高产人参寡糖素培养细胞克隆系的筛选

人参（ＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇＣ．Ａ．Ｍｅｙ．）培养细胞经细胞平板克隆,获得近３００个克隆系。克隆系在细胞生长速率和寡糖素含量及产率上均存在显著差异,且寡糖素产率和细胞生长之间有明显的相关性。经１１代连续继代培养观察及过氧化物酶同工酶谱特征分析,筛选到一株寡糖素产率高且稳定的克隆系ＰＧ－１８０,其平均生长速率是０．４９５ｇ于重／Ｌ·天,为原始株系的１．３９倍,平均寡糖素含量为１４．６９％干重,是亲本的１．６５倍,平均寡糖素产率是２．１８３ｇ／Ｌ,为原始株系的２．３２倍。比较克隆系ＰＧ－１８０和原始株系细胞悬浮培养时间进程发现,由人参培养细胞生产寡糖素的最佳细胞收获期为３周左右。     

高产人参寡糖素培养细胞变异克隆系的筛选

用２ｍｍｏｌ／Ｌ的ＭＮＮＧ处理经过滤的人参悬浮培养细胞１小时后,细胞存活率下降显著,细胞克隆植板率只是对照组的１０．１２％。经细胞平板克隆共获得克降系１５１株,其中很多克隆系转移培养中生长缓慢,甚至不生长而死亡,经分析可供测定的克隆系生长的寡糖素含量的差异,对１１株寡糖素含量较高克隆系经连续１０代继代培养观察,选出一株稳定高产人参寡糖素优良克隆系ＰＧＭＢ－３７,其平均生长速率是０．５５８ｇＤＷＬ＾     

人参培养细胞的单细胞克隆

培养基组成成分能影响人参培养细胞单细胞克隆的植板率。Ms培养基中2,4－D和KT需要一个适合的浓度比才能有效地促进细胞克隆的形成,其最佳浓度组合是2,4－D1．5mg／L和KT O．5mg／L。适合人参细胞克隆形成的NH₄N0₃浓度是400mg／L,CaCl₂.2H₂O浓度是750mg／L。向培养基中补加适量的琥珀酸、精氨酸和维生素等都能明显提高植板率。通过优化培养基的组成成分,细胞克隆的植板率可增加到2.34倍。悬浮培养两周左右的细胞平板培养最有利克隆形成,当细胞植板密度低于4×10³个细胞／ml时,几乎没有克隆形成。     

细胞培养生产人参寡糖素降低成本的途径

在人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ）细胞悬浮培养中,以无离子水代替重蒸馏水,细胞生长速率和寡糖素产率分别降低２．３％和２．９％。用白糖代替蔗糖,细胞生长速率和寡糖素产生率分别降低１．７４％和１．２３％。综合上述两方面结果,以无离子水和白糖分别替代原培养基中的重蒸馏水和蔗糖组成替代培养基,用替代培养基培养人参培养细胞,其生长速率可达０．５０９ｇＤＷ／Ｌ．ｄ．寡糖素产率可达１．４４３ｇ／Ｌ,和原培养基相     

寡糖素对红花及三七培养细胞的生理作用

三种寡糖素,即来自人参(Panax ginseng)培养细胞的人参寡糖素、红花(Carthamus tinctorius)培养细胞的红花寡糖素、黑节草(Dendrobium candidum)植物的黑节草寡糖素对红花及三七 (Panax notoginseng)的培养细胞的生长及代谢产物的含量均有显著的促进作用。寡糖素可耐高温高压(121℃、1.2bs／cm2)灭菌15分钟而不失活,其对植物培养细胞的影响与利用过滤方法灭菌的效果相似。红花寡糖素对红花悬浮培养细胞作用的适宜浓度是5-10mg/L,而在愈伤组织中为15mg/L,在三七培养细胞进入生长旺盛(培养至22天)时加入黑节草寡糖素,再培养2天后其生长即提高。黑节草寡糖素均能缩短红花及三七培养细胞生长的延缓期,提前进入对数生长期及指数生长期。并且使红花培养细胞中a-生育酚在细胞生长最活跃的指数生长期大量积累,最终增加了培养细胞及代谢产物的产率。     

