甜菜叶柄高效直接再生体系的建立

通过预试验,从4中不同基因型甜菜中选取KWS-9103作为试验材料,建立其叶柄高效直接再生体系。通过种植无菌苗、预培养、诱导分化培养,获得了再生植株,建立了甜菜快速繁殖体系。结果表明,甜菜种子经过消毒处理后培养,取幼苗在MS附加6-BA 0.5 mg/L和NAA 0.05 mg/L的培养基中预培养,再取叶柄作为外植体转入诱导培养基MS附加6-BA0.5 mg/L和NAA0.05 mg/L中诱导不定芽,不定芽诱导率为50%以上。在MS附加IBA2.0 mg/L生根培养基中生根,诱导生根率在90?以上,移栽成活率高达95%。     

扶芳藤组织培养再生体系的建立

扶芳藤茎段比叶盘易产生不定芽;4种基因型中,圆瓣扶芳藤的不定芽再生频率远远高于其他3种;MS 6-BA 2.0mg·L-1是圆瓣扶芳藤不定芽诱导的最适培养基;低温处理10 d可显著提高不定芽的再生频率;暗培养对扶芳藤再生影响不大;扶芳藤诱导不定芽的最适pH范围在5.8～6.2之间;最适琼脂浓度为0.6%.     

花生胚小叶离体再生体系的优化研究

目的：研究培养基中植物激素的种类、浓度和基因型差异对花生胚小叶离体培养再生效率的影响。方法：以花生胚小叶为外值体,比较各处理间的芽丛诱导率、芽丛出苗率和植株再生率,确定每个品种对应的适宜培养基。结果：小花生品种丰花2号的适宜芽丛诱导培养基为MSB＋3.0mg/LBA＋0.7mg/LNAA,芽丛诱导率为81.49%,再生率为94.39%;适宜芽丛成苗培养基为MSB＋2.5mg/LBA,芽丛出苗率为172.00%,再生率为122.10%。大花生品种丰花3号的适宜芽丛诱导培养基为MSB＋4.5mg/LBA＋0.2mg/LNAA,芽丛诱导率为72.33%,再生率为10.70%;适宜芽丛成苗培养基为MSB＋5.0mg/LKIN,芽丛出苗率为33.33%,再生率为4.03%。结论：不同基因型之间的成苗芽丛百分率、芽丛出苗率和植株再生率差异显著。     

韭菜胚根高效植株再生体系的建立

为了建立韭菜高频植株再生体系,以韭菜胚根的不同部位为外植体,研究了不同部位愈伤组织和芽的诱导。结果表明,胚根尖为诱导愈伤组织的最佳外植体,愈伤诱导率达到81.4%,出芽率达到73.3%;比较在不同激素配方上的愈伤组织诱导和芽的分化,在MS+1 mg/L BA+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT培养基中再生率最高,诱愈率达到80%以上,不定芽分化率达78.8%,繁殖系数为24.7;在MS+1 mg/L GA+0.5 mg/L KT不定芽伸长培养基中,30 d不定芽伸长为独立植株,比例为85.5%;独立的韭菜苗在1/2MS+0.3 mg/L IAA中生根率及根系状况最佳。通过该方法 130 d左右即可从胚根脱分化再生出植株。     

秋水仙素对草莓离体叶片再生和多倍体诱导的影响

以草莓(Fragaria×ananassa Duch.)栽培品种'雪蜜'(2n=8X=56)的离体叶片为外植体,研究了不同浓度秋水仙素对愈伤组织诱导率、不定芽再生率以及多倍体植株诱导的影响,并采用流式细胞仪对多倍体植株的倍性进行鉴定.结果显示,用质量体积分数0.1%、0.3%、0.5%和0.7%的秋水仙素浸泡2、4和6 d,草莓离体叶片均能诱导出愈伤组织和不定芽,但随秋水仙素浓度的提高和处理时间的延长,愈伤组织诱导率和不定芽再生率均显著下降.用不同浓度秋水仙素处理均能产生多倍体植株,倍性为9X、10X、11X、12X、14X和16X;随秋水仙素浓度的提高,多倍体诱导率呈现先上升后下降的变化趋势.用质量体积分数0.3%秋水仙素浸泡处理4 d是最佳的草莓离体叶片诱导方法,不定芽再生率达到40.5%,多倍体诱导率为100.0%,并且诱导产生出16X的植株.     

