淋巴细胞化学发光

本文概要介绍淋巴细胞化学发光(LY-CL)的细胞学基础,LY-CL的生物化学基础,激活LY-CL的物质,LY-CL与淋巴细胞活化关系以及LY-CL测定技术在生物学、医学中的应用。     

人中性粒细胞与淋巴细胞化学发光反应的比较

研究人中性粒细胞化学发光(PMNCL)反应与淋巴细胞化学发光(LY—CL)反应的差别。结果表明,刀豆蛋白A、植物血凝素,葡萄球菌蛋白A和(?)理酵母多糖刺激后,PMN—CL纯峰值高于LY—CL 3—10倍,而(?)抗(?)IgG刺激后,LY—CL的峰值则稍高于OMN—CL。氧自由基清除剂作用于PMN—CL和LY—CL反应的结果表明,L—组氨酸均明显抑制PMN—CL和LY—CL反应;苯甲酸钠和甘露醇抑制LY—CL反应的抑制率(IR)明显高于PMN—CL;而超氧化物歧化酶和过氧化氢酶抑制LY—CL的IR明显低于PMN—CL。结果提示,PMN—CL和LY—CL反应在CL形成的分子机制上并不完全相同。     

单羧酸类Cl-通道阻断剂对心室肌CFTR Cl-通道的影响

本文采用全细胞膜片箝与细胞内灌注技术,观察了单羧酸类Ｃｌ＾－通道阻断剂对豚鼠心室肌囊性纤维变性膜透性调节蛋白（ＣＦＴＲ）Ｃｌ＾－电流的影响,细胞包９－ＡＣ以可逆方式增强异丙肾上腺素（ＩＳＯ）激发的ＣＦＴＲＣｌ＾－的外向电流成分,５－ｎｉｔｒｏ－２－（３－ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ）－ｂｅｎｚｏａｔｅ（ＮＰＰＢ）和二苯胺羧酸（ＤＰＣ）对ＩＳＯ发的ＣＦＴＲＣｌ＾－电流的作用呈现先增强后抑制的双     

钙离子对乙酰胆碱受体通道脱敏的影响

Ｎ型乙酰胆碱受体通道的脱敏表现为通道开放概率的衰减,而通道开放时间和开放电流的变化水大,提示脱敏是全或无的,当「Ｃａ＾２＋」０＝１２．０ｍｍｏｌ／Ｌ时,脱敏５０％约用时１１．５分钟;「Ｃａ＾２＋」０＝０ｍｍｏｌ／Ｌ时,脱敏５０％药用时１．８分钟。证明在钙离子浓度较低的情况下,Ｎ型乙酰胆碱受体通道的脱敏较快,而下离子浓度较高时,通道脱敏慢,提示钙离子对通道从脱敏态到静息态的恢复有促进作用,并且对钙离     

阴离子及其通道阻断剂对大鼠主动脉张力的影响

目的：研究阴离子及其通道阻断剂在去甲肾上腺素(norepinephdne,NE)引起的血管收缩中的作用。方法：常规离体血管灌流法。结果：阴离子通道阻断剂尼氟灭酸(niflurnic acid,NFA)和5-硝基-2-(3-苯丙氨基)-苯甲酸[5-nito-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid,NPPB]可以抑制去甲肾上腺素NE引起的血管收缩;用胆碱替代灌流液中的Na^ 后血管张力无明显变化,而谷氨酸钠替代灌流液中的NaCl后血管张力下降,用同族元素Br^-替代Cl^-后血管张力增加,并能被NFA和NPPB所抑制。结论：阴离子在维持血管张力中的作用比Na^ 更为重要,提示阴离子通道可能在高血压发病中起一定作用。     

人血PMN呼吸爆发中活性氧测定的探讨——化学发光法

本文利用辣根过氧化物酶作为生理pH条件下PMN-鲁米诺化学发光催化系统。借以提高测定活细胞发光灵敏度。选用不同自由基清除剂对爆发反应中活性氧的生成影响进行了初步探讨。超氧化物歧化酶对细胞发光抑制较过氧化氢酶显著,Con A诱导的发光亦较其他刺激物为低,提示超氧化物阴离子系细胞爆发反应中含量水平较高,且对发光影响较大的活性氧。     