人参寡糖素对三七悬浮培养细胞生长的效应

从人参培养细胞的细胞壁中分离纯化到不同分子量的单体人参寡糖素。试验结果表明命名为人参寡糖素Ⅶ和人参寡糖素Ⅷ的两种寡糖素对三七悬浮培养细胞的生长具有明显的促进作用,其增长率分别为１９．３４％和１０．５８％,人参寡糖素Ⅶ的适宜浓度为５—１０ｍｇ／ｌ。在高浓度下（大于２５ｍｇ／ｌ）稍抑制培养细胞生长。在细胞培养２２天（指数生长期）后．加入１０ｍｇ／ｌ的人参寡糖素Ⅶ．然后再培养２天。其生长速率即提高,加入人参寡糖素Ⅷ后．缩短了三七细胞悬浮培养生长的延缓期．提前进入对数生长期和指数生长期,并在对数生长期和指数生长期作用最明显,因而最终收获时培养细胞的产率增加。     

人参培养细胞单细胞克隆的条件培养

来自细胞悬浮培养物的条件培养基能显著地促进人参培养细胞的单细胞在较低细胞植板密度培养时的克隆形成。每毫升含3×10³个细胞时,条件培养的植板率是普通平板培养的4倍。细胞悬浮培养12－16天时所制备的条件培养基活性最大,在一定浓度范围内随条件培养基浓度增加。细胞克隆植板率随之增加。条件培养基具有一定的生理作用专一性。看护培养和条件培养的比较,表明前者在细胞密度较低时能更有效地促进细胞克隆的形成和生长。条件培养基在4℃条件下贮存两周仍保持活性稳定,并且能耐受高温处理。当受到强酸或强碱处理其活性失去．但在弱酸或弱碱条件下稳定。     

人参寡糖素M对红花培养细胞生长与α-生育酚形成的影响

人参寡糖素M能提高红花(Carthamus tinctorius)培养细胞的生长速率和培养细胞中代谢产物α-生育酚的含量。其最适作用浓度在愈伤组织培养中为5mg/L。在红花细胞悬浮培养加入人参寡糖素M1d后,培养细胞中α-生育酚的含量即提高,但由于累积效应,因而于细胞接种当天同时加入人参寡糖素M对细胞生长和α-生育酚含量的提高效果较好。加入人参寡糖素M可缩短红花悬浮培养细胞生长的延缓期,并于指数生长期作用最明显;另外可使细胞生长及α-生育酚积累同时提前达到最高值,因而缩短了细胞收获时间。     

寡糖素对西洋参和人参愈伤组织培养的影响

红花、人参和黑节草寡糖素(简称CO、GO和DO)分别加入到培养基中,均能影响西洋参和人参愈伤组织生长和皂甙的合成。CO、GO和DO促进西洋参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、15ppm和10ppm,皂甙产率分别为14.89mg/flask、11.24mg/flask和14.53mg/flask,均明显高于对照(8.22mg/flash).CO、GO和DO促进人参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、20ppm和5ppm,皂甙产率分别为11.79mg/flask、11.20mg/flask和10.48mg/flask,均明显高于对照(6.65mg/flask),它们在适度浓度下对人参愈伤组织的生长均有促进作用。     

Screening of Clone Lines with High Yield of Oligosaccharins from Culture Cells of Panax ginseng

Cell plating clone technique was employed to screen clone lines with high yield of oligosaccharins from culture cells of Panax ginseng C. A. Mey. Near 300 clone lines were obtained. The results from some clone lines analysed implied that these clone lines were significantly different in cell growth rate, oligosaccharins content and yield. Furthermore, there was a distinct correlation between oligosaccharins productivity and cell growth. A more stable high-yield oligosaccharin clone line PG-180 had been selected according to the characteristics of growth rate, oligosaccharin yield and peroxidases isozyme patterns during successive subculturing of 11 generations of clone lines. The mean growth rate of clone line PG-180 was 0. 495 g dry wt/L · d, and was 1.39 folds higher than to the original strain. Its mean content and yield of oligosaccharins were 14. 69 % dry wt and 2.183 g/L, which were 65 % and 132% respectively higher than those of the original strain. In comparing the time course of cell suspension culture between clone line PG-180 and the original strain, the optimal period for high oligosaccharin production from P. ginseng culture cells was approximately three weeks.     

