直立平板式连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶具有化学稳定性,透明度高,聚合体孔径可控制等性质,以及不存在非特异吸附和电渗作用等,因此聚丙烯酰胺凝胶电泳在分子生物学、生物化学、临床化学等学科的分析或分离方法中愈来愈占有重要地位。自Ornstein及Davis首先介绍了聚丙烯酰胺电泳法以来,无论在理论的深度和应用的广度上都有较大的发展,国内外均有专著。本文仅讨论直立平板式连续浓度梯度电泳,它的主要优点是分辨率高,同时由于在同一块凝胶板上可进行几个样品的电泳更便于比较和辨认,并可为进行双相电泳、分子量测定或制备电泳提供基础。     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦

等电聚焦也曾称为等电点分离、等电点划分、等电点分析、聚焦电泳等。1966年瑞典学者Vesterberg和Svernsson首先合成了两性载体电解质,并成功地用于肌红蛋白分离,使这方法具有实用价值。等电聚焦的先决条件就是要求有稳定的pH梯度。按照支持pH梯度的介质不同,可     

聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦

自Awdeh和Leaback等以聚丙烯酰胺凝胶作抗对流支持介质进行薄层等电聚焦以来,又出现过以Sephadex、Agarose、醋酸纤维素等作抗对流介质的报道。当前应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶和Agarose凝胶,现以前者为例介绍方法的原理、操作和应用。     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离血红蛋白的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,借助圆盘电泳仪的简易装置,对正常血红蛋白及异常血红蛋白(Hb)等进行了分析,获得满意效果。一、方法 1.凝胶制备 40％聚丙烯酰胺液(丙烯酰胺38.4克及甲叉双丙烯酰胺1.6克溶于蒸馏水至100毫升)1份,20％两性载体(Ampholine,国产、pH4—10)0.5份,蒸馏水3份,0.25％过硫酸铵液(临用前配制)2份,混匀,立即分装于内径4毫米,长9厘米的玻管中,胶长6厘米,日光灯下聚胶(约2小时),待胶聚合后,加样     

核糖核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳

自从1959年报道了聚丙烯酰胺凝胶电泳以来,这种电泳方法已有了迅速的发展和广泛的应用。它与纸电泳、琼脂电泳、淀粉胶电泳等相比,具有更多的优点。例如:机械强度好、无色透明、纯度高;在很多种溶剂中不溶解、不带电荷,故没有造成污染的问题,也没有     

一种改进的超薄聚丙烯酰胺等电聚焦电泳实验

目的:介绍一种自制、简易、高效的平板微型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法。方法:将载玻片黏合作为制胶模具,剪滤纸制成上样芯子进行等电聚焦电泳。结果:电泳条带清楚,样品容量大,电泳时间短,操作性强。结论:此方法简单、有效、实用,所需凝胶量少,节约成本,值得推广。     

人表皮生长因子发酵液的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

一般蛋白质样品的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)通常只用一种浓度的分离胶(单层分离胶)。我们发现,将这种方法用于未经处理的重组人表皮生长因子(rhEGF)发酵液的电泳时,效果不好。我们推测可能是由于发酵液成分复杂,蛋白分子大小不均。基于这种考虑,我们就分离胶浓度对电泳效果的影响进了一些探索。     

人胎儿8种组织超氧化物歧化酶活力比较和等电聚焦电泳分析

哺乳动物细胞含有两种超氧化物歧化酶(SOD),即CuZn—SOD和Mn—SOD,组织细胞SOD活力的高低与其物质代谢的活跃程度密切相关。本实验取3例妊娠后期胎儿的脑、肝、肾、心肌、骨骼肌、肺、脾及胸腺8种组织,用冷生理盐水充分洗去所含血液,采用化学发光法测定各组织的SOD活力,然后组织匀浆在4℃条件下经100 000×g超速离心,取上清直接进行薄层(0.5mm) 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(pH范围为3.5～10.0)。电泳在1400V、35mA、15W、4℃条件下进行,电泳完     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的初步经验

