人二倍体细胞KMB—17株和MRC—5株生物学性质比较

用人二倍体细胞代替原代猴肾细胞生产脊髓灰质炎疫苗可避免猴病毒污染。为了向脊髓灰质炎活疫苗生产提供安全、可靠的细胞基质,我所于1972年建立了一株人二倍体成纤维细胞KMB_(-17)株（昆明医学生物学研究所,1974）。该细胞株现已在液氮中冻存十年。本文报告检查KMB_(-17)株生物学性状有无变化的结果,并与国际上广泛应用的MRC_(-5)人二倍体细胞株作比较。     

人二倍体细胞株(KMB-13)的建立及其生物学性质的初步观察

本文介绍了建立人二倍体细胞株的初步结果,并对其应用范围作了简要讨论。 我们从一个四月龄的女性胎儿肺组织建立了一株人二倍体细胞株,名为KMB-13。细胞株原系以1:2分种率传代48次终止,平均每代为1.102次细胞群体分裂,整个寿命约合53次细胞群体分裂。18代以后细胞于液氮中陆续冻存。传代过程染色体分析始终保持二倍体性。初步检查未发现潜在病毒因子。对人类病毒有较广泛的敏感性。     

用人胚肺二倍体细胞(2BS和SL7)分离甲型肝炎病毒

用我国建株的两株人胚肺二倍体细胞(2BS和SL7),以35℃为培养温度,直接从急性期甲型肝炎(简称甲肝)患者粪便中分离到4株病毒。该病毒在细胞培养上符合甲肝病毒的增殖特性,经免疫荧光阻断、免疫电镜及中和试验等特异性鉴定,证实为甲肝病毒。原始分离时的比较研究还显示,2BS株人二倍体细胞支持甲肝病毒增殖的能力似较SL7细胞佳。该4株病毒现已在2BS细胞稳定传代,感染滴度较高,被用于减毒活疫苗的育种研究。     

人二倍体细胞2BS株在不同培养瓶中的培养特性研究

目的:在同等试验条件下,比较二倍体细胞2BS株在T75培养瓶和玻璃方瓶培养的生物学特性及传代极限。方法:复苏同一批次二倍体细胞2BS株,在两种容器下进行极限传代,对各代次培养期间细胞形态进行观察、细胞计数及培养液的PH测定等。结果:T75培养瓶培养2BS细胞,细胞贴壁迅速,增值能力强,经显微镜观察细胞形态,均优于玻璃方瓶,并能连续传代至72代。结论:人胚肺二倍体细胞在T75培养瓶内连续传代,不但能迅速增殖,而且比玻璃方瓶更长期的保持细胞生物学特征。     

狂犬病病毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株的适应传代

目的建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞,连续传代,检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果 CTN-1V株能较好地适应Walvax-2细胞,通过连续带毒传代至第7代,病毒滴度可达6.78 lg LD50/mL,并在第10~15代内滴度维持在7.0 lg LD50/mL以上,15~30代滴度稳定在7.0 lg LD50/mL左右。以15代适应毒株CTN-1V-HDC P15制备的疫苗原液,各项指标均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)的要求,疫苗效力在6.0IU/剂以上。结论所获人胚肺二倍体细胞Walvax-2株传代适应狂犬病毒固定毒株CTN-1V-HDC可用于人用狂犬病疫苗的生产开发。     

用于疫苗生产的人二倍体细胞研究进展*

人二倍体细胞(human diploid cells, HDCs)作为制备疫苗的重要培养细胞基质备受人们的关注。由于人二倍体细胞与人类基因组相同、无外源因子、对多种病毒易感性、无潜在致瘤性、所制备的人二倍体疫苗(human diploid cell vaccine, HDCV)具有良好的免疫原性和安全性,适合于疫苗的工业化生产。当前,人群中使用的灭活疫苗、减毒疫苗或亚单位疫苗等均依赖于原代细胞、传代细胞和人二倍体细胞,其中用于疫苗制备的人二倍体细胞主要有WI-38、MRC-5、2BS和KMB-17等细胞系。然而,人二倍体细胞为有限性细胞,细胞的来源和培养技术等存在某些缺陷,进而影响其应用。综述了用于疫苗生产的人二倍体细胞及其疫苗制备技术的研究进展,并分析了存在的问题及改进策略。     

脊髓灰质炎病毒减毒株Sabin 3经型间嵌合在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上的适应性研究

