费氏丙酸杆菌费氏亚种生长特性及对致病菌和益生菌作用探讨

目的对1株费氏丙酸杆菌费氏亚种生长特性及发酵代谢物的抑菌和促生长作用进行研究。方法将费氏丙酸杆菌费氏亚种无细胞发酵上清液分别与5株致病菌和3株益生菌添加至24孔板中进行培养,通过测定A_(600 nm)值的变化来研究发酵代谢物的抑菌和促生长作用。结果发酵代谢物中的抑菌成分含量随发酵时间的延长而增加,到第6天后增长趋于平缓。当发酵上清液添加量达到400μL时,溶血性链球菌被完全抑制,达到600μL时,金黄色葡萄球菌、沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和大肠埃希菌实验组A_(600 nm)值较对照组分别下降76.1%、68.5%、60.2%和43.9%,而长双歧杆菌和婴儿双歧杆菌实验组A_(600 nm)值较对照组分别上升17.1%和41.5%。结论费氏丙酸杆菌费氏亚种发酵代谢物对5株致病菌均表现出不同程度的抑菌效果,对2株双歧杆菌的生长有较明显的促进作用。     

儿童肠道双歧杆菌和乳杆菌种群结构分析

以21例2～5岁中国儿童的肠道菌群为研究对象,利用传统培养计数法和分子生物学技术,对此年龄段健康儿童的肠道菌群分布及其中关键益生菌的种群结构进行了定量研究。实验表明,儿童肠道厌氧菌的数量高达109CFUg(湿重),其肠道菌群的定植抗力(平均BE=2.38)较强;不同的个体之间所能检测到的关键益生菌的种类有所不同,一般能检测到其中的1～4种双歧杆菌和1～5种乳杆菌;长双歧杆菌和假小链双歧杆菌的平均数量多达107CFUg(湿重),检出率分别为90.48%和85.71%,为儿童肠道内双歧杆菌的优势菌种;L.mucosae和发酵乳杆菌的数量较多,平均为3.68log10CFUg(湿重)和3.97log10CFUg(湿重),检出率分别为71.43%和52.38%,为稳定定植于儿童肠道内的优势乳杆菌;不同种类的益生菌在不同样本之间的数量组成均存在有很大差异,双歧杆菌的样本差异为1.86～3.85,乳杆菌的为2.43～4.07。     

感染性心内膜炎与肠道菌群的相关性研究

目的探讨感染性心内膜炎与肠道乳杆菌、双歧杆菌和大肠埃希菌的临床相关性。方法选择2008年4月至2016年4月湖州市第一人民医院心内科病房收治的单纯感染性心内膜炎患者67例为观察组,选择同期来院体检结果正常者65例为对照组。分别收集观察组患者治疗前1天、治疗第3天和治疗1周后3个不同时间节点的粪便标本,同时收集对照组的粪便标本,通过FISH实验检测粪便中双歧杆菌和乳杆菌的含量差异,同时通过16SrRNA/DNA荧光定量PCR技术进一步明确观察组患者3个时期肠道双歧杆菌、大肠埃希菌和乳杆菌与对照组的数量差异。结果观察组患者治疗前1天双歧杆菌值为6.2%±0.56%,治疗第3天为4.3%±0.34%,治疗1周后为8.7%±0.56%,对照组双歧杆菌值为9.4%±0.98%。观察组患者治疗前1天乳杆菌值为5.4%±0.86%,治疗第3天为4.9%±0.24%,治疗1周后为6.1%±0.72%,对照组乳杆菌值为8.3%±0.51%。治疗前1天与治疗1周后,观察组患者双歧杆菌和乳杆菌值与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。16SrRNA/DNA荧光定量PCR检测表明,观察组患者在3个治疗时期中肠道乳杆菌、双歧杆菌和大肠埃希菌数量的对数值与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。其中观察组患者双歧杆菌和乳杆菌数量在治疗第3天较低,1周后有所回升;大肠埃希菌数量在治疗第3天亦较低,但1周后没有明显回升。结论感染性心内膜炎患者肠道菌群数量与健康人相比有所下降,肠道乳杆菌、大肠埃希菌和双歧杆菌失调可能影响其发病和转归。     

