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《生物技术通报》1992,(2)
920401简化盆组蛋白纯化的遗传方法〔会,英〕/Moks,T.…j Abstr.Pap.Am。Chem.Soe一1991,ZoiMeet.Pt.z一BIOTS〔译自DBA,1991,10(13),91一07234〕 开发了以细菌血清蛋白受体如葡萄球菌蛋白一久和链球菌蛋自一G为基础的基因融合系统,以简化大规模和小规模的重组蛋白纯化。由于IgG和血清白蛋白间的强相互作用,可以一步回收基因融合产物,得到高产量和纯度。在融合蛋白的蛋白一A/G衍生物和目的蛋白之间导人不同专性酶促和化学裂解位点。这样可从纯化的融合蛋白上除去亲和性拖尾,放出生物活性分子。通过设计一种编码2个合成的1 gG一结… 相似文献
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针对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)层析柱的应用问题,将SPA的Z结构域基因与纤维素结合结构域(CBD)重组,并在Z结构域C端引入1个半胱氨酸(Cys),构建并表达出一种新型免疫亲和材料。利用基因工程技术将质粒pEZZ18中的Z基因插入到含有CBD的质粒pET35b(+)质粒中,构建出原核表达载体pET35b(+)-ZCys,经IPTG诱导表达,获得CBD-Protein Z融合表达蛋白。pET35b(+)-Z-Cys在E.coli BL21中正确表达,所表达的融合蛋白具有与哺乳动物IgG抗体结合的生物学活性和与纤维素结合的活性。结果证明CBD-Protein Z蛋白具有Z结构域与CBD结构域的活性,预计能在免疫亲和层析中用于IgG抗体的纯化。 相似文献
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《生物技术通报》1992,(10)
923527短小芽抱杆菌HPO31的一种胞外蛋白水解酶抑制荆的鉴定及其相应基因的核普酸序列〔英〕/S五iga,Y。…了Appl.Environ.Mierobiol。一1902,55(2)。一525~551〔译自DBA,1992,11(7),92一03609〕 从短小芽抱杆菌HPD31培养上清液中分离到一种新的热稳定蛋白水解酶抑制蛋白(Bb:Pl)‘它产生于胞外,有a、b、c三种形式。经硫酸钱沉淀、凝胶过滤、阴离子交换层析、亲和层析及SDS一PAGE提纯。它能抑制丝氨酸蛋白水解酶类,如胰蛋白酶、糜蛋白酶及枯草杆菌素等。将Bbr Pl基因克隆于大肠杆菌XLI一Blue,并测定了序列。它编码一个24氨基酸的… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920861克隆的外源基因在大肠杆菌中增加表达的可能性〔英〕/Venetianer,p.了Aeta Bioteehnol一1991,11(2)一129~133〔译自DBA,1991,10 (15),91一08439习 在异源宿主(如大肠杆菌)中合成并累积想要的(外源)蛋白产物是一个复杂的多步骤过程,并受到以下步骤的影响:i。提高基因拷贝数的方法,如采用高拷贝数载体;11.提高和控制转录率的方法,如使用强启动子;111。提高翻译率的方法,如选用适宜的Shine一Dalgaroo序列;iv.增加合成蛋白或肤稳定性的方法,如表达融合蛋白;v.提高重组质粒稳定性的方法;如使用无需抗生素而能选择连续出现的质粒的方法;… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(10)
