重组蛋白的委托生产

髭田酱油公司从4月以Bacillus brevis为宿主利用分泌生产技术,开始重组蛋白的委托生产。B.brevis47株是与名古屋大学共同开发的高性能宿主。该公司用B.brevis大量生产人上皮细胞生长因子并降低成本获得成功,这种药品也可给山羊使用,利用生物学剪毛。由于是分泌生产不仅能生产具有准确的主体构造的活性型重组蛋白,也能大幅度降低精制成本。尽管克隆了基因,但用大肠杆菌和酵母、中国仓鼠和小鼠卵巢细胞等标准宿主难以充分表达和降低重组蛋白成本。B.brevie是很好的宿主。该公司正在     

重组石竹的商品化

三得利公司向重组石竹的商品化迈出了一大步。在11月17日召开的科学技术会议生命科学部会重组DNA技术分会批准了三得利公司申请的货架期长的重组石竹的非封闭式温室实验。 这种重组石竹是在海外具有野外试验成绩的所谓的引进重组植物。是澳大利亚Florigene公司(旧公司名称:Calgene Pacific公司)开发的。用trans witch技术(Co-suppression技术)导入有义基因抑制乙烯合成关键酶1-已环丙烷-1-香芹酮酸合成酶(ACC合成酶)的表达。因此,比普通的石竹货架期长,不易折断。估计在澳大利亚大致完成了野外试验,最近商品化。     

澳大利亚大规模招聘生物技术人员

InternationalPestControl 2 0 0 2年 1/ 2月 4 4卷 1期第 4页报道 :鉴于近年来澳大利亚生物技术人才的大量外流 ,澳大利亚联邦科学和工业研究组织畜牧工业署 (CSIROLivestockIndustries)目前正在向世界各国大量招聘现代生物技术包括生物信息学、细胞生物学、分子遗传学、蛋白质生物化学和免疫学等诸学科领域的优秀科学家赴澳参与其科学研究。澳大利亚CSIRO畜牧工业署主任ShaunCoffey说 :“为了适应澳大利亚畜牧工业的日新月异的需求 ,CSIRO畜牧工业署将大力加强其在生物技术范畴的实力。我们已经确定了畜牧工业和相关工业中的重点…     

瑶山髭蟾的核型

髭蟾是我国特有的无尾两栖类,主要分布在川、黔、滇、桂、浙、闽等省的山区。自刘承钊于1945年建立髭蟾属(Vibrissaphora Liu)以来,已先后发表有五种,即峨嵋髭蟾(Vibrissaphora boringii Liu),崇安髭蟾(V.liui Pope),雷山髭蟾(V.leishanensis Liu et Hu),瑶山髭蟾(V.yaoshanensis Liu et Hu)和哀牢髭蟾(V.ailaomica Yang,Chen et Ma)。赵尔宓、吴贯夫(1983,1987)报道了全部髭蟾种的核型,并提出了瑶山髭     

澳大利亚投资研究家禽疫苗

去年晚些时候,澳大利亚的CSIRO与一家兽医药公司Arthur Webster Pty.Ltd.(澳大利亚,悉尼)合作,共同研制一些预防家禽病的疫苗.第一种疫苗预计在2年内投放市场,该疫苗可预防引起幼鸡免疫缺陷综合症的传染性粘液囊病(IBD)病毒.IBD使全球范围的家禽工业每年损失约3890万美元.     