青年人肠道菌群分布及关键益生菌群落结构分析

以30例20～25岁中国青年人的肠道菌群为研究对象,采用纯培养方法和16S rDNA测序等分子生物学技术并结合代谢产物β_半乳糖苷酶和短链脂肪酸的测定,分析了此年龄段健康人群肠道菌群分布和益生菌群落结构。实验表明,高厌氧菌水平和高B/E值（175.66）反映出此年龄段人群良好的肠道环境;肠道关键益生菌群落结构分析表明,双歧杆菌由1～4种菌种组成,青春双歧杆菌(检出率93.3%,占总双歧杆菌数量百分比>85%)、长双歧杆菌(检出率86.7%,占总双歧杆菌数量百分比10%)为肠道优势双歧杆菌,其余菌种在不同人肠道中的差异数量只占不到5％,此年龄段青年人肠道具有呈现稳定的双歧杆菌群落结构,肠道双歧杆菌群落结构与膳食结构、生活环境等因素相关性不大,主要与人的生理年龄紧密相关;卷曲乳杆菌和唾液乳杆菌为青年人肠道优势乳杆菌(检出率分别为86.7%和93.3%,两者之和占总乳杆菌的数量百分比为60%～75%),但其余乳杆菌在不同人肠道中的之间的差异数量达到20%～30％,肠道乳杆菌群落结构与饮食结构、生活环境等因素紧密相关,不同个体具有各自独特的乳杆菌群落组成。     

双歧因子对双歧杆菌增殖的影响

应用含有不同浓度的双歧因子(微维乐)的培养基对双歧杆菌进行了定性、定量观察。其结果表明,微维乐对双歧杆菌有明显的促进作用;在双歧杆菌制剂的生产过程中,添加一定量的微维乐,不仅可以提高双歧杆菌收率,而且还可以缩短菌种发酵时间。最佳添加量为1.5%,最佳发酵时间为1.5 h。     

双歧杆菌总DNA对小鼠IL-2、NK活性影响的研究

目的　从双歧杆菌、大肠杆菌提取 DNA,用 DNA免疫小鼠 ,观察免疫功能的变化 ,探讨双歧杆菌 DNA对小鼠免疫功能的影响 ,并作对比研究。方法　肌肉注射提取的双歧杆菌 DNA、大肠杆菌 DNA,颈椎处死后 ,检测脾细胞的免疫功能 ,同时提取 IEL细胞与 DNA共孵育 ,检测它对 IEL细胞的激活情况及细胞因子产生情况 ,以自然杀伤细胞 (NK)活性 ,白细胞介素 2 (IL - 2 )产生能力为指标 ,测定小鼠上述各项指标变化。结果　双歧杆菌 DNA、大肠杆菌 DNA肌肉注射后 ,小鼠以上两项指标与相应对照组相比较均明显提高 (P<0 .0 5 )。双歧杆菌 DNA提高小鼠 NK活性与 IL - 2水平程度大于大肠杆菌 DNA的作用(P<0 .0 1)。结论　双歧杆菌 DNA可快速激活 NK活性 ,提高体内 IL - 2水平。其效能优于大肠杆菌DNA。     

玉米低聚糖对双歧杆菌增殖与发酵的影响

目的研究玉米低聚糖对双歧杆菌增殖和发酵的影响。方法试验I组以乳糖替代正常TPY培养基中葡萄糖作为碳源,试验II组以玉米低聚糖替代TPY培养基中的葡萄糖作为唯一碳源,分别在接种培养0、12、24、36、48和72h对两组双歧杆菌活菌数量、培养液中还原糖含量和培养液pH值进行测定。同时以不同剂量玉米低聚糖饲喂小鼠,分析对小鼠粪便中双歧杆菌数量的影响。结果培养72h后,试验II组双歧杆菌活菌数显著高于试验I组(t=5.832,P0.05)。试验II组培养液中葡萄糖含量在12、24、36、48和72h时均较试验I组显著偏高(P0.05)。试验II组培养液中pH在24h之后一直显著低于试验I组(P0.05)。试验I组、II组小鼠粪便中双歧杆菌数量显著高于饲喂前(t=20.109、22.982,P0.05);试验III组小鼠粪便中双歧杆菌数量较饲喂前显著降低(t=4.692,P0.05)。结论玉米低聚糖能够显著促进双歧杆菌体外增殖,增强发酵,并能提高小鼠肠道中双歧杆菌的数量。     

