恒河猴睾丸内激素调控的离体研究 I.恒河猴睾丸Leydig细胞的离体培养及激素分泌的研究

为了研究恒河猴睾丸的激素分泌及其调节作用,作者发展了一种简便分离睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞和用无血清培养的实验模型,研究了人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）、恒河猴绒毛膜促性腺激素（ｍＣＧ）、环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ和雌二醇（Ｅ２）对睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞激素分泌的影响。结果显示离体的Ｌｅｙｄｉｇ细胞对低剂量同源的ｍＣＧ和异源的ｈＣＧ产生睾酮都有依赖反应,而高剂量的前者对Ｌｅｙｄｉｇ细胞分泌睾酮有明显的抑制作用,后者不出现反向调节;ｃＡＭＰ和Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ对Ｌｅｙｄｉｇ细胞分泌睾酮有刺激作用;雌二醇具有明显抑制ｈＣＧ和ｍＣＧ促睾丸分泌的作用     

恒河猴睾丸间质细胞对支持细胞分泌雌二醇的影响

采用无血清培养的方法,分析了促肾上腺激素皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、cAMP、内啡肽(endorphin)和纳络酮(naloxone)对原代共培养的恒河猴(Macaca mulatta)睾丸间质细胞与支持细胞雌二醇分泌水平的影响。结果显示:ACTH、LH、cAMP和纳络酮对原代共培养恒河猴睾丸间质细胞与支持细胞的雌二醇分泌水平具有促进作用,并且这种影响与共培养的间质细胞数量呈线性关系,即共培养的间质细胞数量增加,雌二醇分泌水平亦明显上升;而内啡肽对原代共培养恒河猴睾丸间质细胞与支持细胞的雌二醇分泌水平有明显的抑制作用。研究表明,恒河猴睾丸的间质细胞对支持细胞分泌雌二醇具有调节作用。     

米非司酮对恒河猴促性腺激素分泌水平的抑制作用

目的分析米非司酮（RU486）对恒河猴促性腺激素分泌水平的影响,探讨RU486影响恒河猴促性腺激素分泌的可能机制,为临床安全用药提供理论依据。方法采用生物测定法测定恒河猴促性腺激素,比较在不同情况下恒河猴促性腺激素的分泌水平。结果实验表明：不同时间（0、0.5、1、2、4、8、12、244、8 h）用药后,RU486对恒河猴促黄体激素（LH）、促滤泡激素（FSH）分泌水平的影响,在用药0.5、1、24、h后,对LH、FSH分泌均有抑制作用,其中在用药4 h时,LH、FSH分泌水平均有显著的降低,而用药81、2、244、8 h后,LH、FSH浓度没有显著差异。在月经周期的不同时期一次用药后发现,卵泡期：RU486对LH、FSH分泌水平影响较小;排卵期：RU486对LH、FSH峰的发生延迟现象;黄体期：观察到RU486对FSH、LH基础分泌水平及脉冲的幅度出现下降。结论RU486对恒河猴的LH、FSH分泌水平,在不同情况下有显著差异。     

恒河猴睾丸内激素调控的离体研究Ⅲ--雌激素对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响

目的采用体外无血清培养方法,研究雌激素(E2)对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响.方法恒河猴睾丸活体组织,经胶原酶消化,BSA密度梯度重力沉降分离细胞,得到的Leydig细胞置二氧化碳培养箱培养,收集培养液,应用放射免疫测定法测定培养液中的睾酮含量.结果不同剂量的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮都能促进睾酮的含量升高,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著;当孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮分别与E2合并应用时,有明显地抑制作用,同样以17α-羟孕烯醇酮的抑制作用最为显著.结论E2抑制恒河猴Leydig细胞睾酮的分泌是由于影响了3β-羟类固醇脱氢酶、17α-羟化酶以及17,20-碳裂酶的活性所致.     

