氨基酸为显色剂比色法测定京尼平的含量

建立了一种京尼平含量的快速测定方法。研究了京尼平与氨基酸的显色反应条件,京尼平(0.0768mg·mL1)与氨基酸溶液(0.2mg·mL1)体积比为1:1,100℃下显色反应10min,检测波长590nm。该方法检测线性范围为0.76～30.73·g·mL1,线性回归方程为Y=0.2409X 0.0036,相关系数为0.9998,最低检测限为0.38μg·mL1,精密度为1.6%。本方法操作简便、快速,且结果准确可靠。     

HPLC—ELSD法与HPLC—RID法检测蜂蜜中糖分的比较

采用高效液相-蒸发光散射检测方法测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量,从而判断蜂蜜中的糖是否符合国家标准有无掺假。采用ELSD法检测结果表明,果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的线性范围均是0．6—10mg／mL,相对标准偏差分别为0．308％、0．424％、0．327％、0．539％。并将ELSD法与国标中的RID法进行比较,结果显示前者的灵敏度更高,检出限更低,线性范围更广。由此看来,蒸发光散射检测器的比示差折光检测器的在我们检测糖项目上应用较好。     

高通量检测大样本桑黄发酵液总黄酮含量方法的建立北大核心CSCD

建立了大样本的桑黄发酵液样品中总黄酮的高通量测定方法。通过L9（3^4）正交实验设计优化,确定了基于亚硝酸钠．硝酸铝比色法的微孔板检测方法,优化后总黄酮含量测定的最佳反应条件：5％亚硝酸钠30μL,10％硝酸铝30μL,10％氢氧化钠50μL,室温反应10min,检测波长为510nm。检测结果表明,针对大样本检测,该法稳定性高,平均回收率为100．7％,相对标准偏差为0．607％,线性范围为0—50μg／mL,线性相关系数r^2=0．9994。比较分析结果显示,和多种传统总黄酮测定方法相比,实验所建立的高通量测定方法检测大样本快速、准确、用药量小,且稳定性高。     

HPLC-DAD和LC/MS/MS测定豆奶中三聚氰胺

目的：建立二极管阵列高效液相色谱仪和三重四级杆液质联用仪对豆奶中三聚氰胺的测定方法。方法：采用三氯乙酸和乙腈为提取剂、蛋白质为沉淀剂,提取液过净化柱纯化。结果：三重四级杆液质联用法对三聚氰胺的检出限为0-001 5 mg/kg,标准曲线在0-01~0-5 μg/mL范围内,R2为0-999 8,线性良好,再回收率为85 %~89 %,适用于检测低浓度的样品;二极管阵列高效液相色谱法检出限为0-024 mg/kg,标准曲线在0-5~100 μg/mL范围内,R2为0-999 9,线性良好,回收率为83 %~91 %,可以快速地对高浓度样品进行筛查。结论以上两种检测方法结合使用,可检测0-01~100 mg/kg的三聚氰胺含量,极大地拓宽了检测范围。     

高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量

建立了一种高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。色谱柱为Diamonsil^TM（钻石）C18（4．6mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（1．56g磷酸二氢钠／1000mL水,磷酸调节pH值3．8—4．0）（体积比为23：77）;检测波长为323nm,柱温为40℃。研究结果表明：线性范围为2．44—14．64mg/L,回归方程为y=41742x＋2287．9相关系数为R^2=0．9996,加标平均回收率为97．5％。本方法具有灵敏度高、重现性好、准确度高、操作简便等特点。     

薏苡仁蛋白质组分研究

目的：对药食两用功能的薏苡仁蛋白质四类组分和氨基酸含量进行分析。方法：采用旋光法、索氏提取法、烘干法、马弗炉法分别进行淀粉、粗脂肪、水分和灰分的测定;采用顺序抽提法依次进行清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的提取,用Brandford和凯式定氮法进行蛋白质含量分析;采用氨基酸分析仪进行氨基酸含量测定。结果：薏苡仁总蛋白含量为14．17％,其中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白含量分别为0．20、0．88、6．34和5．30mg／100mg鲜重,分别占总蛋白质含量的1．43％、6．20％、44．74％和37．38％;薏苡仁粉经酸水解后共检测到15种氨基酸,除Trp外,人体必需氨基酸和半必需氨基酸均有检测到;各氨基酸含量也存在着差异,含量最高的为Glu（3．59mg／100mg）,含量最低的为Met（0．17mg／100mg）。结论：薏苡仁蛋白中醇溶蛋白和谷蛋白含量较丰富,为今后进一步开发薏苡仁功能食品提供了理论数据。     