新生儿肠道双歧杆菌数量与其相关影响因素的探讨

目的　探讨影响新生儿肠道双歧杆菌数量的相关因素。方法　以重庆医科大学附属二院和重庆市妇幼保健院的12 0例新生儿为研究对象,每例生后5～7d,均采集新鲜大便做双歧杆菌定量培养,并做10个相关因素的准确登记。结果　母亲分娩方式、临产期及产后是否使用抗生素、母亲妊娠期饮食习惯以及新生儿黄疸期长短与新生儿肠道双歧杆菌数量有相关性( P均<0 .0 1)。结论　提倡阴道分娩、临产期及产后不用抗生素、妊娠期多食发酵制品和素食,并尽量设法缩短新生儿黄疸时间,均有益于新生儿肠道双歧杆菌数量相对充足     

一株携带质粒的人两歧双歧杆菌的分离与鉴定

目的:分离携带天然质粒的人双歧杆菌.方法:用自制的改良型Blb双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离双歧杆菌,对初步质粒检测阳性的单菌落通过糖发酵试验、(G C)mol%测定和16S rDNA序列分析,进行菌株鉴定.结果:筛选到一株携带天然质粒的人双歧杆菌,编号B200304,在1.0%琼脂糖凝胶上,测得质粒的相对分子质量约为22 kb.通过对该菌株的形态学观察和糖发酵试验等生理生化特征研究,证明该菌株为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum);HPLC法测得其(G C)mol%为55.6,16SrDNA序列分析进一步证实该菌株为两歧双歧杆菌.结论:分离得到一株携带天然质粒的人两歧双歧杆菌新菌株.     

双歧杆菌凝固型无糖酸奶生产工艺研究

对双歧杆菌凝固型无糖酸奶的生产工艺进行了研究。采用接种双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌3菌株进行发酵。确定最佳工艺条件为双歧杆菌发酵剂接种量5%、木糖醇6%于39℃条件下培养8h后,再接入接种比例为1:1、接种量为4%的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌混合发酵剂,于42℃条件下培养3 h。在此工艺条件下生产的酸奶风味纯正,凝乳状态良好,口感细腻,具有天然的奶香味。     

不同剂量恩诺沙星对连续培养系统中肠道菌群的影响

目的 研究不同残留剂量恩诺沙星对连续培养系统中肠道菌群数量的影响.方法 建立4套连续培养系统,接种正常人粪便于发酵罐中,连续培养肠道菌群23 d;第23天发酵罐中分别泵入含恩诺沙星剂量为0、1.25、12.5和125 mg/L的培养基,连续加药7 d,第31天停止加药.加药前10 d和加药过程中每隔2 d从4个发酵罐中取样并进行活菌计数.结果 活菌计数结果表明,空白组菌群数量稳定,说明4套连续培养系统运行稳定;低剂量组(1.25 mg/L)恩诺沙星使双歧杆菌下降3个数量级,对其他菌基本无影响;中剂量组(12.5 mg/L)中除拟杆菌外数量均有所下降,厌氧总菌、乳酸菌和肠杆菌停药前数量恢复到加药前水平,需氧总菌、双歧杆菌和肠球菌数量下降后不能恢复原初水平;高剂量组(125 mg/L)中所计数细菌数量均发生变化,需氧总菌、乳酸菌、双歧杆菌、肠球菌和拟杆菌数量下降且停药前不能恢复原初水平,厌氧总菌和肠杆菌数量先降后升,最终计数结果比加药前数量增加.结论 中国现行规定恩诺沙星的日允许摄入量(ADI)可能对人体肠道菌群造成影响.     

适用于分离人肠道中双歧杆菌的选择性培养基

【目的】比较并评价5种双歧杆菌选择性培养基对人源双歧杆菌的分离效果,试图筛选出一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。【方法】采集6份健康人粪便样品稀释涂布于5种选择性培养基上,厌氧培养后计数菌落并挑选单菌落进行鉴定。同时提取样品中细菌宏基因组DNA,应用变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing Gel Gradient Electrophoresis,DGGE)和荧光定量PCR技术(Quantitative Polymerase Chain Reaction,q-PCR)揭示样品中双歧杆菌种类和数量,并以此为依据,客观评价上述5种选择性培养基的分离效果。【结果】BSM培养基和BLM培养基上双歧杆菌的计数结果与q-PCR的定量结果最为接近,并显著高于其它3种培养基。BLM培养基上分离到双歧杆菌的种类与DGGE图谱多样性分析的结果最为接近。【结论】BLM培养基是一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。     