澳大利亚开发新的植物遗传工程技术

澳大利亚联邦科学和工业研究组织(CSIRO)开发了一种新的植物遗传工程技术,这将使澳大利亚的羊毛生产在10年内提高20～30％。 CSIRO的研究内容是将豌豆的基因转入烟草。研究小组给自己制定的任务是培育一种牧草,例如苜蓿或地三叶草,其叶象豌豆叶一样含有富含硫的蛋白质。从研究中发现羊吃了含硫量高的氨基酸后能生产更多的羊毛,但羊吃下的许多含硫产物都因瘤胃中的细菌作用而损失了。氨基酸通过瘤胃并在真胃中消化掉。研究工作的首要一步是应用转移基因的方法将豌豆蛋白质基因转入烟草,在烟草的籽粒中得到表达。这就使科学家确信分离到了基因,并对重要的DNA调控因子进行了操作,这     

重组牛壁虱疫苗的销售

澳大利亚Biotech Australia公司宣布从8月起开始销售牛壁虱用的基因重组疫苗制剂“Tick GARD”。这是世界首批重组寄生虫疫苗,由亲公司—Hoechst Australia公司销售。“Tick GARD”是抗澳大利亚较严重的牛壁虱(Boophilus microplus)的疫苗。在澳大利亚由壁虱造成的损失每年有1亿澳元(约70亿日元)。 “Tick GARD”是Biotech Australia公司和澳大利亚的国立研究机构CSIRD花10年时间开发的。它是用微生物基因重组技术生产纯化壁虱消化道中的蛋白Bm86,包在油性佐剂内的制剂。在牛耳后接种含     

猪表皮生长因子在植物乳杆菌中的表达及其活性检测

为获得一株高效表达猪表皮生长因子(p EGF)的重组植物乳杆菌,并检测其生物活性,从仔猪肠道内容物中分离植物乳杆菌,选择其中生物活性最强的一株(Lp-1)为宿主。以商品化乳杆菌表达载体p IAβ8为骨架,干酪乳杆菌超强组成型启动子SCP、M6前体蛋白信号肽SP、猪表皮生长因子p EGF等为元件,构建表达p EGF的植物乳杆菌重组表达载体p SCPSE。用电转化方法 (2.0 k V,2 000?,25μF,4.0 ms)将重组载体p SCPSE转化入宿主菌Lp-1中获得重组植物乳杆菌Lp-p SCPSE。以Tricine-SDS-PAGE法和p EGF ELISA特异性检测试剂盒检测目的蛋白的表达;用培养12 h的阳性转化子菌体给刚断奶的BALB/c小鼠灌胃,2次/d,连续10 d,以断奶小鼠的体重、肠绒毛长度和隐窝深度的变化为指标,检测目的蛋白的生物活性。Tricine-SDS-PAGE检测和小鼠实验结果显示,重组植物乳杆菌的培养上清中出现6 k Da左右p EGF的特异性条带,且表达p EGF的重组植物乳杆菌能显著增加(P0.05)断奶小鼠的体重、肠绒毛高度和肠隐窝深度。结果表明,p EGF在植物乳杆菌中成功表达,且具有良好的生物学活性。     

神经节苷脂类抑制BT325细胞系生长机理的初步探讨

用 ¹²⁵I-EGF与人多形成胶质细胞瘤BT325细胞系膜上EGF受体的饱和结合实验, 竞争抑制实验研究GM3,BBG(bovine brain gangliosides)对EGF受体最大结合量, 亲和常数及受体数目的影响; 放射受体法观察EGF-EGFR复合物内吞过程, 测定胞质和培养基中EGF含量.结果表明: BT325细胞质膜上存在高亲和力EGF结合位点,GM3对EGF与其受体的亲和力无明显抑制作用(P＞0.05),但能明显减少其受体的数目(P＜0.05); GM3能明显延长EGF-EGFR复合物内吞过程; GM3处理的胞质中EGF浓度比对照组显著升高(P＜0.05), 培养液中无明显差异,这可能是由于GM3抑制EGF分泌所致.     