链脲佐菌素诱导糖尿病恒河猴胰岛细胞数量的变化

目的观察链脲佐菌素（STZ）诱导恒河猴糖尿病动物模型胰岛细胞数量变化和激素表达情况。方法健康恒河猴5只,小剂量（30 mg/kg）多次静脉注射STZ,濒死状态时将动物安乐死。取胰腺制成石蜡切片,用免疫组化染色法显示胰岛A、B、D和PP细胞,并对结果进行图像分析和统计学处理。结果与对照组比较,模型组B细胞数量减少,胰岛素表达降低（P〈0.01）。A细胞增生,胰高血糖素表达增加（P〈0.01）。PP细胞增生,胰多肽表达增加（P〈0.05）。D细胞数量与对照组比较无显著性差异。结论恒河猴糖尿病动物模型胰岛各种细胞的数量和激素表达情况与人类糖尿病类似。     

多巴胺、雌二醇及睾酮对虎纹蛙离体脑垂体促性腺激素分泌的影响

为了解虎纹蛙促性腺激素分泌的调节机理,用离体静态培育系统和放射免疫测定法,研究了多巴胺（ＤＡ）、雌二醇（Ｅ２）和睾酮（Ｔ）对雌性虎纹蛙离体脑垂体薄片促黄体激素（ＬＨ）和促卵泡激素（ＦＳＨ）分泌活动的影响。结果表明：０．１～１０μｍｏｌ／Ｌ的ＤＡ对成熟前期和冬眠期虎纹蛙离体脑垂体型薄片的ＬＨ及ＦＳＨ的释放都有抑制作用,并且随着ＤＡ浓度的增加,抑制作用逐渐增强。１和１０μｍｏｌ／Ｌ的Ｅ２显著刺激成熟前     

恒河猴piwil4基因的鉴定与表达分析

为了研究人类近亲恒河猴中PIWI家族蛋白PIWIL4的结构和表达情况,文章首次利用同源比对和RT-PCR方法克隆了恒河猴piwil4基因,检测了其mRNA在恒河猴心脏、脑、结肠、附睾和睾丸5种组织中的表达情况,利用生物信息学的方法对恒河猴piwil4基因和人的PIWIL4(HIWI2)基因编码的蛋白产物进行了同源性分析和结构域分析,并进一步利用免疫组化的方法比较了PIWIL4蛋白在成人、成年恒河猴和性未成熟恒河猴睾丸组织中的表达分布。结果表明,恒河猴piwil4 mRNA在多组织中表达,恒河猴和人的PIWIL4蛋白的氨基酸序列同源性达97%以上,均含有PAZ和Piwi结构域,它们在两物种成年个体睾丸组织中空间分布一致,但在不同发育阶段恒河猴睾丸组织中的分布发生了改变,幼猴中PIWIL4蛋白主要表达于生精小管细胞的细胞核,在成年猴睾丸组织中则表达于各种细胞的胞浆中。上述结果提示,piwil4基因在人类和恒河猴精子发生过程中作用类似,PIWIL4蛋白在幼猴和成年猴睾丸组织中的表达差异提示它们在不同发育阶段功能的改变。     

鸡GnRH对体外培养的鸡卵泡膜细胞合成甾类激素的作用

在建立鸡卵泡膜细胞体外无血清贴壁培养模型基础上,研究了鸡促性腺激素释放激素（ｃＧｎＲＨⅡ）对鸡卵胞膜细胞合成睾酮（Ｔ）和雌二醇（Ｅ２）的直接作用;以及在绵羊促黄体激素（ｏＬＨ）或促卵泡激素（ｏＦＳＨ）存在时,ｃＧｎＨⅡ对膜细胞合成Ｔ或Ｅ２的影响。实验结果如下：①在培养液中单独加入ｃＧｎＲＨⅡ,能促进Ｆ５、Ｆ３卵泡膜细胞合成Ｔ及Ｅ２,并具有剂量依赖关系;而对于Ｆ１卵泡膜细胞的作用效果不明显。②ｃＧｎＲＨⅡ与ｏＬＨ（５０ｎｇ）共同处理,当ｃＧｎＲＨⅡ低剂量（１００ｇ）时,膜细胞Ｔ合成量明显增加,而加大剂量时,Ｔ合成量则显著降低。③ｃＧｎＲＨⅡ（５００ｎｇ）与ｏＦＳＨ（５０ｎｇ）共同处理对膜细胞Ｅ２的合成有抑制作用,降低ｃＧｎＲＨⅡ的含量,可逐渐恢复ｏＦＳＨ对膜细胞Ｅ２合成的刺激作用。     