肌苷酶电极生物传感器

为了构建肌苷酶电极生物传感器,以固定化核苷磷酸化酶(EC 2.4.2.1)、黄嘌呤氧化酶(EC 1.2.3.2)与过氧化氢电极组成电流型酶电极生物传感器,用于检测肌苷片中的肌苷,其输出电流可达500nA.结果发现,肌苷测定的线性范围为1-268 mg/L,精度:RSD小于0.14%,响应时间:60 s,使用寿命大于25 d,实际测定肌苷片中肌苷含量回收率:100.8%.由此表明:采用双酶电极法测定肌苷片中的肌苷含量,由于酶促反应专一性高、样品不需分离直接进样分析、处理条件温和、反应时间短暂因而结果较为可靠.     

场效应晶体管型赖氨酸传感器的研究

用自行研制的SOS型氢离子敏场效应晶体管,结合聚乙烯醇膜和赖氨酸脱羧酶膜,研制成场效应晶体管型赖氨酸传感器,其线性响应范围为:0.02％—0.10％,响应灵敏度75±3 mV,响应时间约2 min.传感器寿命达60 d,在pH 6.2的磷酸盐缓冲液中(含10^-3mol/L磷酸吡哆醛),37℃时器件性能最优,同时还考察了硅烷化及膜厚对器件性能的影响.用该传感器初步检测强化赖氨酸饮料的含量,结果与经典的茚三酮显色法基本一致.     

CA19-9时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立

本研究旨在建立一种定量检测血清中CA19-9含量的时间分辨荧光免疫层析检测方法。采用双抗体夹心法与荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球和NC膜为载体将CA19-9配对抗体进行标记和包被,制备CA19-9检测试纸条。通过标记、包被抗体量对工艺进行优化,并通过线性范围、最低检出限、精密性等性能指标对CA19-9时间分辨荧光层析检测方法进行评价。最终确定20μL荧光微球的标记抗体量为80μg,检测线包被抗体浓度为1.5 mg/mL时,检测时间为15 min,线性范围为12.5–800 U/mL,最低检出限为6.32 U/mL,批内精密性与批间精密性均小于15%,平均回收率为101%,与罗氏电化学发光检测试剂盒平行检测50份临床样本,两者相关系数为0.980 6。初步建立了定量检测血清中CA19-9的荧光免疫层析检测方法,有较好的临床应用前景。     

紫外分光光度法测定白喉毒素无毒突变体CRM197的蛋白含量

目的 基于紫外分光光度法,建立一种测定白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白含量的方法。方法 在天然折叠状态和非折叠状态(CRM197蛋白经盐酸胍变性)下,分别测定相同含量的CRM197蛋白A_{280 nm}值,再根据朗伯-比尔定律c=A/εL计算其折叠状态消光系数。同时,使用当前建立的方法与BCA法分别测定CRM197蛋白的含量,并对2种方法的差异和检测特点进行比较分析。结果 根据CRM197蛋白的氨基酸一级序列与相对分子质量计算出其理论消光系数为0.934 mL/(mg·cm),在280 nm处的实验消光系数为(0.959±0.006)mL/(mg·cm)。2种方法测定同一蛋白样本的结果一致,分别为(2.17±0.02) mg/mL和(2.14±0.09)mg/mL;本方法检测值的CV为0.70%,BCA法检测值的CV为4.15%。结论 本研究建立的CRM197蛋白含量测定方法准确性高、线性范围宽、获取数据快,可用于CRM197蛋白含量的测定,同时为其他载体蛋白的含量测定提供了参考。     