香叶天竺葵的组织培养快速繁殖

以香叶天竺葵的叶片和叶柄切段为外植体诱导愈伤组织,经过芽诱导、生根诱导等过程成功获得了香叶天竺葵的再生植株。对香叶天竺葵芽的诱导、芽的继代增殖、根的诱导及再生植株移栽等环节进行了优化,在对比研究过的各种培养基中,MS+0.2mg·L-1NAA+0.75mg·L-1BA为最适宜的芽诱导和增殖培养基,芽诱导率达30%,不定芽增殖频率也高于其它培养基;1/2MS+0.2mg·L-1NAA最适于进行生根诱导,生根率高达92%,在该培养基中诱导生根,再生植株的根和芽均显示出较好的长势,移栽成活率也高。该项研究为香叶天竺葵的工厂化大规模育苗提供了依据。     

用药诱导愈伤选拨育成的早熟草莓

茨城县园艺试验场宣布领先全国的园艺试验场用从花药中诱导的愈伤培养物成功地培育出早熟草莓,3月底申请品种登录。顺利的话,估计1993年5～6月品种登记。据茨城县园艺试验场研究员江面浩说,有几个园艺试验场都在用从花药中诱导的愈伤培养进行育种。但是,达到申请品种登记的该试验场是首家。登记申请品种名称是“安贝尔”,法语意义是“药”。其名称的统称为从枥木县的推奖品种“女峰”     

TDZ高效诱导蝴蝶兰叶片不定芽及植株再生

以蝴蝶兰（Phalaenopsis）无菌幼苗叶片为材料,研究添加TDZ（噻重氮苯基脲）条件下不同基因型、激素组合、叶片大小、暗培养时间对不定芽发生和再生植株的影响。结果表明：在相同培养条件下,不同基因型外植体芽诱导率差异显著,‘红天使’最高,达81.5%,‘汕农姑娘’等2个品种为0,‘满天红’等4个品种为9.2%～34.9%;添加TDZ芽诱导率显著高于6-BA;单独添加TDZ或6-BA芽诱导率显著高于NAA与TDZ或6-BA的组合。叶片越小不定芽诱导率越高;短时间暗处理有利于不定芽的发生。以1～2 cm长叶片为材料、15 d暗处理、在1/2 MS添加3 mg/L TDZ培养基中,‘红天使’的叶片外植体芽诱导率和平均不定芽数分别可达100.0%和18.2个。研究发现,在继代培养中TDZ对芽的伸长有抑制作用。     

地皮消愈伤组织诱导及植株高效再生体系的建立

以地皮消(Pararuellia delavayana)无菌实生苗带叶茎尖和带节茎段为外植体, 探讨不同植物激素种类及组合对愈伤组织诱导、芽丛发生及植株再生的影响。结果表明, 地皮消组织培养和植株再生的适宜外植体为带节茎段, 其在MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA+0.1 mg·L^-1 KT培养基中培养17天后, 约85.38%的外植体产生出分化能力较强的愈伤组织; 25天后约97.55%的愈伤组织开始分化出绿色芽丛; 30天后不定芽分化系数可达15.38。不定芽增殖继代6次后出现玻璃化现象, 且随着继代次数的增加, 玻璃化现象加重, 增殖率明显下降; 采用MS和B₅培养基交替使用可改善试管苗玻璃化现象并保持较高的增殖率。不定芽生根的适宜培养基为MS+0.5 mg·L^-1 NAA, 生根率可达100%。再生苗移栽成活率达95%以上。该研究建立了地皮消无性快速繁殖体系, 为保护地皮消野生资源及种苗繁育提供了有效途径, 也为其遗传转化研究奠定了基础。     