安徽恒河猴的微生物学和寄生虫学检测

对安徽省实验猕猴中心的安徽恒河猴进行了微生物（包括病毒和病原菌）和寄生虫检测。对恒河猴的病毒检测结果发现,猕猴疱疹病毒1型（BV）和猴痘病毒（SPV）抗体的阳性率分别为20．7％（6／29）和10．0％（2／20）,20只恒河猴中没有发现猴反转录D型病毒（SRV）、猴免疫缺陷病毒（SIV）和猴T细胞趋向性病毒Ⅰ型（STLV—1）的抗体。5只受检的人工繁育的安徽恒河猴没有感染沙门菌、皮肤病原真菌、志贺菌和结核分枝杆菌的这四种病原菌。肉眼检测恒河猴体表,未发现体外寄生虫。39份人工繁殖的恒河猴粪便样品的总寄生虫感染率为38．5％,检测到溶组织内阿米巴和5种蠕虫（粪类圆线虫、猴结节线虫、绦虫、钩虫、蛔虫）,感染率最高的是粪类圆线虫和猴结节线虫。本次调查表明,安徽恒河猴无特殊疾病,健康状况基本良好,可以建立普通级的实验恒河猴,实现安徽恒河猴的实验动物化。     

低碘绒猴动物模型的复制及甲状腺形态结构变化的体视学研究

本文以高级灵长类动物绒猴为研究对象,在国内首次成功地复制了低碘动物模型,对低碘喂养12个月的绒猴进行了血清激素测定,甲状腺重量及甲状腺形态学观察,并应用MIAS－300型图像分析系统测量甲状腺滤泡、滤泡腔的体视学指标。结果表明,低碘组绒猴血清FT3、FT4、TT3、TT4均低于对照组。甲状腺肿大,滤泡增生密集,滤泡腔变小,胶质减少,上皮细胞增生肥大呈高柱状。体视学指标测量结果表明,低碘组滤泡及滤泡腔的体密度（Vv）、表面积密度（Sv）、平均体积（VQ）、平均表面积（SQ）低于对照组,数密度（Nv）、比表面（S／V）高于对照组。而两组的形状因子（SF）无显著性差别。本研究表明绒猴是复制碘缺乏病动物模型的良好动物。     

虎纹蛙促性腺激素释放激素分泌调节的离体研究

利用离体静态孵育系统和放射免疫测定法,研究了性成熟的虎纹蛙雌蛙离体的视前－下丘脑－正中隆起（P－H－ME）片段促性腺激素释放激素（GnRH)的分泌调节。结果表明：γ－氨基丁酸（GABA）对成熟前期蛙离体P－H－ME片段的哺乳类GnRH（mGnRH)的释放有显著的刺激作用;随着GABA作用浓度的增加,刺激作用逐渐增强。100μmol/L的多巴胺（DA）及1μmol/L和10μmol/L的雌二醇(E2）则显著抑制鸡ⅡGnRH(cGnRH-Ⅱ)的释放。10μmol/L和100μmol/L的睾酮（T）以及10μmol/L的E2显著刺激冬眠期蛙P－H－ME片段mGnRH的释放。这些结果表明,GABA,DA及E2和T对虎蚊蛙GnRH的释放有直接的调节作用。     