人参培养细胞中活性六糖的分离及结构鉴定

将用酸水解人参细胞方法得到的寡糖素,是一组聚合度由３－１２单糖组成的水溶性混合物,经活性碳柱,ｏｗｅｘ５０（Ｈ＾＋）柱,Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－２凝胶柱后由半制备型ＯＤＳ柱在ＨＰＬＣ分离到一个六糖,通过ＧＣ,ＧＣ－ＭＳ,ＦＡＢ－ＭＳ和＾１３４Ｃ－ＮＭＲ测定,推测出了这个     

小型生物反应器内人参不定根的人参皂苷累积

对小型生物反应器(3~10 L)培养人参不定根的生长和人参皂苷(Rg1、Re、Rb1)的累积规律,以及蔗糖浓度、初始接种量对其生长和人参皂苷累积的影响进行研究。结果表明:小型生物反应器内人参不定根的最佳收获周期为7周。初始接种量和蔗糖浓度影响生物反应器内人参不定根的生长和人参皂苷的累积,20或40 g/L蔗糖对人参不定根的生长和人参皂苷的累积优于60 g/L蔗糖;5和10 L生物反应器内最佳初始接种量分别为15和30g,其不定根的生长量分别为9.29和19.17 g,人参皂苷含量分别为5.16和4.58 mg/g。生物反应器内培养7周的人参与栽培4年的人参相比,人参皂苷Rg1和Re含量相差不大,但栽培人参中Rb1的含量远高于生物反应器中所培养的人参不定根。     

三七环二肽成分和人参内酰胺成分

From the roots of Panax notoginseng fourteen cyclodipeptides 1-14 were isolated including one new compound (1),seven new natural compounds (4-10) and six known compounds (2-3,11-14) together with one known other compound 15.The chemical structure of 1 was elucidated as cyclo-(Leu-Thr) based on spectral methods.From the roots of Panax ginseng five known lactams (16-20) includingpyrng lutamic acid were isolated together with butyric diacid,daucosterol and sucrose.The primary binactivity test showed that pyroglutamic acid and its n-butyl derivative have weak Ca^2 antagonistic activity.     

野生人参种子的超低温保存

人参（ＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇＣ．Ａ．Ｍｅｙ．）是珍贵的药用植物，由于长期过度采挖，资源枯竭，现存于我国东北地区的野生人参已处于濒临绝灭的边缘，被列为国家一级重点保护植物［１，２］。所以在加强其就地保护的同时，人参种质资源的迁地保存也是非常必要的。按...     

红果人参叶中cDNA文库的构建

以四年生红果人参叶片为材料,提取叶中总RNA合成cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上。采用电穿孔法将重组质粒转化到DH5α中。经文库质量鉴定表明:原始文库滴度为1.008×106pfu·mL-1,扩增后的文库滴度为2.968×109pfu·mL-1,重组率接近100%,插入片段大小在0.5~2kb之间,平均为0.85kb,表明已成功构建了红果人参叶中cDNA文库。     

人参细胞生物合成熊果苷转化体系的建立

以人参(Panax ginseng C. A. Mey.)培养细胞为生物反应体系,利用外源氢醌为底物,对熊果苷的生物合成进行了研究.TLC鉴别表明,人参细胞可以将外源的氢醌转化为熊果苷;以熊果苷含量和氢醌的转化率为指标,对人参细胞生物合成熊果苷的基本条件(氢醌浓度、转化持续时间、细胞培养阶段)进行了探讨, 结果表明,MS固体培养基上培养32 d的人参细胞,在含有2 mmol·L-1氢醌的生物合成培养基中转化24 h后,合成的熊果苷含量占细胞干重的7.176%,氢醌转化率也达到79.15%.     

Improved production of ginseng polysaccharide by adding conditioned medium to Panax notoginseng cell cultures

By adding 50% (v/v) filtered culture broth to fresh MS medium, the specific growth rate of Panax notoginseng was increased from 0.046 d–1 to 0.068 d–1, and the polysaccharide production and productivity reached 1.21 g l–1 and 61 mg/(ld), respectively, which were 1.3- and 2.3-fold of the control. Further supplementation of the conditioned medium with sucrose, ammonium, nitrate and phosphate gave a cell density of 13.7 g l–1 and a specific growth rate of 0.086 d–1. Polysaccharide production was 1.65 g l–1 and the productivity was 78 mg/(ld).