毛白杨优良无性系‘LM50’花药培养植株再生体系建立*

毛白杨‘LM50’具有速生、抗逆、不飞絮等优良特性,是木本植物进行遗传转化的理想材料。长期无性繁殖会导致优良性状衰退,在进行组织培养时,往往出现外植体不定芽分化和生根困难等问题。通过花药培养可以在较短时间内使毛白杨复幼,从而消除因外植体老化带来的负面影响,为转化研究提供理想的材料。与此同时,期望通过花药诱导创制单倍体植株,为基因组学研究和倍性育种提供材料。以山东冠县毛白杨基因库的‘LM50’为试验材料,对其花药发育时期与花芽形态的关系进行鉴定,选择单核靠边期的花药进行试验,探究了生长素和细胞分裂素在花药愈伤组织形成、不定芽分化及不定芽生根中的作用,建立了毛白杨花药离体再生体系,采用流式细胞仪和染色体压片计数法对诱导获得的再生植株进行了倍性鉴定。进一步利用花药培养再生植株的叶片建立了分化率高、生根率高的植物再生体系。小孢子发育时期与花芽外部形态特征对比表明,花芽长度为(1.98 ± 0.06) cm,1/4花序露出芽鳞的花芽,此时小孢子大部分处于单核靠边期;选择处于此时期的花药诱导形成愈伤组织,愈伤组织诱导率最高的培养基为H + 1.00 mg/L NAA + 1.00 mg/L BA,诱导率约为28.89%;愈伤组织进一步分化为不定芽,最佳分化培养基为MS + 0.05 mg/L NAA + 0.50 mg/L BA,分化率约为22.23%;不定芽接种至生根培养基,最佳生根培养基为1/2 MS + 0.30 mg/L IBA,生根率约为93.30%;利用流式细胞仪和染色体压片法对花药培养的27株再生植株进行倍性鉴定,鉴定植物均为二倍体;再生植株叶片分化成芽的最佳培养基为MS + 0.10 mg/L TDZ + 0.10 mg/L NAA + 0.50 mg/L BA,分化率高达92.23%。该叶片分化产生的不定芽的生根培养基与愈伤组织诱导不定芽生根的培养基相同,生根率一致。研究获得了毛白杨‘LM50’花药诱导再生植株,并建立了再生植株的叶片培养体系,可用于该优良无性系的快速繁育和毛白杨的遗传转化研究,为毛白杨的分子设计育种奠定了基础。     

茶树茎段不定芽高效发生体系的建立

茶树(Camellia sinensis)是重要的经济作物,杂合度高且变异度大,其高效离体再生体系鲜见报道。以舒茶早茎段为起始外植体,进行不定芽高效发生影响因子研究。结果表明,MS+2 mg·L^–1 6-BA为定芽诱导的最适配方,定芽诱导率为84.44%,吸收底盘膨大率为80%,利于后续不定芽诱导;MS+2 mg·L^–1 6-BA+0.2 mg·L^–1 NAA+0.1 mg·L^–1KT+1 mg·L^–1脯氨酸为不定芽增殖诱导的适宜配方,不定芽诱导率为88.89%,平均芽数为7.8。不定根诱导的适宜配方为1/2MS+3 mg·L^–1 IBA,生根率为85.56%。采用RAPD和ISSR技术对再生植株进行分子检测,在连续2代离体再生植株中未发现明显变异。     

