合成,一步缩合得到D-果糖-1-磷酸酯,经酸水解后得到结晶D-果糖。用同样的方法,以DL-甘油醛代替D-甘油醛则得到D-果糖-1-磷酸酯和L-山梨糖-1-磷酸酯的混合物。用钙盐结晶的方法分离,得到D-果糖-氯化钙结晶,除去氯化钙后得到单一的结晶D-果糖。母液在Dowex-1 B_4O~-_7型树脂进行梯度淋洗得到L-山梨糖结晶。     

脑啡肽-αⅠ干扰素的镇痛作用和抗肿瘤作用

从大肠杆菌工程菌中纯化脑啡肽-αⅠ干扰素融合蛋白,测定其在小鼠脑内的镇痛作用,阿片受体结合功能及对肿瘤细胞生长抑制和体内抗肿瘤作用.结果显示,与αⅠ干扰素母体相比,融合蛋白具有较强的镇痛作用, 镇痛作用可为腹腔注射阿片受体拮抗剂Naloxone和Naltrindole 反转, 融合蛋白可竞争³H标记σ型阿片受体配基DPDPE与膜受体结合.融合蛋白的肿瘤细胞生长抑制和体内抗肿瘤作用也高于母体分子, 说明脑啡肽和αⅠ干扰素的融合蛋白实现并增强了脑啡肽-αⅠ干扰素融合蛋白的双重功能.     

多核苷酸合成的研究——Ⅳ.UpCpCpA的合成

用化学合成或化学与酶促合成相结合的方法均能制备得到UpCpCpA(图1)。化学合成包括“2 2”和“1 3”两条路线。参考Mackey和Gilham方法,在PNPase催化下,引物UpCpC与2′(3′)-O-甲氧乙基ADP反应进行单一加成可产生30%的UpCpCpA。为了获得纯的产品,采用了二次柱层析法(图2)。文中讨论了PNPase连接的转核苷酸作用问题。     

多核苷酸合成的研究——Ⅲ.CpUpCpG>p的合成

本文报道用PNPase和RNase N_1相结合的方法合成了CpUpCpG>p。选择适当的反应条件,包括1.CpUpC:GDP=1:5(克分子比),2.RNase N_1:PNPase=4:1(活力单位比),3.反应pH为7.6,4.37°反应10小时,CpUpCpG>p产率可达64%。另有18%开环产物CpUpCpGp。后者又可用氯甲酸乙酯进行环化得到60%产率的CpUpCpG>p。     

生物活性肽——蛋氨酸脑啡肽的免疫

源自肾上腺前脑啡肽原的具有吗啡样生物活性的内源性神经肽蛋氨酸脑啡肽(methionine enkephalin,MENK),由５个氨基酸残基Tyr Gly Gly Phe Met组成,与G蛋白偶联的７次跨膜特异性受体结合后发挥不同的生物学功能。目前,对蛋氨酸脑啡肽的作用及其机制研究已经取得了很大进展。本文就MENK对于免疫系统的调节及其对肿瘤、自身免疫病、艾滋病等免疫系统相关疾病的治疗作用予以综述。     

中国林蛙输卵管蛋白及其基因的研究——Ⅰ.中国林蛙输卵管蛋白的分析

本文用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析了中国林蛙输卵管可溶性蛋白,发现其中主要含有四种蛋白质多肽链。与黑斑蛙和中华大蟾蜍输卵管蛋白比较有明显差别。四种主要蛋白的分子量分别为17.0、15.7、12.8和4.9万道尔顿。其中12.8万分子量的蛋白质约占总输卵管可溶性蛋白的40％,而分子量为4.9万的蛋白质占25％以上。其含量上的优势暗示了它们具有殊特的生理功能。中国林蛙在产卵后输卵管蛋白的组成有明显变化,表现为四种主要蛋白相对含量的显著 下降和蛋白种类的增加。由于输卵管组织的重量在产卵后也明显降低,说明上述四种主要蛋 白的功能可能与繁殖密切相关。看来是一个作为雌激素对基因表达调控研究的理想材料。本 文对上述蛋白的等电点以及与抗血清的免疫反应等也作了测定。     

家蝇胚胎发育的研究——Ⅰ.早期胚胎发育

家蝇的胚胎发育还没有人作过观察,目前有关家蝇胚胎发育的叙述都是根据Fish(1947)对丝光绿蝇(Lucilia sericata Meigen)的胚胎发育的推测(West,1951)。家蝇目前已不仅是昆虫毒理学的试验材料,也是昆虫生理及生物化学的重要试验材料;为此,把它的胚胎发育弄清楚是一个基础工作。我们在昆虫不育性的试验中,也显示出有许多种     

多聚核苷酸的合成与研究 Ⅰ.十脱氧核糖核苷酸的化学合成

用片段缩合的方法,化学合成了十脱氧核糖核苷酸 d-_(MMT_r)G~(Bz)_pA~(Bz)_pC~(An)_pG~(Bz)_pA~(Bz)_pG~(Bz)_pT_pC~(An)_pC~(An)_pG~(Bz)。各中间片段及最终产物在脱除全部保护基后,均能定量地为桔青霉磷酸二酯酶酶解,并得到预期的碱基比例。将三苯甲基-纤维素柱运用于带MMTr基片段反应混合液的分离,能使情况简化,为进一步在DEAE-纤维素柱上分离纯化创造有利条件。     

多聚核苷酸的合成与研究 Ⅰ.十脱氧核糖核苷酸的化学合成

用片段缩合的方法,化学合成了十脱氧核糖核苷酸d-_(MMTr)G_p~(Bz)A_p~(Bz)C_p~(An)G_p~(Bz)A_p~(Bz)G_p~(Bz)T_p~(Bz)C_p~(An)C_p~(An)G~(Bz*)。各中间片段及最终产物在脱除全部保护基后,均能定量地为桔青霉磷酸二酯酶酶解,并得到预期的碱基比例。将三苯甲基一纤维素柱运用于带MMTr基片段反应混合液的分离,能使情况简化,为进一步在DEAE-纤维素柱上分离纯化创造有利条件。     

基因合成

前言 基因决定着生物的性状和遗传,它在生物学中的意义是不言而喻的。从化学上讲,基因是一段特定的具有生物功能的DNA顺序。因此,一旦知道了基因的结构以后,基因的合成也就被提上了日程。1965年,Holley第一个阐明了酵母丙氨酸tRNA的化学结构,第二年,Khrorana立即根据这个结果可能确定出的基因的结构。     

小麦灌浆特性的遗传研究Ⅰ.遗传模型及基因效应

利用8个小麦品种双列杂交的F~1|及其亲本, 按Hayman分析法研究了小麦籽粒灌浆特性的遗传规律。结果表明,小麦籽粒灌浆特性符合加性-显性遗传模型。基因作用以加性效应为主,呈部分显性。籽粒灌浆期的显性方向指向增效,籽粒灌浆速率的显性方向指向减效。所有性状均有较高的狭义遗传力h^2|~N|=0.71-0.93,可在杂种早代选择。