SEC-HPLC法测定重组人生长激素注射液中苯酚含量

采用SEC-HPLC法测定重组人生长激素注射液中苯酚的含量。色谱柱为TSK G2000SWxL（7.8×300mm,5μ）,流动相为PB（pH值7.0）-异丙醇（97∶3）,流速0.6 mL/min,检测波长214nm,柱温25℃。苯酚在0.10～1.00 mg/mL浓度范围内线性关系良好,r=0.99915;最低检测限为0.5 ng/mL;平均回收率101.48%,RSD=0.58%（n=9）;3批重组人生长激素注射液中苯酚的含量分别为2.98、3.02和2.96 mg/mL,分别为标示量的99.33%、100.67%和98.67%。SEC-HPLC法环保、准确、快速、可靠,可用于重组人生长激素注射液中苯酚含量的测定。     

固相萃取-高效液相色谱法测定复合薯片中丙烯酰胺

建立了一种利用固相萃取小柱与高效液相色谱联用,采用光电二极管阵列检测器测定复合薯片中丙烯酰胺的方法。以0．1％的甲酸水溶液为提取试剂,采用Waters Oasis HLB固相萃取小柱（200mg／6cc）对提取液净化处理,然后以流动相为甲醇／水（5：95,V：V）,流速为0．6mL／min,检测波长为210nm,利用AgilentC18反相色谱柱进样分析。在该条件下丙烯酰胺的回收率达80％以上,最低检测限小于10ng／mL。该方法操作简便、重复性好、稳定性高,可用于油炸复合薯片中丙烯酰胺的快速检测。     

高效液相法测定香菇菇柄麦角甾醇的含量

采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)建立了测定菇柄麦角甾醇的含量测定方法。确定提取过程中皂化剂的种类和醇碱比后,将样品皂化,萃取后蒸干溶剂,乙醇定容测定。采用Phe-nomenex-C18色谱柱,V(流动相甲醇)∶V(水)=98∶2,流速1.0 mL/min,检测波长282 nm。结果表明:麦角甾醇线性回归方程为Y=9E+9×106X-8919.9(X:质量浓度,mg/mL),R2=0.998 9,0.01~0.30 mg/mL范围内线性关系良好,回收率为97.31%~101.95%。与紫外分光光度法所测结果比较,HPLC法测定菇柄中麦角甾醇含量灵敏、快速、准确,适用菇柄中麦角甾醇的含量测定。     

用高效液相色谱定量分析分支链氨基酸

目的：周2,4-二硝基氟苯（DNFB）对分支链氨基酸衍生后,采用优化的高效液相色谱（HPLC）对其进行定量分析。方法：色谱柱为AgilentZORBAXEclipsAAA（4．6mm×150mm,5-Micron）,流动相为乙酸盐缓冲液（pH6．4）-乙腈,流速1．0mL／min,检测波长360nm。结果：用HPLC法测定分支链氨基酸的浓度为20-200mg／L时线性关系良好,3种分支链氨基酸的R。均在0．9997以上,平均回收率高,RSD≤0．56％（n=6）。结论：此方法快速、准确、重现性好,适合于对发酵液中分支链氨基酸的定量分析。     

Amperometric biosensor based on diamond paste for the enantioanalysis of L-lysine

An amperometric biosensor was proposed for the enantioanalysis of L-lysine. The biosensor is based on the impregnation of L-lysine oxidase in diamond paste. The potential used for the determination of l-lysine was 650 mV. The biosensor exhibited a linear concentration range between 1 and 100 nmol/L with a limit of detection of 4 pmol/L. The selectivity of the biosensor is high over other amino acids, such as L-serine, L-leucine, L-aspartic acid, L-glutamic acid, histamine, glycine. The proposed biosensor can be applied for the determination of L-lysine in serum samples and pharmaceutical compounds.     

生物检材中佐匹克隆的GC/μECD测定

目的：建立液-液萃取、GC/μECD气相色谱测定生物检材中佐匹克隆的方法。方法：以家兔为模型动物,500 mg佐匹克隆标准品灌胃家兔,6.5小时后处死,取其胃、肝、血、脑、心脏、尿,采用乙醚液-液萃取提取,Rtx-5毛细管柱分离,电子捕获检测器检测,标准曲线法定量。结果：该方法灵敏度达0.02μg/mL,在0.05-50μg/mL范围内线性关系良好;低、中、高3种浓度的加样回收率分别为91.7%、99.5%、94.4%,相对标准偏差（RSD）均小于5%;佐匹克隆在家兔脏器中的浓度分别为7.31μg/mL（血液）、7.63μg/g（肝脏）、7.96μg/g（脑）、14.67μg/g（心脏）、32.18μg/g（胃组织）、42.65μg/mL（尿液）,在各脏器中呈特异性分布。结论：该法操作简单、灵敏度高,结果可靠,完全满足临床检测及公安机关在办理佐匹克隆麻醉案件中的需要。     