影响辣椒离体再生芽伸长因素研究

以辣椒子叶为外植体,比较不同浓度BA和IAA激素组合对辣椒再生芽诱导的差异,利用筛选出的高效芽诱导培养基为基础,研究了赤霉素、芽诱导时间、培养基有机成分、不同激素组合和品种等因素对辣椒不定芽伸长的影响。结果表明:不同基因型辣椒子叶再生能力不同,BA3.0mg.L-1 IAA0.5mg.L-1的激素配比对不定芽诱导频率最高;不定芽的伸长百分率随着GA3浓度的增加而增加,GA3的适合浓度为1.0～2.0mg.L-1;不定芽诱导时间对不定芽的伸长有一定的影响,诱导21d的不定芽,其伸长频率明显高于诱导14d的不定芽;B5有机成分在辣椒不定芽的伸长中效果优于MS有机成分;激素组合对不定芽伸长有一定的影响,Zeatin GA3激素组合对伸长效果最好,BA IAA GA3伸长效果较好,BA PAA(苯乙酸,phenylaceticacid) GA3伸长效果次之;不同品种辣椒不定芽的伸长能力有一定差异,楚风和苏椒五号再生芽伸长能力最佳。与IAA和NAA相比,IBA对再生芽生根效果较好。     

圣剑'洋桔梗植株高频再生体系建立及卡那霉素敏感性测定

洋桔梗是国际上十分流行的盆花和切花种类。以洋桔梗‘圣剑’无菌苗叶片为外植体,研究了6-BA与NAA不同浓度组合对其不定芽再生的影响,并分别比较了不同浓度IBA和NAA诱导其生根的效果,测定了该品种在不定芽再生时对卡那霉素(Km)的敏感性。结果表明:MS+0.5 mg·L-16-BA+0.01 mg·L-1NAA为不定芽再生最适培养基,不定芽再生率达91%;1/2 MS+0.2 mg·L-1IBA为不定根再生的最适培养基,生根率达89%;抑制叶片不定芽再生的Km最低浓度为25 mg·L-1。建立了‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系,并确定了其对卡那霉素的敏感性,为该品种的基因工程研究奠定了基础。     

禿杉组织培养研究

本文详细报道了从秃杉(Taiwania flousiana Gaussen)离体胚诱导不定芽、不定根及从无菌苗茎端培养再生植株的过程。诱导不定芽要求较低的蔗糖浓度(以3％最好);同时BA是必须的,在附加0.1—3 mg/1 BA的White培养基上,从离体胚的子叶或胚轴上诱导了不定芽的发生(以1 mg/1最好);NAA与BA结合使用,对不定芽诱导无促进作用;适当提高光照有利于不定芽的诱导。在诱导不定芽的同时,在子叶表面还观察到有许多无结构的“不定突起”。不定芽起源于子叶表皮下1—2层细胞。IBA对诱导离体胚上产生不定根效果较好。在有或无生长素的培养基上,从生长1月龄的无菌苗茎端培养获得了不定根的产生,在加有细胞分裂索的培养基上,从无菌苗上产生了腋芽。     

玉竹的组织培养与快速繁殖

以玉竹[Polygonatum odoratum (Mill.) Druce]根状茎、叶片和茎段为外植体,于附加不同激素配比的MS培养基中诱导愈伤组织、不定芽和不定根,探讨增殖培养和植株再生的条件.结果表明,叶片和茎段外植体诱导愈伤组织和芽的分化率很低;而根状茎外植体易于培养,有较高的诱导率和增殖倍数,其愈伤组织、不定芽和不定根的诱导率分别可达87%、90%和99%以上.适宜根状茎外植体愈伤组织诱导的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,有利于增殖和丛生芽分化的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,而1/2MS+3.0～5.0 mg/L NAA适宜诱导试管苗生根培养.试管苗的移栽成活率可达85%以上.     

