提高双歧杆菌活菌制剂常温贮存稳定性的实验研究

以Ｄ８５０４青春双歧杆菌为实验３菌株,对活菌制剂常温保存的稳定性问题探讨。首先对菌种进行耐温耐氧驯化试验,然后进行双歧杆菌菌体冻干过程中加入适宜保护剂试验。结果双歧杆菌活菌制剂常温保存的稳定性显著提高。经常温贮存２７０ｄ后检测,质量符合规定。     

长双歧杆菌DD98冻干保护剂优化及菌粉保存稳定性研究

以长双歧杆菌DD98为研究对象,通过对冻干保护剂配方的优化,冻干菌粉的存活率提高到90%以上。通过进一步稳定性研究,采用保护剂优化配方制备的冻干菌粉在4℃保存24个月后,活菌数仍在1.0×10^10 CFU/g以上,在25℃条件下可以保存12个月,双歧杆菌的存活率在1.0×10^6CFU/g以上,符合FAO/WHO建议食品益生菌活菌数应在1.0×10^6 CFU/g^1.0×10^7CFU/g的标准。     

双歧酸奶定量干燥菌种的实验室研究

目的:对双歧酸奶定量干燥菌种的实验室研究进行初步探讨.方法:培养收获三种乳酸菌(双歧杆菌、乳杆菌、嗜热链球菌),并采用真空冷冻干燥技术进行处理,从而对干燥效果以及常温保存活性进行评价和分析.结果:三种乳酸菌的干燥菌粉活菌计数均大于1012个/g;凝乳试验显示次代菌种发酵时间明显低于第一代;混合发酵的凝乳中活菌计数均大于106个/ml,单一菌种发酵的凝乳中活菌计数超过1010个/ml;干燥菌种在37℃放置30 d后,活菌数仍可达108个/g以上.结论:双歧酸奶定量干燥菌种实验室研究结果令人满意,为开发双歧酸奶袋装式干燥菌种打下了基础.     

冻干高活力纳豆芽胞杆菌菌粉保护剂的筛选和优化

【目的】对冻干高活力纳豆芽胞杆菌菌粉保护剂进行筛选和优化研究,提高菌粉活菌存活率。【方法】采用单因素实验和正交实验设计,通过测定活菌存活率,筛选出最佳保护剂的配方;并研究采用优化后冻干保护剂制备的菌粉在20°C、4°C、25°C下的保存稳定性。【结果】纳豆芽胞杆菌的有效保护剂是:脱脂乳粉、甘露醇、L-抗坏血酸钠。最佳冷冻干燥保护剂配方是:脱脂乳粉10%+甘露醇4%+L-抗坏血酸钠1%,存活率达到91.63%。菌粉在20°C、4°C、25°C下保存12个月后,存活率分别为:88.79%、70.16%和10.52%,说明菌粉在20°C和4°C下保存稳定性较好,25°C下稳定性比较差。【结论】对纳豆芽胞杆菌冻干菌粉保护剂的优化,对纳豆芽胞杆菌的应用、活菌产品的质量稳定及新产品的研发均有一定的指导意义。     

冻干前处理对双歧杆菌存活率影响的探讨

目的探索提高双歧杆菌菌体存活率的方法。方法分别考察冻干前处理的三种因素(菌泥暴露于空气中的时间、保护剂的温度以及混合时间)对青春双歧杆菌菌体存活率的影响。结果菌泥直接暴露于空气中,对双歧杆菌的存活有较大的影响,生产过程应尽量缩短暴露于空气中的时间;预先冷却到5~10℃的保护剂比常温的保护剂的保护效果更好;适当延长保护剂的混合时间,让保护剂充分渗入菌体内,能显著提高双歧杆菌的冻干存活率。结论冻干前处理对青春双歧杆菌存活有显著影响,缩短菌泥暴露于空气中的时间、保护剂预先冷却、适当延长混合时间可以有效保持菌体的存活率。     

枯草芽胞杆菌微生态制剂的研制

采用液体发酵工艺,确定枯草芽胞杆菌的最适发酵条件为:发酵温度30℃,初始pH值7.2,并以1%海藻酸钠和3%明胶组成的混合胶体溶液为囊壁材料,以4%氯化钙作固化剂将枯草芽胞杆菌制成微胶囊剂,稳定性试验结果显示经微胶囊包埋的枯草芽胞杆菌制剂,室温下保存1个月,活菌存活率为98.8%,保存3个月,活菌存活率为50.6%,保存6个月,活菌存活率为15.7%,均高于未经微胶囊化的样品;在4℃冷藏下保存3个月,未经微胶囊化的样品活菌存活率仅为经微胶囊包埋制剂的66.2%。该微胶囊制剂提高了活菌存活率,延长了活菌常温保存期。     