923695分离自苏云金芽抱杆菌肯尼亚亚种的晶体蛋白甚因产物的杀虫特性〔英〕/Masson,L.…了Appl.Environ,Mierobiol一1992,58(2)一642~646〔译自DBA,1992,11(7),。2一03850〕 从苏云金芽抱杆菌肯尼亚亚种(Bac订如8‘h-。,￡。夕￡。。s‘,subsp.无e叮ae)一个大质粒分离到的前毒素基因被克隆到大肠杆菌JM83(质粒pKEN4)的BamHI DNA片段中。该基因(编码Cr刃E毒素)是作为4.skb片段克隆于质粒pMP-CV,在大肠杆菌HB101中作为相发光包涵体表达134kDa蛋白。用胰酶或家蚕胃计消化已溶解的包涵体,得到抗蛋白水解酶的65kDa蛋白。在强迫进食… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(10)
923619乙型肝炎表面抗原在乳酸克会维醉母中的克隆和表达〔英〕/Martinez,E.…2 Bioteehnol.Lett一1092,14(2)。一53~56〔译自DBA,1992,11 (7),92一03754〕 为了用乳酸克鲁维酵母生产乙肝病毒表面抗原,构建了含lac4基因启动子(来自质粒BSLAC4)、表面抗原基因(来自质粒pHBI)、LAC4终止区及其后的URA3基因(来自酿酒酵母)和LAC4基因的3‘非编码区(来自质粒pJAAS12)的质粒pDLHZ。用含表达盒区的pDLHZ转化乳酸克鲁维酵母VDI,转化子于1%酵母粉、2%蛋白膝和2%葡萄糖的培界基中进行摇瓶培养(21摇瓶装40001培养基,于50℃、25orPm培养… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922767用于抗体筛选的农面表达载体〔英〕/Breitling,F.…/Gene。一1901,104(2),一i‘7~153仁译自DBA,1092,11(3),92一012凌03 构建了一种新载体(质粒噬菌体pSEX),它表达与大肠杆菌噬菌体基因一皿蛋白融合的单链抗体(Ab)。通过此载体可用少量抗原从大基因库中筛选出专性Abs。在无1 PTG存在下通过野生型一21一噬菌体在大肠杆菌JM101里诱导产生了抗溶菌酶Ab一plll融合蛋白。利用针对重链和轻链间衔接序列的表位的单克隆Ab,以及N一末端序列的抗血清 鉴定了这种融合蛋白。此融合蛋白能与上述抗原结 合,组合到侵染性质粒噬菌体粒子里(能… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
920561链球菌抗肿瘤蛋白:在大肠杆菌细胞中的表达及其皿组蛋白的特性〔英〕/Kanaoka,M.”·,Agr-ie。Biol.Cbem一1991,55(3)。一743~750〔译自DBA,1991,10(12),。i一067。幻 用质粒pUC19作载体,将链球菌抗肿瘤蛋白SAGP(源千酿脓链球菌(召‘:e夕名oeoee。召尹犷。-g。介。。)Su染色体的Hindl片段)克隆到大肠杆菌 JMio3中。获取重组质粒pSP3i、ptae SPZ和ptac SP3,以便在大肠杆菌中表达SAGP。通过 (NH‘):50‘沉淀、Zx离子交换HPLC和凝胶过滤HPLC,从5.51大肠杆菌JMio3/质粒ptae SP培养液中纯化重组SAGPt纯度大于90%)。重… 相似文献
9.