人表皮生长因子的原核优势表达与复性

目的:在原核系统中获得具有活性和高表达量的重组人表皮生长因子(rh EGF)。方法:对h EGF编码全序列进行优化,构建原核表达载体p ET-24b-h EGF,在大肠杆菌中表达rh EGF;对rh EGF包涵体进行复性,获得具有较高生物活性的重组蛋白。结果:构建了携带159 bp h EGF基因的表达载体p ET-24b-h EGF,rh EGF在原核系统内得到高表达,重组蛋白相对分子质量为6×103,表达量可占细菌总蛋白的15%,包涵体复性率达90%。结论:对h EGF的编码序列进行了优化,实现了其在原核系统内的高表达,通过复性获得了具有良好生物活性的rh EGF。     

人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用

卵泡刺激素（FSH）对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生命作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同,关于表皮生长因子（EGF）对腔前卵泡的作用尚不确切,本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素（rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用,利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞－颗粒细胞复合体（OGCs)(Fig.1)。体外每孔30－40个培养物并分别添加胎牛血清（FBS）,rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相,结果显示,rechFSH显著促进小鼠OGCs 及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强（P＜0．05）（Fig.2),但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内期生长对照组（P＜0．05）（Fig.3),说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。     

日本进行SOD的第二阶段临床试验

武田药品公司从美国Chiron公司引进人的重组过氧化物岐化酶(SOD),从去年10月开始在日本以关节炎患者为对象进行临床试验.该公司1990年2月与Chiron公司签订正式合同,从5月开始第二阶段临床试验. 人的重组过氧化物岐化酶是去除由巨噬细胞(因体内炎症反应而活化的)和淋巴细胞产生的活性氧的酶.活性氧也有杀菌作用.但是,其过量生产会给细胞膜和结合组织等各种各样的活体组织带来障碍.由于日光的照射和体内化学反应等产生的活性氧,被认为是炎     

人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用(英文)

卵泡刺激素(FSH)对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生长作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同。关于表皮生长因子(EGF)对腔前卵泡的作用尚不确切。本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素(rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用。利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞-颗粒细胞复合体(OGCs)(Fig.1)。体外每孔30~40个培养物并分别添加胎牛血清(FBS)、rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相。结果显示rechFSH显著促进小鼠OGCs及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强(p<0.05)(Fig.2)。但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内同期生长对照组(p<0.05)(Fig.3)。说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。     

在非封闭式温室栽培重组植物

三得利、三井东压化学两公司将向科学技术厅申请在非封闭式温室内试栽基因重组植物.在非封闭温室的栽培是环境释放前的预备试验.先试栽农林水产省的重组番茄,但1991年民间产业进入这一阶段.另外农林水产省还计划申请重组水稻的试种,它是继番茄之后第2科作物. 三得利的牵牛花,三井东压和农林水产省的水稻三得利公司计划能将黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白基因导入牵牛花.通过外壳蛋白的表达,对病毒病产生干涉效果,使植株抗CMV感染性.该公司与澳大利亚Calgene Pac-     

灰树花多糖对体外胃粘膜创伤的修复作用

本文采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测灰树花多糖(GFP)对人胃正常粘膜上皮细胞(human gastric epithelial cell,GES-1)细胞增殖影响;使用毛细管对单层融合的GES-1细胞进行划痕,模拟胃粘膜创伤,观察并计算GFP作用后GES-1细胞创伤区域迁移及修复损伤的面积;ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)方法测定培养基上清液中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF),转移生长因子(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)和三叶因子2(trefoil factors 2,TFF2)的含量变化;荧光定量PCR(RT-PCR)检测其mRNA的变化.实验结果表明:GFP通过上调EGF,TFF2,下调TGF-β₁ 表达而促进GES-1细胞增殖,促进其向创伤区域迁移,可以完全覆盖创伤区域达到修复胃粘膜作用.     