微生态制品中双歧杆菌活存因素的探讨

本文对双歧杆菌在冻干菌粉及其胶囊制品中影响其活存的因素进行探讨。结果证明：以ＰＨ６．２以上的５％海藻糖脱脂牛奶作保护剂悬浮双歧杆菌菌泥进行冻干,并封口保存于６±２℃冰箱,有利于双歧杆菌菌种的长期活存。用＜４％水份含量的双解珍珠粉或葡萄糖酸钙粉加等量麦芽低聚糖粉为辅应剂制成肠溶胶囊,以密封形式贮存于较低温度（＜２０℃）,可使产品中双歧杆菌在一年的有效期内,仍能保持６０％以上的活存率。     

双歧杆菌NQ1501双层微胶囊制备及其特性研究

目的提高双歧杆菌NQ1501对环境的耐受性。方法采用流化床底喷工艺,以蔗糖、麦芽糊精、海藻糖和改性淀粉为内层壁材,聚丙烯酸树脂为外层壁材制备双歧杆菌NQ1501微胶囊,并对制得微囊进行评价。结果制得4种双歧杆菌NQ1501微胶囊均具有较好的耐酸和肠溶能力,25℃贮存6个月后对照菌粉存活率为4.8%,采用4种不同内壁材的微胶囊存活率分别为蔗糖28.6%,麦芽糊精45.7%,海藻糖38.9%,改性淀粉55.2%。结论采用该制备工艺制得双歧杆菌NQ1501微胶囊具备较好的耐酸性、肠溶性和常温保存稳定性。     

双歧杆菌抗体制备方法的探讨

本文对双歧杆菌抗体的制备方法进行了探讨,并建立了检测双歧杆菌抗体的ＥＬＩＳＡ方法。结果表明,采用完整菌体、粉碎菌体、脂磷壁酸粗提物,获得的抗体效价均很低。先用活的卡介苗对动物进行多克隆刺激,再用活的双歧杆菌加福氏不完全佐剂获得的双歧杆菌抗体效价达１：２５６０,该抗体对双歧杆菌属的菌种能起免疫反应,与所试的其它种属细菌无交叉反应。此外,将免疫过双歧杆菌的小鼠用福氏不完全佐剂和ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞诱生腹水,从腹水中测得双歧杆菌抗体效价为１：１０００。此过程类似于单克隆抗体的生产过程,可用于制备大量的双歧杆菌多克隆抗体。     

培养基中的酵母营养物对罗伊氏粘液乳杆菌L840冻干存活率的影响

目的 探讨罗伊氏粘液乳杆菌L840培养基中酵母营养物种类及比例对冷冻干燥后菌体存活率的影响。方法 采用不同酵母营养物培养罗伊氏粘液乳杆菌,对筛选出的酵母营养物进行组合及比例优化,并比较真空冷冻干燥前后菌体细胞存活率。结果 酵母营养物成分影响发酵和菌体的抗冻干能力,培养基中酵母浸粉∶酵母蛋白胨为1∶1.5时冻干菌体细胞存活率最高,可达54%。结论 选择乳酸菌培养基成分时,不仅要考虑如何在培养过程中获得高密度的活菌,还应兼顾菌体对冷冻干燥耐性的影响,生长培养基中酵母营养物不仅可以提高菌体密度,还可通过改变细胞生理状态来影响细胞在冷冻干燥过程中存活的能力。     

冻干条件下地衣芽孢杆菌微胶囊的制备工艺优化及在模拟肠胃液中的生存能力

益生菌作为抗生素的替代品被广泛用于肠胃疾病的治疗,但是益生菌容易受到胃肠液环境的破坏,不能有效发挥其药效。为了提高地衣芽孢杆菌在胃肠液的存活率,以结冷胶、β-环糊精和酪朊酸钠为复合壁材,在冻干条件下将地衣芽孢杆菌包埋为微胶囊,以冻干微胶囊的包埋率为响应值,设计正交试验考察3种壁材间的最佳配比。在复合壁材最佳配比条件下,进行壁材浓度、反应转速和地衣芽孢杆菌添加量单因素实验,再根据单因素实验结果进行正交试验,优化微胶囊制备工艺,测定地衣芽孢杆菌冻干微胶囊的理化性质以及在模拟胃肠液(SGJ)中的存活率。结果表明,地衣芽孢杆菌微胶囊完全暴露在模拟胃液(simulated gastric fluid, SGF)环境中180 min后,微胶囊的活菌数平均为6.87 lg(CFU/g),比未包埋的芽孢杆菌高3.14 lg(CFU/g);地衣芽孢杆菌微胶囊完全暴露在模拟肠液(simulated intestinal fluid, SIF)环境中180 min后,微胶囊的活菌数平均为10.36 lg(CFU/g),比未包埋的芽孢杆菌高2.34 lg(CFU/g)。实验为微囊化的地衣芽孢杆菌在肠胃疾病防治...     