新生儿肠道双歧杆菌数量影响因素与其婴儿期腹泻关系

目的探讨新生儿肠道双歧杆菌数量的相关影响因素,并明确它们与婴儿期腹泻的关系。方法以120例新生儿为研究对象,生后5-7 d均做大便双歧杆菌定量培养,并做相关因素的准确登记,同时严密观察随访至1岁,准确记录其发生腹泻情况。结果母亲分娩方式、临产期及产后是否使用抗生素、母亲妊娠期饮食习惯以及新生儿黄疸期长短与新生儿肠道双歧杆菌数量有相关性。新生儿黄疸期长、母亲临产期及产后使用抗生素均是婴儿腹泻的危险因素;阴道分娩、母亲喜发酵制品及喜素食均是婴儿腹泻的保护因素。结论为避免导致新生儿肠道双歧杆菌数量不足的影响因素,提倡阴道分娩、临产期及产后不用抗生素、妊娠期多食发酵制品和素食,并尽量设法缩短新生儿黄疸时间,以减少婴儿腹泻的发生。     

用生料制备功能性双歧醋生产工艺的实验室研究

目的将双歧杆菌、醋酸菌、酵母菌和粉碎的制醋原料及麸曲共同发酵,通过生料制醋的方法来制备功能性双歧醋。方法将粉碎的玉米与麸曲、酵母液、麸皮和水搅拌均匀,使其经过液态糖化和酒精发酵后,接入醋酸菌和双歧杆菌(二者比例为1∶1),同时加入辅料,进行醋酸发酵,当检测到醋酸酸度为5.0%~7.5%时,加入食盐终止发酵,经过过滤,除菌澄清得到功能性双歧醋。结果双歧醋的最终醋酸度为3.2%,外观红棕色,光泽度好,清澈透明,无沉淀和悬浮物。总菌数:醋酸菌为3.3×1011/m l,双歧杆菌为1.9×107/m l;活菌数:醋酸菌为1.7×1011/m l,双歧杆菌为6.8×106/m l;大肠菌群数3个/100 m l;致病菌:不得检出。结论双歧杆菌及其代谢物可以在双歧醋中存活,生料固态发酵制备双歧醋的方法可行。     

阿奇霉素联合莫沙必利对 糖尿病胃轻瘫患者肠道菌群的影响

目的探讨阿奇霉素联合莫沙必利对糖尿病胃轻瘫(DGP)患者肠道菌群的影响。方法选取92例DGP患者,随机分为观察组和对照组各46例。两组患者均予饮食控制、体育运动和药物控制血糖至基本达标等基础治疗。对照组患者采用莫沙必利片治疗,5 mg/次,3次/d,餐前半小时口服,连用6周。观察组患者在对照组基础上加用阿奇霉素肠溶片0.25g/次,1次/d,口服,连用6周。观察两组患者治疗前后肠道菌群(乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌和肠杆菌)数量的变化,并比较评估其疗效及不良反应。结果治疗6周后,观察组患者乳杆菌和双歧杆菌数量较治疗前变化不显著,肠球菌和肠杆菌数量较治疗前显著减少(P0.05或P0.01)。对照组患者治疗前后乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌和肠杆菌数量均无明显变化(P0.05)。观察组患者临床总有效率高于对照组(95.65%vs 82.61%,χ2=5.11,P0.05)。观察组和对照组患者治疗期间分别出现不良反应3例(6.52%)和5例(10.87%),均为腹泻,症状相对较轻,两组比较差异无统计学意义(χ2=0.14,P0.05)。结论阿奇霉素联合莫沙必利治疗DGP患者疗效确切,不良反应轻,其作用机制与其能调节肠道菌群紊乱,抑制肠球菌和肠杆菌繁殖密切相关。     

双歧杆菌发酵果蔬汁的体外生物拮抗作用研究

目的研究双歧杆菌发酵果蔬汁的体外生物拮抗作用及影响因素。方法采用纸片扩散法(K-B法)、琼脂打孔法和试管稀释法(MIC)研究双歧杆菌发酵果蔬汁对常见病原菌的体外拮抗作用,并讨论pH、加热对拮抗作用的影响。结果发酵果蔬汁及其处理物(加热、不同pH)均具有一定的抑菌作用。结论双歧杆菌发酵果蔬汁对常见病原菌有一定的拮抗作用。     

酪酸梭菌--婴儿型双歧杆菌二联活菌制剂对人体肠道菌群的调节试验

目的　观察酪酸梭菌——婴儿型双歧杆菌二联活菌制剂对受试人群肠道菌群的影响。方法　检测受试者服用前后的肠道菌群并计数。结果　肠杆菌、肠球菌、拟杆菌的数量无明显变化 ,双歧杆菌、乳杆菌的数量明显增加 ,差异有非常显著性 (P<0 .0 1) ,结论　酪酸梭菌——婴儿型双歧杆菌二联活菌制剂具有一定的调节人体肠道菌群、增殖双歧杆菌和乳杆菌的作用。     