左旋十米甲基炔诺酮对大鼠卵巢颗粒细胞和垂体细胞激素合成及分泌的 …

研究了左旋十八甲基炔诺酮对大鼠卵巢颗粒细胞和垂体细胞激素合成及分泌的直接作用。结果显示左旋十米甲基炔诺酮单独作用于无血清培养的颗粒细胞时,抑制雌二醇的合成,但刺激孕酮的分泌;在与促卵泡素合并处理时,颗粒细胞雌二醇、孕酮的分泌量随着左旋十米甲基炔诺酮浓度的增加而增加。利用促性腺激素生物测定方法证明大鼠整体用左旋十八甲基炔诺酮处理后,垂体中促卵泡素和促黄体生成素活性明显下降;同时外周血清中促卵泡素的活     

雌性恒河猴月经周期FSH、LH分泌水平的研究

本文采用改进的体外生物测定法分析恒河猴月经周期中促卵泡刺激素（ＦＳＨ）、促黄体生成素（ＬＨ）的变化情况。结果表明：雌猴的ＦＳＨ峰出现在月经周期的第１０２±１０天,峰值：５７２±４８ｎｇ／ｍｌ;ＬＨ峰出现在月经周期的第１２０±１６天,峰值：９６３±９７ｎｇ／ｍｌ,且为滤泡期、黄体期平均值的７～８倍。证实了在雌性恒河猴的月经周期中,其ＬＨ分泌高峰与ＦＳＨ分泌高峰不在同一时间出现的现象。     

超强激素

超强激素董为人李进李福山（第一军医大学细胞生物学实验室,广州５１０５１５）关键词超强激素糖蛋白激素糖蛋白激素为一组进化保守的激素,参与生殖和代谢调节,广泛存在于种属间,如鳗鱼和人类。该类激素的家族包括垂体腺分泌的促性腺激素,如促卵泡素（ＦＳＨ）、黄体...     

内分泌细胞中溶酶体对激素分泌调节的作用

本实验用外源性雄激素引起垂体促性腺激素细胞和睾丸间质细胞分泌抑制,对这两种细胞中的溶酶体及分泌吞噬和自体吞噬活动进行了超微结构形态观察和半定量分析。实验中应用了CMP酶细胞化学技术和免疫胶体金技术。研究结果显示,在分泌受抑制状态下,垂体促性腺激素细胞中溶酶体增多,分泌吞噬活动加强;与此同时,睾丸间质细胞也表现溶酶体增多、自体吞噬活动加强。这些结果不仅再次证明在分泌蛋白质激素细胞中溶酶体以分泌吞噬的方式参与了激素分泌调节,更重要的是初步证明在分泌类固醇激素细胞的分泌调节中,也有溶酶体的参与,其形式是自体吞噬作用。细胞通过自体吞噬作用得以在短时间内清除一部分合成激素的细胞器和其中的激素,这可能是分泌类固醇激素的细胞及时有效地调整激素分泌量的一项重要机制,与分泌蛋白质激素细胞的分泌吞噬有着相同的意义。     

扬子鳄卵巢性类固醇激素受体的免疫细胞化学研究

为探讨扬子鳄卵巢内不同性类固醇激素受体在卵泡发育中的调控作用,研究采用组织学和免疫细胞化学方法,运用激光共聚焦显微镜,对扬子鳄不同发育时期卵泡中的雌激素受体、雄激素受体和孕激素受体进行了检测。结果发现,3种类固醇激素受体在卵巢各期滤泡细胞中均有表达,在4月Ⅱ-Ⅳ期卵泡的滤泡细胞中阳性反应最强;9月卵巢的滤泡细胞中阳性反应最弱;ER和AR不仅在各期滤泡细胞中存在阳性位点,在6月卵泡的卵母细胞胞质中也有表达。结果说明,在扬子鳄卵母细胞生长发育和成熟过程中,3种激素受体通过与其对应的激素结合对滤泡细胞的发育、卵黄的合成与积累以及排卵起着重要的调控作用。       