分离自婴儿粪便的嗜酸乳杆菌和长双歧杆菌的常温保存探究

目的:试验不同的保护剂成分配方,探究分离自婴儿粪便的2种益生菌(嗜酸乳杆菌和长双歧杆菌)在常温条件下保持较高活性的可行方法。方法:利用均匀设计实验方法设计保护剂配方,用于保存特定高活性高稳定性的菌种,在不同时间点检测活菌数,分析数据得出最佳保护剂成分比例。结果:嗜酸乳杆菌10A31保护剂最佳配方为:海藻糖∶谷氨酸∶天冬氨酸=5∶24∶24;长双歧杆菌11A11保护剂最佳配方为:海藻糖∶谷氨酸∶麦芽糖=34∶11∶10;用最佳保护剂配方保存后,嗜酸乳杆菌10A31在200 d时的菌落计数结果为3.87×109CFU/g,长双歧杆菌11A11在160 d时为1.53×109CFU/g,均具有较高的活性。结论:最佳保护剂配方使2个菌种常温保存期至160 d。     

保加利亚乳杆菌冻干保护剂的优化

目的 研究4种常用冻干保护剂的添加量.方法 以保加利亚乳杆菌为出发菌株,以其冻干菌粉活菌数为指标,通过正交试验优化4种常用冻干保护剂的添加量.结果 保加利亚乳杆菌的最佳冻干保护剂配比为乳糖∶谷氨酸钠∶抗坏血酸∶脱脂奶粉=3∶1∶2∶7,其中脱脂奶粉对菌体保护效果极显著(P＜0.01),乳糖对菌体保护效果显著(P＜0.05).结论 通过对保加利亚乳杆菌的4种常用冻干保护剂的添加量进行优化,为保加利亚乳杆菌的冻干工艺提供基础.     

胶类物质对固体制剂中青春双歧杆菌稳定性研究*

考察了５０Ｌ发酵罐中青春双歧杆菌在混合胶类物质的果蔬汁底料中的生长及其溶氧率,ｐＨ值、可溶性固形物等变化规律,就培养后的双歧杆菌制备活菌固体制剂的工艺方法进行比较。结果表明胶类物质能缓冲培养基质中酸性环境,减少发酵和制剂过程中空气氧对菌细胞的毒害,干燥后的固体制剂中活菌回收率高,贮存的稳定性增加。提示了明胶和黄原胶在配料干燥后对菌细胞的包埋及保护作用。并制定出关于青春双歧杆菌保健片或粉料的简便生产     

双歧杆菌固定化的研究

双歧杆菌固定化的研究杨基础,刘佳（清华大学化学工程系,北京１０００８４）目前市场上的大多数双歧杆菌产品活菌量很低,保存不到一个月就全部死亡,这是当前亟待解决的问题之一。本文对双歧杆菌的固定化进行了研究,旨在提供一种制备高活性双歧杆菌片剂或胶囊的新方法...     

复合益生菌制剂"海生元"制备各阶段效力稳定性观察

目的 :检测复合益生菌制剂“海生元”制备储存各阶段益生菌的存活数量及其生物表型的稳定性 ,以判定该制剂的效力稳定性。方法 :在有效期内 (1年 ) ,每月定期随机取 5个“海生元”胶囊 ,按常规对M9(乳杆菌QJ4 0 5 )和T9(双歧杆菌QJ4 0 5 )两株益生菌进行活菌培养计数和菌种鉴定。结果 :(1)在常温保存条件下的一年效期内 ,制剂中的 2种益生菌 (M9和T9)存活数量略有下降趋势 ,但各次结果均符合产品的效力要求 (活菌数 >10 8/ g)。 (2 )M9和T9各次纯培养的形态学、生化反应模式及终末代谢产物气相色谱定量分析结果均分别符合其乳杆菌和双歧杆菌的菌种鉴定特征。结论 :复合益生菌制剂“海生元”在常温保存的 1年有效期内 ,可保持制剂中益生菌的活菌数量及稳定的生物表型特征 ,从而保证该制剂的效力稳定性和疗效要求。     