黄瓜子叶节高频再生体系建立及再生植株倍性观察

以‘农城3号’黄瓜子叶节为试材,研究不同苗龄、不同激素对黄瓜离体植株再生频率及再生不定芽的影响,并对再生植株进行了根尖染色体计数和叶片气孔保卫细胞叶绿体数目的鉴定。结果表明,(1)6-BA对黄瓜不定芽诱导起关键作用,IBA不利于黄瓜不定芽的诱导。(2)MS 2.0mg/L6-BA培养基是‘农城3号’黄瓜通过子叶节进行不定芽诱导再生植株的最佳培养基。(3)正常发育的无菌苗4~5d左右子叶不定芽再生频率较高,苗龄超过5d,不定芽再生频率明显下降。黄瓜子叶再生植株与实生苗的根尖染色体数目均为2n=14,再生植株与实生苗的气孔保卫细胞叶绿体数均分布在6~10的范围内,说明再生植株的倍性没有发生改变。     

影响辣椒离体再生芽伸长因素研究(英文)

以辣椒子叶为外植体,比较不同浓度BA和IAA激素组合对辣椒再生芽诱导的差异,利用筛选出的高效芽诱导培养基为基础,研究了赤霉素、芽诱导时间、培养基有机成分、不同激素组合和品种等因素对辣椒不定芽伸长的影响。结果表明:不同基因型辣椒子叶再生能力不同,BA3.0mg·L^-1+IAA0.5mg·L^-1的激素配比对不定芽诱导频率最高;不定芽的伸长百分率随着GA₃浓度的增加而增加,GA₃的适合浓度为1.0～2.0mg·L^-1;不定芽诱导时间对不定芽的伸长有一定的影响,诱导21d的不定芽,其伸长频率明显高于诱导14d的不定芽;B5有机成分在辣椒不定芽的伸长中效果优于MS有机成分;激素组合对不定芽伸长有一定的影响,Zeatin+GA₃激素组合对伸长效果最好,BA+IAA+GA₃伸长效果较好,BA+PAA(苯乙酸,phenylaceticacid)+GA₃伸长效果次之;不同品种辣椒不定芽的伸长能力有一定差异,楚风和苏椒五号再生芽伸长能力最佳。与IAA和NAA相比,IBA对再生芽生根效果较好。     

泰山酸枣离体叶片再生体系的建立

以泰山酸枣叶片为外植体,以WPM为基本培养基,研究了植物生长调节剂种类、浓度及培养方法等因素对离体叶片不定芽再生的影响,结果表明:不定芽启动的最佳培养基激素组合为1.0 mg·L-1 TDZ+0.5 mg·L-1 IAA;不定芽诱导伸长最佳培养基的激素组合为0.1 mg·L-1 IAA+0.5 mg·L-1 GA3.暗培养是不定芽再生的必需条件,在最适宜的不定芽再生培养基上,叶片连续光培养,不定芽不能再生;叶片先进行暗培养3周后转入光下培养,叶片不定芽再生效果最好,再生率最高可达100%.     

南瓜高效再生体系的建立

南瓜(Cucurbita moschata)再生率较低, 为建立高效的南瓜再生体系, 以南瓜子叶为外植体, 进行35组不同激素浓度的不定芽诱导研究。结果表明, 南瓜再生受培养基中激素浓度和配比的影响, 适宜浓度6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)能有效促进不定芽形成; 单独使用脱落酸(ABA)诱导使南瓜子叶发黄, 但与6-BA组合使用可显著提高外植体的再生能力, 1.0 mg?L ^-16-BA与0.5 mg?L ^-1ABA组合南瓜芽再生率高达90.26%。将不定芽置于MS培养基中进行生根培养, 再生苗移栽易成活。从子叶接种到苗再生约需70天。     

南瓜高效再生体系的建立

南瓜(Cucurbita moschata)再生率较低, 为建立高效的南瓜再生体系, 以南瓜子叶为外植体, 进行35组不同激素浓度的不定芽诱导研究。结果表明, 南瓜再生受培养基中激素浓度和配比的影响, 适宜浓度6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)能有效促进不定芽形成; 单独使用脱落酸(ABA)诱导使南瓜子叶发黄, 但与6-BA组合使用可显著提高外植体的再生能力, 1.0 mg∙L ^-16-BA与0.5 mg∙L ^-1ABA组合南瓜芽再生率高达90.26%。将不定芽置于MS培养基中进行生根培养, 再生苗移栽易成活。从子叶接种到苗再生约需70天。