为筛选Sabin 3型人胚肺二倍体细胞新适应株,将原来在体外培养过程中对KMB17细胞适应较差的Sabin 3型病毒与适应较好的Sabin 1型病毒混合培养11代,经噬斑筛选81个克隆后,感染性滴度检测表明,大部分筛选的克隆感染性滴度较低,仅33号克隆滴度最高,达8．125LgCCID50／ml。经全基因序列分析发现,该克隆(Sabin 3．33)为Sabin 1型和Sabin 3型的型间嵌合株,其中5’NCR为Sabin 1型,其余区域与Sabin 3型相同。经型别鉴定为Sabin 3型,与毒力直接相关的位点5’NCR的第480位核苷酸及位于VP2的第2034位核苷酸都未发生变异,表明已初步获得一株人胚肺二倍体细胞：KMB17的新适应株。     

人二倍体甲型肝炎灭活疫苗纯化技术的研究

研究人二倍体细胞甲型肝炎灭活疫苗的纯化方法。 经人二倍体细胞培养的病毒液经澄清、浓缩后制成粗制疫苗,采用Sephacryl S 400、DEAE Sepharose FF、Sephadex G 10等柱层析手段进行纯化。试验证明甲型肝炎病毒粗制疫苗经以上3种层析柱纯化后,抗原组分单一,收率达到85%,杂蛋白去除率达85%以上,蛋白总含量、牛血清残留量各项指标符合中国药典要求,适用于大规模生产。     

人二倍体细胞株的建立和鉴定及用于制备麻疹疫苗

<正>我们用10个人胚肺组织,开展了10条人二倍体(HDC)细胞线的研制。为评价本地人二倍体细胞,并采纳这些细胞株来制备人病毒疫苗,我们对10个细胞线中的6个细胞线人二倍体细胞的生命周期进行了研究。其中的一条线R—17用于麻疹病毒的制造是满意的。对这条细胞线现报导如下。     

从抗体阳性的甲型肝炎接触者粪便中分离出一株甲型肝炎病毒

几年来,国内外已相继用组织培养法分离多株甲型肝炎病毒(HAV),并已证实了甲型肝炎患者及亚临床型感染在传染本病中的重要性。但HAV在流行点的正常人群中存在短期携带的问题还尚未见报道。本文采用人胚肺二倍体细胞(2BS)从甲型肝炎接触者粪便中分离出一株HAV,并经免疫电镜、免疫荧光及参比血清鉴定等证实。现将结果报告如下。     

啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）特殊的倍性变化

啤酒酵母的生活史是单倍体/二倍体交替进行。当能产孢的二倍体细胞遇到恶劣环境(氮源饥饿)时,便进行减数分裂产生两个a交配型、(MAT a)和两α交配型(MAT α)的单倍体细胞。当能交配的单倍体a交配体细胞和α交配型细胞相遇时,它们接合成二倍体细胞。在正常情况下,单倍体和二倍体细胞都进行有丝分裂,作出芽繁殖。除上述常见的两单合二、二分为单的倍性变化外,还有如下几种特殊的倍性变     

NDV CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析

本文研究了NDV-CN株对5株不同的人肿瘤细胞的体外杀伤作用.结果表明5株肿瘤细胞对NDV-CN敏感,于感染早期出现细胞收缩变圆,失去贴壁性,感染第5天时细胞存活率低于10%.其中尤以HEP3B细胞最敏感.但NDV-CN株对人二倍体细胞2BS有弱杀伤性.病毒感染早期可检测到感染细胞中有病毒核酸的复制、感染细胞表面有病毒蛋白的表达,胞浆内有病毒粒子存在.NDV-CN株主要诱导HEP3B及T24细胞产生凋亡,主要诱导Hep2、Hela及A549细胞产生坏死.     

NDV CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析

本文研究了NDV-CN株对5株不同的人肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果表明5株肿瘤细胞对NDV-CN敏感,于感染早期出现细胞收缩变圆,失去贴壁性,感染第5天时细胞存活率低于10％。其中尤以HEP3B细胞最敏感。但NDV-CN株对人二倍体细胞2BS有弱杀伤性。病毒感染早期可检测到感染细胞中有病毒核酸的复制、感染细胞表面有病毒蛋白的表达,脑浆内有病毒粒子存在。NDV-CN株主要诱导HEP3B及T24细胞产生凋亡,主要诱导Hep2、Hela及A549细胞产生坏死。     