《生物技术通报》1992,(1)
920 141表达P45O一加单级酶的盆组醉母细胞的径化反应〔会,英〕/Ohkawa,H.…尹Ann.N.Y。Aead.Sei一1090,615一37~45[译自DBA,1991,10(9),91一04951〕 对微粒体细胞色素一P 45。一加单氧酶(P 450)进行酶工程处理,目的在于提高可能用于工业化学制剂中的酶的反应性和稳定性。建立了一个含有由质粒pAAHS转化的酵酒酿母AH 22的酵母转化系统,该质粒的ADH启动子和终止区之间含有P 450cDNA。能用于幽类化合物转化的牛P45。·17一a和P 45卜C 21 oDNA在酿酒酵母中表达为具酵母NADPH一依赖型细胞色素一P 45。‘还原酶的融合蛋白,该蛋白… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
920410可在蓝燕株系PCC7120中分析启动子的载体〔英〕/Tang,J.D.…了J.Baeteriol一1901,i了3 (s)一2729~2731〔译自DBA,1991,10(12),91一06654〕 构建了启动子探测载体pJL3,它含有一个多克隆位点、cat基因(不带启动子)以及转录终止子。经接合将其从大肠杆菌转移至Aoaba‘。a“P.PCC7iZo中。新质粒的成分来源于:质粒pRL25C (含大肠杆菌和兰藻复制子)、新霉素杭性标记、bom接合转移区、质粒pDUI(从丝态兰细菌分离到)以及pBR322的序列。描述了该载体质粒的详细构建过程。Aoaba。:a psbB基因编码光合系统n中的一种分子量47000的叶绿… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
921368由变铅资链娜菌分泌抗生蛋白链菌素〔俄〕/Bol。-tin,A.P.…1 Antibiot.Khimioter一1091,36(6)一s~12[译自DBA,i。。1,10(25),91一10410〕 构建T一种bireplieon载体质粒pVGi4o,其中含有编码dagA基因信号肤的表达单位。将质粒pAPS中的阿维T链霉菌(“,e尹￡o仍犷eesa”￡d‘-耐落、抗生蛋白链菌素基因克隆到质粒pVG140上,获得重组质粒p VG141和pVG142。用它们转化变铅青链霉菌(5.1畜公落da.‘)Tk64,以硫链丝菌肤抗性为基础,选择含有质粒的克隆。重组菌株能够分泌抗生蛋白链菌素。检测了培养基成分和碳源对该抗生素的影响。5.1… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920889在发醉杂件下乳抽对tac启动子的诱导〔英刀Neu-bauer,P.…j Aeta Bioteehnol一1091,11(一)一23~2。〔译自DBA,i,。i,10(15),91-08级38〕 发展了一种用乳糖代替昂贵的TPTG诱导tac启动子的表达系统。采用大肠杆菌JC53的R100质粒协助质粒诱动,用平板结合法将大肠杆菌JM109的F,质粒(Lelq、pro AB)转入受体菌NK5525(lae‘、pro)。得到的原养型CW3oll超量表达lae阻遏物基因,并以乳糖为能源和碳源生长。质粒pOFI.o转化的菌株CW3oll含控制lae操纵子(I-acZ和lacy)片段的 tac启动子和氨节青霉素抗性基因。摇瓶和发酵罐实验结果表明… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(5)
921682木枪发醉菌树千毕赤醉母的遗传转化〔会,英〕/H。,N .W.Y.…了APpl。Bioehem.Bioteeh-nol一1991,25~29一369一s7e〔译自DBA,1901,10(21),91一12053」 发展了适用于树干毕赤酵母(尸￡。矶。。“娜t-￡。)CBS7126的质粒转化系统。将含有酿酒酵母2一声m复制源和卡那霉素抗性标记的质粒载体(如pUCKms,7.57kb)引导到酵母细胞中,并以染色体外因子的方式稳定遗传。含此载体的转化子能抗G418。从转化子中回收到相同的质粒,拷贝数很高。另外,在相同条件下,大肠杆菌一产阮假丝酵母(Ca:d玄da”‘感l玄s)穿梭载体pLCii(含有该假丝酵母的… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
923833 新的启动子区ONA序列〔专,日〕/Kaji,A./J0 3250一855:30.03.90一JP一081030(li.rZ。91)30.03.90 as 081030.92、一035929/05(4页)〔译自 DBA,1992,11(8),92一04290〕 新序列含启动子区,在一35区有TTACCC碱基序列,在一35区与一10区之间有15一20碱基的间隔 区。一10区为TATACT,间隔区以 GTAATATGTTTAATCAGGGC为主。将此启动子序列整合到表达栽体(如pKK系列)中,产生强启动效应。例如,将含有质粒pLC6一32的大肠杆菌培养于含大肠杆菌素的L培养基中,直至静止期。抽提质粒,用Eo0RI及Smal处理,在NaOAc存在下乙醇沉淀… 相似文献