新型柱前衍生试剂分析草甘膦的高效液相色谱研究

以2,5-二甲氧基苯磺酰氯(DMOSC)为柱前衍生化试剂,建立了柱前衍生草甘膦的紫外检测反相高效液相色谱法,并优化了衍生化条件,得最佳条件:衍生温度35℃,时间15 min,pH 10.0,草甘膦与DMOSC的摩尔比为1∶6。HPLC分析条件:采用Kromasil C18柱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长220 nm,流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲溶液(0.02 mol/L、pH 5.5),三者的体积比为15∶5∶80。结果表明:草甘膦质量浓度在5~100μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.996 2,检测限为0.067μg/mL。实验表明该方法反应条件温和,灵敏度高,衍生产物稳定。     

基于裸磁珠体系检测血清淀粉样蛋白A浓度方法的建立与效果评估

传统链霉亲和素磁珠体系及酶促发光体系中通常存在生物素干扰强、发光率低、特异性差的缺陷。基于此，以裸磁珠为载体偶联血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A, SAA）抗体，以吖啶酯作为发光标记物，依据双抗夹心原理，建立了一种快速测定SAA的方法，并对该方法的检测性能（包括：空白限、检测限、线性范围、精密度验证、干扰试验、HOOK效应、方法学比较等）进行了评估。结果表明，SAA抗体与裸磁珠成功偶联；该方法空白限为0.6 mg·mL^-1，检出限为1.0 mg·mL^-1；线性范围为1~100 mg·mL^-1 （R²＞0.990）；在精密度方面，以CV表示的重复性、室内精密度均<10%；血红蛋白、胆红素、甘油三酯对临床样本的干扰检测结果相对偏差均<10%。Bland-Altman偏倚分析表明，该方法检测值与西门子试剂的测量值差异基本在95％CI的一致性界限内波动，回归分析结果显示有较好的相关性（R²=0.987）。上述结果表明，研究所建立的裸磁珠-吖啶酯发光检测体系性能参数可满足临床检测要求，适用于血清中SAA的快速检测。     

利用表面等离子体共振仪检测黄瓜花叶病毒

目的：研究一种便捷、高效地检测黄瓜花叶病毒（CMV）的方法。方法：利用表面等离子体共振（SPR）技术检测CMV。首先用11-MUA修饰SPR金片,再用EDC／NHS活化,之后通过NHS酯基与CMV抗体结合,用BSA封闭未结合的NHS酯基。将SPR金片装入SPR仪,通入待检样品,通过折射率变化实时监测实验过程。结果：该方法检测CMV的灵敏度能够达到10ng／mL,具有良好的特异性,与同属的花生矮化病毒、番茄不孕病毒无交叉反应。结论：建立的SPR方法操作简单、灵敏度高、特异性好,是一种新的高效检测CMV的方法。     

产肠毒素大肠杆菌快速检测方法的建立和评价

目的利用环介导等温扩增(LAMP)技术,建立产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的快速、便捷、敏感、特异的检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行评价,为实验动物检测和细菌性腹泻的诊断提供技术支持。方法根据GenBank公布的产肠毒素大肠杆菌的LT毒素基因序列(S60731.1)设计外引物和内引物进行LAMP扩增,对LAMP特异性和敏感性与PCR方法做比较。结果建立的LAMP方法检测最低浓度为100 pg/μL,灵敏度是PCR的10倍以上并具有较高的特异性,利用该方法对27份猴腹泻样品进行LAMP和PCR方法检测,发现PCR检出率为33.3%,LAMP(60 min内)结果与PCR相同,而LAMP(90 min内)检出率为92.6%,约是PCR检出率的3倍。结论建立了一种用于检测肠毒性大肠杆菌(ETEC)的LAMP检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,方便快捷,适合于ETEC临床快速检测。