聚丙烯酰胺凝胶电泳是目前认为具有较高分辨能力的分离和分析蛋白质等物质的一种方法。为了鉴定一些生物化学制剂的纯度以及观察在疾病中血清蛋白的变化情况,我们初步建立了这一方法,并用以观察了人、狗血清的电泳情况和一种酶分离的电泳图谱。     

冷冻前后人红细胞膜蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

冷冻保存红细胞在血液保存工作中是一项新技术。以甘油为冷冻保护剂,加入新鲜红细胞中,在-80℃冷冻保存,可达到长期保存的目的,为了检验在血液保存过程中红细胞的质量,国外也曾对血库内保存的枸椽酸、枸椽酸钠、葡萄糖(简称ACD)全血中红细胞膜上蛋白质组分的改变情况进行研究。例如1969年布莱纳(Brener)等曾用淀粉凝胶电泳分析新鲜红细胞膜蛋白与保存一定时间后红细胞膜蛋白;1971年穆尔(Moore)对常规方法保存的全血,红细胞膜上蛋白质改变情况进行分析。本文使用硫酸十二醋钠盐(SDS)聚丙烯酰胺凝膜电泳分析冷冻前后红细胞膜蛋白,通过了解红细胞膜改变情况,进一步证明冷冻保存后红细胞结构完整,并肯定了其保存价值。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。     

细菌蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定

细菌蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定华西医科大学口腔医学院口腔生物医学工程重点实验室成都６１００４１黄毅早在１９０８年,电泳现象就已被发现,Ｔｉｓｅｌｉｕｓ于１９３７年对电泳仪器作了重大改进,随后电泳技术才日益普及并成为鉴定生物大分子的基本工具。Ｆｏｗｌ...     

聚丙烯酰胺凝胶电泳方法的一些改进

聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质时所使用的“高pH系统”的电极缓冲液,通常是Glycine-Tris缓冲液。这两种试剂比较贵,虽然可以重复使用,但消耗量大,不利于普及。此外凝胶的常规染色和脱色需要较长的时间。作者在研究天然橡胶蛋白质的分离分析时,对这些方法作了一些改进:使用“改进高pH系统”的电极缓冲液——硼酸、NaOH缓冲液、改进分离凝胶的制备,并采用了快速染色和脱色,缩短了试验的时间。本法应用于人血清蛋白的测定,亦得到满意的结果。材料与方法 1.天然橡胶的蛋白质新鲜天然胶乳用2％醋酸凝固(5∶1v/v),用压榨的方法取出天然橡胶乳清(乳清相当于人血清),可溶性蛋白质存在于乳清中。 2.正常人血清湛江医学院附属医院提供。     

重组人绒毛膜促性腺激素嵌合肽12的聚丙烯酰胺凝胶电泳制备

利用板状聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)方法 ,建立了一步分离纯化基因工程表达蛋白质的新技术。在构建的人绒毛膜促性腺激素嵌合肽 (CP1 2 )表达率约为 1 %的情况下 ,借助分析制备两用型板状PAGE装置 ,通过下行和上行两次电泳以及用透析膜隔离形成收集槽这两步改进 ,从包涵体抽提液中一步纯化了目的表达产物。结果表明 ,一次上样总蛋白质量为 3～ 4mg的PAGE ,可获得 5 0～ 1 0 0 μgCP1 2蛋白 ,其相对均一性达到 95 %。研究提示此改良的制备性PAGE新技术 ,是一种分离纯化低分子量目的蛋白质的好方法     

微量DNA的聚丙烯酰胺凝胶薄板电泳分析

聚丙烯酰胺凝胶薄板电泳,是进行微量DNA分析的一种有效方法。它能快速鉴定DNA的迁移位置,并将分子量大小不同的DNA片段进行分离。通常DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳均采用2—3毫米厚的平板胶,由于板胶厚度大,因