左旋十八甲基炔诺酮对大鼠卵巢颗粒细胞和垂体细胞激素合成及分泌的影响

研究了左旋十八甲基炔诺酮对大鼠卵巢颗粒细胞和垂体细胞激素合成及分泌的直接作用。结果显示左旋十八甲基炔诺酮单独作用于无血清培养的颗粒细胞时,抑制雌二醇的合成,但刺激孕酮的分泌;在与促卵泡素合并处理时,颗粒细胞雌二醇、孕酮的分泌量随着左旋十八甲基炔诺酮浓度的增加而增加。利用促性腺激素生物测定方法证明大鼠整体用左旋十八甲基炔诺酮处理后,垂体中促卵泡素和促黄体生成素活性明显下降;同时外周血清中促卵泡素的活性亦下降。培养的垂体单纯用左旋十八甲基炔诺酮处理后,其培养液经生物测定呈现抑制颗粒细胞雌二醇和孕酮的分泌,促性腺激素释放激素可减弱左旋十八甲基炔诺酮的抑制作用。提示左旋十八甲基炔诺酮除通过垂体卵巢轴系起作用外,还能直接作用于卵巢。     

乌脑龟垂体显微及其腺垂体超微结构的研究

乌龟脑垂体由柄形神经垂体和椭圆形腺垂体两部分组成,神经垂体位于腺垂体后部上方呈背腹型排列。神经垂体中神经叶不发达,腺垂体分为远侧部和中间部,特殊空泡结构成为垂体门脉系统的特征。远侧部细胞分为嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞3种。通过透射电镜观察,腺垂体远侧部主要有5种分泌激素细胞：即生长激素（GH）分泌细胞、催乳激素（PRL）分泌细胞、促甲状腺激素（TSH）分泌细胞、促肾上腺皮质激素（ACTH）分泌细胞、促性腺激素（GTH）分泌细胞和非分泌类型滤泡．星形细胞（Fs）。生长激素分泌细胞核大、分泌颗粒少的特征成为乌龟与其他动物最大的区别,可能与乌龟具有生长慢、寿命长的生物学特性有关。     

恒河猴肺内CGRP及CGRP mRNA免疫组织化学和原位杂交的研究

本实验采用免疫组织化学ＡＢＣ－ＧＤＮ法和地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术,研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及其ｍＲＮＡ在恒河猴内的表达。结果显示ＣＧＲＰ分布于恒河猴肺内各级支气管粘膜上皮的神经内分泌细胞（ＮＥＣ）和神经上皮样小体（ＮＥＢ）中。ＣＧＲＰ杂交阳性细胞的分布与免疫组织化学的结果相同。ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ杂交信号均匀分布于整个细胞质,而ＣＧＲＰ免疫反应物仅在神经内分泌细胞的基部更明显,说     

SHIV-KB9感染中国恒河猴动物模型的建立

目的为了进一步确证SHIV-KB9感染中国恒河猴的病毒浓度范围,测试动物对病毒的适应性,明确该动物模型的可重复性。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查。选出4只无SIV、STLV、SRV/D和B病毒感染的恒河猴,分别用10倍系列稀释的病毒液静脉感染实验猴,使用流氏细胞术、血常规、病毒分离、DNA-PCR和RT-PCR等方法确定实验猴是否被感染,以及感染后恒河猴体内病毒复制和免疫细胞损伤情况。结果实验猴的血浆病毒载量、病毒分离结果、CD4＋/CD8＋比值和CD4＋T细胞数等证实,4.8×105 copies/mL以上浓度的SHIV-KB9病毒液能成功感染中国恒河猴。结论本研究进一步明确了SHIV-KB9感染中国恒河猴的有效病毒浓度范围,确定了SHIV-KB9病毒感染中国恒河猴的病毒学、免疫学的测定指标,成功的建立了SHIV-KB9/中国恒河猴动物模型。