构巢曲霉冻干菌粉的制备及优化

【背景】目前,用以降解园林绿化废弃物中木质素的菌剂多为液体菌剂或固体菌剂,鲜有对粉状菌剂的研究。【目的】研制高活性冻干菌粉,提高其冻干存活率并优化其工艺,以解决液体菌剂或固体菌剂在运输、储藏及使用上存在的问题。【方法】以一株木质素降解菌构巢曲霉(Aspergillus nidulans)为研究对象,利用真空冷冻干燥法制备冻干菌粉。以菌株的冻干存活率为评价指标,通过单因素试验筛选适于菌株冻干过程的保护剂种类及浓度梯度,再通过正交试验优化冻干菌粉复合保护剂配方。获得配方后,进一步探究冻干菌粉的复水条件和储藏条件。【结果】保护效果较优的4种保护剂成分经复配后对冻干存活率的影响顺序为蔗糖>葡萄糖>脱脂乳粉> α-乳糖。经优化后的保护剂配方以蔗糖15%、葡萄糖1%、α-乳糖10%、脱脂乳粉1%为最佳;复水条件以生理盐水为溶剂,复水30 min为最优。在此条件下制备和使用冻干菌粉,菌株的冻干存活率可达83.33%,有效活菌数可达1.2×10¹⁰ CFU/g。最佳储藏温度为-20 ℃,在此温度下保存28 d后,菌粉活性无明显下降。【结论】该研究获得的制备和储藏构巢曲霉冻干菌粉条件,具有菌株损失率低、可长时间保存的特点,对推进木质素降解菌在实际生产中应用具有积极作用。     

双歧杆菌脂磷壁酸抗体的制备及其在双歧制品中的检测应用

目的制备双歧杆菌脂磷壁酸抗体并用以检测双歧制品中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量。方法提取两歧双歧杆菌脂磷壁酸,加甲基化牛血清白蛋白与佐剂免疫预先已用卡介苗进行多克隆激活的BALB／C小鼠,间接ELISA法检测抗体效价与特异性,用免疫血清经双抗体夹心ELISA法和免疫结合微量培养的方法分别检测酸奶中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌量。结果免疫血清最高效价可达1：1280,与所测其他人体双歧杆菌种属存在较强交叉反应,与非双歧杆菌种属无交叉反应。对于脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测取得良好结果,检测线可达10^5 CFU／ml。结论以双歧杆菌脂磷壁酸制备免疫血清,效价高,属特异性好,可用于双歧食品中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测。     

用生料制备功能性双歧醋生产工艺的实验室研究

目的将双歧杆菌、醋酸菌、酵母菌和粉碎的制醋原料及麸曲共同发酵,通过生料制醋的方法来制备功能性双歧醋。方法将粉碎的玉米与麸曲、酵母液、麸皮和水搅拌均匀,使其经过液态糖化和酒精发酵后,接入醋酸菌和双歧杆菌(二者比例为1∶1),同时加入辅料,进行醋酸发酵,当检测到醋酸酸度为5.0%~7.5%时,加入食盐终止发酵,经过过滤,除菌澄清得到功能性双歧醋。结果双歧醋的最终醋酸度为3.2%,外观红棕色,光泽度好,清澈透明,无沉淀和悬浮物。总菌数:醋酸菌为3.3×1011/m l,双歧杆菌为1.9×107/m l;活菌数:醋酸菌为1.7×1011/m l,双歧杆菌为6.8×106/m l;大肠菌群数3个/100 m l;致病菌:不得检出。结论双歧杆菌及其代谢物可以在双歧醋中存活,生料固态发酵制备双歧醋的方法可行。     

两种不同保护剂冻干的仔猪副伤寒活疫苗质量比较

【目的】系统比较两种不同保护剂冻干的仔猪副伤寒活疫苗(耐热苗和常规苗)质量指标,为科学评价两种疫苗质量提供参考。【方法】制备耐热苗和常规苗各3批,分别进行物理性状、纯粹性、活菌计数、安全性、剩余水分、真空度和保存期等参数测定和比较,同时比较冻干前后的活菌存活率及耐老化性能。任选耐热苗与常规苗1批,按3×109 CFU分别口服与肌肉注射仔猪各5头,设相同条件下不免疫对照5头,30 d后静脉注射致死量猪霍乱沙门氏菌,临床观察30 d后评估疫苗的效力。【结果】耐热苗及常规苗的物理性状、纯粹性、活菌计数、安全性、剩余水分、真空度均符合现行《中国兽药典》的要求。3批耐热苗冻干菌存活率分别为88.2%、83.1%和86.4%,耐老化试验后的活菌存活率为83.6%、82.9%和88.8%;然而3批常规苗冻干菌存活率分别为52.3%、56.2%和61.4%,耐老化活菌存活率分别为58.5%、60.2%和54.7%。经37°C、7 d耐老化试验结果显示,耐热苗物理性状良好,而常规苗原有团块表面凹陷1/4-1/2。保存期结果表明耐热苗4°C有效期可达24个月,常规苗仅为9个月。仔猪免疫攻毒结果表明,耐热苗肌肉注射及口服免疫均达100%(5/5)保护;常规苗肌肉注射达80%(4/5)保护,口服达100%(5/5)保护,不免疫对照0保护(5/5死亡)。【结论】耐热苗具有较高的冻干菌存活率和良好的耐老化性能,4°C可长期保存且不影响其免疫效力。