健康蒙古族人肠道中乳酸菌和双歧杆菌多样性

【背景】越来越多的研究发现人类的诸多疾病与肠道菌群失衡有关。乳酸菌和双歧杆菌属于肠道中的有益菌,在不同人群肠道中的多样性不尽相同。【目的】在种水平上分析健康蒙古族人群肠道菌群中乳酸菌和双歧杆菌的多样性。【方法】以27名健康蒙古族志愿者为研究对象,其中14名来自中国内蒙古,13名来自蒙古国。首次采用乳酸菌和双歧杆菌的特异性引物扩增与PacBioSMRT三代测序技术相结合,在种水平上探讨志愿者肠道中乳酸菌和双歧杆菌的丰度和生物多样性,并进一步分析性别、BMI(Bodymassindex)值和地域对上述两者可能的影响,以及优势菌种之间的相关性。【结果】在种的水平上,27名志愿者肠道样品中共鉴定到68个乳酸菌和11个双歧杆菌,其中平均相对含量在1%以上的乳酸菌有8个,包括唾液链球菌(Streptococcus salivarius,36.41%)、瘤胃乳酸杆菌(Lactobacillus ruminis,17.94%)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii,3.11%)、罗氏乳杆菌(Lactobacillus rogosae,2.23%)、轻型链球菌(Streptococcus mitis,2.18%)、阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginalis,2.02%)、魏斯氏乳杆菌(Weissella confusa,1.54%)和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,1.09%);双歧杆菌有5个,包括青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis,39.88%)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum,27.15%)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum,26.30%)、两歧双歧杆菌(B. bifidum,3.92%)和角双歧杆菌(Bifidobacterium angulatum,1.71%),聚类分析分为链状双歧杆菌和青春双歧杆菌2个主要的类群。分析结果显示:性别、BMI值和地域均未能显著影响志愿者肠道中乳酸菌和双歧杆菌的菌群结构(P0.05),但男性和女性之间、中国内蒙古地区和外蒙古国的志愿者之间的个别乳酸菌菌种相对含量存在显著差异(P0.05)。对样品中的优势乳酸菌和双歧杆菌进行Spearman相关性分析发现,乳酸菌和双歧杆菌彼此之间相关性较为密切,不同菌种间相关性不尽相同,与具体的菌种有关。【结论】首次采用PacBio SMRT测序技术在种的水平揭示了健康蒙古族人肠道中乳酸菌和双歧杆菌菌种多样性,为在种水平上解析肠道中乳酸菌和双歧杆菌多样性提供了新的研究思路和实施方案。     

双歧杆菌寡核苷酸探针的制备和应用

在人类肠道微生态中 ,双歧杆菌是仅次于类杆菌和优杆菌的第三大菌属。双歧杆菌可能占全部可培养肠道菌群总数的 2 5 % ,所以是肠道微生态的重要组成部分 [1 ]。由于双歧杆菌能提高肠道微生态的定植抗力 ,有效拮抗致病菌的侵入 ,并被认为是基本不致病的微生物 ,所以已成为应用十分广泛的益生菌 [2 ]。成人最常见的分离菌为青春双歧、长双歧、短双歧杆菌等 ,婴儿双歧常见于婴儿。传统的鉴定以形态学和表型 (如胞内和胞外碳水化合物酶的酵解试验 )作为基础 ,不仅耗费大量时间精力 ,而且由于双歧杆菌是专性厌氧菌 ,一般不通过酵解途径获得能量 ,…     

胆管结扎对大鼠肠道双歧杆菌组成的影响

目的分析胆管结扎对SD大鼠肠道双歧杆菌菌群结构组成的影响。方法采集手术前3 d和手术后2周5只模型组和5只对照组大鼠的粪便样品,提取粪便样品中微生物的混合DNA进行双歧杆菌类群特异性PCR-DGGE,结合主成分分析技术比较2组大鼠在手术前后肠道内双歧杆菌结构组成的变化。结果DGGE图谱及其主成分分析表明手术后对照组和模型组大鼠肠道双歧杆菌菌群的结构组成明显不同,主要表现在假长双歧杆菌的数量在模型组显著增加,而动物双歧杆菌却明显减少。结论胆管结扎导致SD大鼠肠道双歧杆菌结构发生异常变化。