细胞松弛素B和鬼笔环肽对梨花粉管钙离子浓度和尖端钙离子通道的影响

应用激光共聚焦显微镜和全细胞膜片钳技术研究了微丝骨架解聚剂细胞松弛素B(CB)和稳定剂鬼笔环肽(PD)对梨花粉管细胞内钙离子浓度动态变化和尖端质膜上钙离子通道的影响。结果显示:CB处理能促进花粉管内胞质钙离子[Ca2+]i浓度增加,同时还能激活质膜上的钙离子通道;而PD处理对花粉管内[Ca2+]i浓度及钙离子通道几乎没有影响。研究表明,微丝骨架的解聚激活了花粉管质膜上的钙离子通道,使得胞外钙离子大量流入,胞内钙离子浓度升高,从而抑制花粉管生长。     

鸡脊髓运动神经元中钙离子通道α2亚基和钠离子通道α亚基的免疫学表达

目的观察电压门控钙离子通道α2（votage—gated calcium channel,VGCC）亚基和电压门控钠离子通道α（voltage—gated sodium channel,VGSC）亚基在鸡脊髓运动神经元中的表达,并探讨相互表达的关系。方法应用免疫组织化学（ABC法）观察鸡脊髓前角神经元中cCα2亚基和sCα亚基的表达,并应用免疫荧光双标记法观察鸡脊髓运动神经元中CCα2亚基和SCα亚基表达的关系。结果CCα2亚基主要表达于脊髓IX层的大型神经元中,Ⅷ层的部分小型神经元亦呈CCα2亚基免疫阳性,大约83％的脊髓运动神经元呈CCα2阳性。CCα2亚基免疫反应物位于神经元胞浆和近位树突中。SCα亚基免疫反应物主要表达于脊髓运动神经元细胞核中,或同时表达在神经元的细胞核及胞浆中。一些有髓轴突和神经元近位树突亦呈SCα亚基免疫强阳性。大约46％的运动神经元呈SCα亚基阳性,并所有SCα亚基免疫阳性运动神经元均为CCα2亚基阳性。结论脊髓运动神经元中CCα2亚基和SCα亚基有多样性表达,可能表明运动神经元的不同运动活性。     

川楝素对K+、Ca2+通道活动及细胞内Ca2+浓度的调控

川楝素是我国学者从驱蛔中药中分离、鉴定的一个三萜化合物，已证明具选择地影响神经递质释放，有效地对抗肉毒中毒，促进细胞分化、凋亡，抑制肿瘤增殖，抑制昆虫发育和取食，影响K⁺、Ca²⁺通道活动等多种生物效应. 综述了证明川楝素抑制多种K⁺通道，选择地易化L型Ca²⁺通道和进而升高胞内Ca⁺浓度的研究资料，并对川楝素产生这些生物效应的机制进行了讨论.     

钙离子通道蛋白的研究进展

钙离子是最广泛存在的细胞内信使,调控着几乎所有生命过程。最近的结构生物学研究解析了很多不同种类的钙离子通道在不同开放-关闭状态下的近原子分辨率结构。有关进展揭示了这些通道的分子组成、动态活动、生理功能、调控修饰的分子基础,为阐明钙信号转导和相关疾病的微观机制提供了理论基础.     

河豚毒素和Cd2+对Zn2+诱发爆发波放电的影响

本文用微电极细胞内电位记录、通道阻断剂和放射性同位素等技术发现,锌离子可诱发爆发波放电(BD),钠通道阻断剂——河豚毒素对BD无效应,而钙通道阻断剂——Ca²⁺则可使BD消失,Cd²⁺可使[⁶⁵Zn²⁺]_i量减少。以上结果说明,Zn²⁺诱发BD的产生机理很可能是Zn²⁺代替Ca²⁺通过钙通道进入胞内引起的。     

亲和层析纯化肌质网Ca2+－ATP酶

建立了一种亲和层析纯化肌质网Ca²⁺-ATP酶的方法．用非离子型去污剂C₁₂E₈ 溶解肌质网,再通过反应红－120琼脂糖亲和层析柱使肌质网Ca²⁺-ATP酶纯度从粗品中的65％提高到99％,并具有较高ATP水解活性．经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,为电泳纯．     

亚硒酸钠对巨噬细胞内游离Ca2+和Mg2+的影响

用单细胞阳离子测定系统研究了SeO^2-₃对巨噬细胞内游离Ca²⁺和Mg²⁺的影响.实验结果表明:SeO^2-₃高于10^-4mol/L时,有显著的细胞毒性.SeO^2-₃对细胞的毒性作用使细胞内游离Ca²⁺和Mg²⁺的浓度升高但Ca²⁺浓度的升高速率比Mg²⁺快.还有,高于10^-4mol/L的SeO^2-₃对红细胞膜上的Ca²⁺-ATP酶活性有明显抑制作用.     