表皮生长因子对人二倍体成纤维细胞p21~(WAF-1)基因表达的双向性影响

p2 1 WAF-1又称 sdi- 1 ,是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 ( CDK)的抑制物基因 ,与细胞增殖调控及细胞衰老密切相关 .本研究为了解正常细胞中 p2 1 WAF-1对生长因子的反应性 ,以及其在细胞衰老时的表现 .我们以不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞 ( 2 BS细胞株 )为实验对象 ,通过 Northern杂交术 ,观察表皮生长因子 ( EGF)对年轻 (低代龄 )细胞与衰老 (高代龄 )细胞 p2 1 WAF-1基因表达的影响 .结果显示 :p2 1 WAF-1在衰老 2 BS细胞中高表达 .EGF对年轻细胞 p2 1 WAF-1的表达有诱导作用 ,对衰老细胞有轻微诱导作用 ,在刺激后 3h左右达高峰 ,3～ 6h逐渐回落 ,并持续下降 .作用后 1 2h,其表达水平反而远低于作用前 .此作用在年轻细胞较为明显 .由此可见 :( 1 ) EGF对人二倍体成纤维细胞 p2 1 WAF-1的表达有双向性影响 ,先是一过性诱导 ,随后转为阻抑 ;( 2 )衰老细胞 p2 1 WAF-1对EGF的反应性有所降低     

肝刺激因子对人肝癌细胞BEL -7402p21~(ras)表达的影响

从雄性初断乳SD大鼠肝匀浆中提取肝刺激因子 (HSS)并加以部分纯化 ,观察其促人肝癌细胞增殖活性及对p2 1ras蛋白表达的影响。结果表明 :(1)HSS具有明显的促人肝癌细胞增殖活性 ,其分子量为 14～ 2 0kD ;(2 )HSS可提高p2 1ras蛋白表达 ,具有时间 效应关系 ,并与EGF呈协同作用 ;(3)HSS调节p2 1ras蛋白表达具有剂量 效应关系 ,且呈现出饱和性。鉴于我们已报道HSS上调EGF受体蛋白和基因表达这一事实 ,本实验结果进一步说明 ,HSS促人肝癌肝细胞增殖与其调节EGF受体介导的信号分子传导过程相关。     

澳大利亚植物生理考察报告

我们三人组成中国科学院植物生理考察组,从1980年9月30日到10月25日,对澳大利亚CSIRO(Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization)所属的植物所(Plant Industry)、园艺所、食品所以及热带作物和牧草所等和澳大利亚国立大学和悉尼大学等十所大学的植物系和生物化学系进行访问考察。考察重点是植物的抗性、光合作用和代谢研究。在此期间也参观了几个植物园、自然保护区和私人农     

世界首次重组人工血液的临床试验

美国食品和药物管理局(FDA)批准美国Somatogen公司作为人工血液开发的基因重组血红蛋白作为治疗药,于92年1月进入临床试验。重组血红蛋白进入临床试验在世界上还是首例。该公司经理兼经营最高负责人Charles H.Scoggin还向本刊表示,预计今后增加重组血红蛋白量,用健康人进行实验,1992年夏初公布结果。     

重组人纤溶酶原Kringle1-5的制备及其

为了研究重组人纤溶酶原 Kringle1-5(K1-5)的抗血管生成活性及其对内皮细胞增殖的影响, 通过PCR扩增人纤溶酶原K1-5 cDNA,定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET-K1-5, 转化E.coli BL21(DE3), IPTG诱导表达,SDS-PAGE 和Western 杂交检测K1-5的表达。鸡胚尿囊膜 (CAM) 实验和MTT实验分别检测重组人纤溶酶原Kringle1-5对鸡胚新生血管生成和内皮细胞的抑制作用。结果表明,IPTG诱导原核表达载体pET-K1-5在E.coli BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白量的32%, K1-5主要以包涵体形式存在,包涵体经过洗涤、溶解、Ni-spin 亲合柱层析纯化以及蛋白质复性等步骤后,获得了纯度约为96%的重组K1-5蛋白。CAM实验表明,原核表达的重组人K1-5能有效地按剂量依赖的方式抑制鸡胚新生血管的形成。MTT实验结果显示,重组人K1-5特异地抑制内皮细胞的增殖, 而对非内皮细胞无抑制作用。