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《生物技术通报》1994,(2)
940623用链霉菌分泌表达系统生产抗细菌肚“aPidaeci-n”〔英〕/Maeno,M.…/Biosei.Bioteehnol。Bio。hem一1993,57(7)一1206~1207〔译自DBA,1993,12(19),93一10550〕 为了获得链霉菌枯草溶菌素抑制素(SSl)’-ap记aecin融合蛋白,构建了一种表达载体质粒pjsZos一d一EAPIM,并在变铅青链霉菌菌株66中表达。融合蛋白的产量为72m幻1培养基。这种融合蛋白含有551和加在apidaeein基因前头的具Met密码子的apida“cin,起CNBr切割位点的功能。用硫酸钱沉淀、离子交换层析和反相HPLC法纯化产物,并用CNBr切割分离apidaecin(一种抗菌肤,具有1… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(12)
.,J一,J沪.J”‘舌尹.刁7.’试J、~宁.护理J.合忠‘J产奋「下,924392用杆状病毒表达载体生产分离的异型户半乳箱普酶多肚仁英〕/Lieari,P.…/Biotechnol.B ioeng一1092,39(9)一932~944〔译自DBA,1992,11(11),92一06397〕 在草地夜蛾连续细胞系IPL一Sfg中表达首藉银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV),生产分离的异型户半乳糖普酶蛋白。在pol了hedrin启动子调控下,重组AeMNPV编码 polyhedrin一BG的融合蛋白。该启动子由转移载体质粒pAo36。和设计的360-lac构建。病毒侵染细胞后培养96小时,培养物经BG免疫沉淀放射自显影显示,有几条比B… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(6)
922055芸苔埋核盘菌的转化及利用基因库进行突变体互朴仁英」/Ball,A.M.…了E叉p。M了eol一i,,i,15(3)一243~254〔译自DBA,1991,10(23),91一13320〕 对植物病原菌芸苔埋核盘菌(p夕r。”。夕‘“za西,。。s‘。a。)JH26和NHlo进行原生质体转化,构建了突变体并用基因库来互补。在有抓化钙和PEG的条件下用3种质粒(编码潮霉素抗性的质粒pAN7一1和装配型质粒pAN7一2或编码腐章霉素抗性的质粒pANS一1)转化该菌分生抱子原生质体。在随机位点整入DNA,并时常发生多重整合。转化频率可变,但与转化其它植物致病真菌的相同 (高达2。/协9 DNA… 相似文献
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《生物技术通报》1993,(3)
930930 .组织型血纤维蛋白溶酶原激活因子■组Kringlel区的表达、纯化及鉴定[英]/Deserrano,V.S.…,Arch.Bioehem.Biophys.·1992,294(1)..282"~290[译自DBA,1992,11(17),92.09686] 用新的融合蛋白表达质粒pST II(KZHPg)pfXa(KltPA)在大肠杆菌中表达纯的人组织血纤维蛋白溶酶原激活因子(tPA)kringle 1区(Ki tPA)残基C92~C173。该质粒顺序编码了人血纤维蛋白溶酶原的紧密赖氨酸结合kringle(K)1区(KIHPg),及含因子-Xa敏感键的肽(pfXa),在其下游插入K1tPA。经Sepharose-赖氨酸亲和层析从大肠杆菌DHs-a细胞的各种级分中纯化出… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922949在特定杆状病毒表达系统中生产具生物学活性的跳胺化eeeropin〔英〕/Andersons,H.…2 Bioe-liem.J一1091,250,Pt.1一219~224〔译自DB-A,1992,11(3),92一01388〕 构建了表达质粒pVL941一22一ceoA,其中含有:组织血纤维蛋白溶酶原激活子(t一PA)的信号肤、从金黄色葡萄球菌蛋白一A(22)衍生的合成性抗体结合部分、编码cecropin一A天然部分的合成片段(附加C末端甘氨酸密码子)。将此融合基因转入首着银纹夜蛾核多角体病毒载体基因组,再用重组病毒感染草地贪夜蛾Sfg细胞。对从细胞培养基获取的蛋白进行SDS一PAGE和blotting检测。采… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(… 相似文献