钙的光释放技术及其在细胞研究中的应用

Ca²⁺的光释放技术通过光解作用使预先引入细胞内的光敏感性螯合剂对Ca²⁺的亲和性改变,从而实现对细胞内游离钙离子浓度的调控,有助于阐明Ca²⁺作为第二信使对电兴奋性、肌肉收缩、神经分泌等细胞功能的调制作用.     

Ca2+诱导的synaptophysin I蛋白的脂筏分布

文章研究了Ca2 对synaptophysin Ⅰ(Syp Ⅰ)蛋白的脂筏分布的影响.研究结果证明,Syp Ⅰ蛋白的脂筏分布明显受到Ca2 的特异性调控.在无Ca2 的条件下,Syp Ⅰ为典型的非脂筏蛋白;而在低浓度Ca2 的条件下,Syp Ⅰ可以转变为脂筏结合蛋白.文章还研究了Syp Ⅰ在Ca2 的诱导下进入脂筏膜微区的分子机制.研究结果表明,Syp Ⅰ在Ca2 的诱导下进入脂筏这一现象依赖于其C末端胞质区,确定了Syp Ⅰ的胞质区在这种调节中的重要性.     

猪脑突触体质膜(Ca2+-Mg2+)-ATPase的分离纯化与性质

以猪脑为材料,经匀浆、差速离心、蔗糖密度梯度离心分离突触体. 低渗破膜得到突触体膜. Triton X-100增溶后,经钙调蛋白亲和层析可得去脂的质膜Ca²⁺-ATPase. 用大体积亲和柱和大体积低Ca²⁺淋洗液淋洗,可得产率、纯度和活性均较高的质膜Ca²⁺-ATPase. 与大豆磷脂保温后,去脂的Ca²⁺-ATPase的水解活力可恢复达3.32 μmol/(mg·min).SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显示单一蛋白质带,分子质量约为140 ku,纯度在90%以上. 不同Ca²⁺浓度明显影响酶的活力.     

心肌细胞钙波随机性研究

钙波作为一种胞内的钙释放通道相互触发而产生的连锁反应广泛存在于多种细胞.在心肌中,由于与心律失常的发生有关,心肌细胞中的钙波近年来引起广泛关注.为了在微观上研究钙波的产生和传播过程,利用激光共聚焦钙成像技术对心肌细胞中的钙波进行了成像.实验和分析发现,钙波的起始是钙火花连续随机募集的过程,因此正常细胞中钙波发生概率很低.钙波传播过程中相邻位点开放的时间间隔接近正态分布,显示传播过程具有较大的随机性.且钙波速度越慢,位点间时间间隔的离散度越高.为了进一步研究这种随机性产生的内在机制,构建了一个数值模型对心肌细胞中的钙波进行模拟.研究证明,钙释放位点开放的随机性能够完整地解释实验中观察到的钙波传播的随机行为.实验分析和数值模拟相互印证,首次明确证明,钙波起始和传播过程的随机性,并揭示了该随机性与钙释放位点开放概率的关系.     

用顺磁共振及自旋标记研究活性氧对铜锌超氧化物歧化酶结构的影响

用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）或过氧化氢为活性氧体系分别作用于牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）,发现酶活性降低的同时,其活性中心中Ｃｕ（Ⅱ）被还原成Ｃｕ（Ⅰ）。进一步用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）或过氧化氢作用于马来酰亚胺标记ＣｕＺｎ－ＳＯＤ,用ＥＳＲ测定的结果表明酶分子亚基的缔合受到影响。结果提示酶的失活与活性中心中Ｃｕ（Ⅱ）的还原及酶构象的变化有关。