药物诱导玉米孤雌生殖植株的倍性变异

实验结果表明,孤雌生殖植株根尖体细胞以二倍体细胞最多,占６８．９％,其次为非整倍体细胞,占２８．７％,其他异倍体和单倍体细胞极少（２．４％）。Ｐａ１植株可分为二倍体和混倍体两类,以二倍体细胞占绝对多数的混倍体植株最多,为８３．５％,这些植株生长发育和结实均正常。在花粉母细胞中正常二倍体频率比根尖体细胞明显提高,提高频率为３５．３一５９．６％,不同材料之间趋势一致。讨论了体细胞染色体变异的来源及其能否延续到生殖细胞。     

甲型肝炎病毒分离及培养特性的研究

应用人胚肺二倍体细胞(2BS)直接从甲肝病人急性期粪便中分离培养出一株甲型肝炎病毒(S_(84=1))。该毒株无致细胞病变作用,具有产量和毒力较高(10~(-6.5～(-7)))繁殖周期短(7天左右)的优点,可作为生产甲型肝炎诊断试剂和研制甲型肝炎疫苗的侯选毒株。     

甲型肝炎病毒H2快速复制株在人二倍体细胞中的增殖研究

研究甲型肝炎病毒H₂快速复制株在人二倍体细胞中的生长特性,并缩短甲肝病毒的培养周期。将甲型肝炎病毒H₂株感染人二倍体细胞（KMB17细胞株）,采用高病毒感染复数（MOI）将病毒培养时间从26d缩短至10d后收获病毒,并通过连续传代进行适应研究,建立H₂株快速复制毒种库,在不同培养时间检测病毒抗原、感染性滴度,绘制病毒生长曲线,进行传代稳定性验证和病毒形态学的观察。甲肝H₂株快速复制病毒株在KMB17细胞上培养10d后收获,连续传代从第5代至第9代,抗原含量均在512～2 048之间,感染性滴度均在8.33 lgCCID₅₀/mL±0.125lgCCID₅₀/mL,H₂株快速繁殖至5代病毒和9代病毒在电镜下观察到多为成熟的实心颗粒。在5批次的重复试验中,病毒培养至10d、16d、22d时,收获的病毒感染性滴度无显著差异（P>0.005）。筛选后的甲型肝炎病毒H₂株的快速复制株缩短了甲肝病毒的培养时间,且保持较...     

水痘-带状疱疹病毒分离和鉴定

本文报告了用7份水痘或带状疱疹病人的皮肤病变水泡液,在人胚肺二倍体细胞(2BS)中培养传代,分离到7株病毒分离物,第一株是由带状疱疹病例分离到的,经细胞病变、核内包涵体和电镜形态学观察,认为此分离物属于疱疹病毒科成员;经血清学鉴定,证实为水痘-带状疱疹病毒(VZV),其宿主范围与疱疹病毒(HSV)不同,余6株分离物经ELISA、IFA及CF血清学试验鉴定均为VZV。     

人巨细胞病毒IgG酶联免疫检测试剂盒的研制

为研制人巨细胞病毒 (HCMV)IgG酶联检测试剂盒 ,将HCMV接种人二倍体细胞 ,收获的病毒经纯化后用作包被抗原 ,辣根过氧化物酶 (HRP)标记羊抗人IgG为检测抗体 ,采用间接ELISA制备酶联免疫检测试剂盒并进行检定。该试剂盒操作简便、特异性强 ,稳定性、线性及精密性符合体外诊断试剂的要求。     

二倍体及异倍体细胞在悬浮葡聚糖微球体上的培养:生长动力学研究

<正> 数年来,我们实验室一直在研究病毒疫苗生产用大量二倍体细胞生长的各种不同方法。由于应用细胞抑制剂(Cyfostats),我们已能取得一些结果,但这仅仅是由假二倍体(BHK21,克隆13)或异倍体株开始的。实际上,纯系(True-Line)二倍体在无载体情况下是不能增殖的。假二倍体或异倍体对于Perkin氏为获得人用疫苗所规定的条件没有反应。在第二次试验中,我们利用聚碳酸脂(Polycarbonate)制成的旋转     

同批次细胞基质收获甲肝和麻疹病毒制备联合疫苗的方法

采用同一批次细胞基质收获甲肝和麻疹病毒.应用甲肝L-A-1株和麻疹D3T11株,间隔3周先后感染同一批次人胚肺二倍体细胞2BS株,待两种病毒同时达到增殖高峰期时收获病毒液(以下简称HAM).对HAM分别进行病毒滴定、特异性检查、猴体安全性和免疫效果试验.结果显示,HAM的甲肝和麻疹病毒滴度与同批单价甲肝和麻疹疫苗病毒滴度,差异均无显著意义.该方法用于制备甲肝-麻疹联合疫苗,省时省力,操作简便,并可显著降低疫苗生产成本.