一种测定CuZn-SOD总量的新方法——化学发光免疫分析法

通过探索,用ABEI发光剂标记人CuZn-SOD,用液相竞争结合法测定样品中CuZn-SOD含量。此法试剂稳定,结果重复性好,批内CV=2.6～6.0％,批间CV=6.9～7.9％,回收率97.7—106.1％,可测范围为1—500ng,适合测定血清及体液中微量CuZn-SOD。     

二阶导数光谱法测定脑活素注射液中色氨酸的含量

用二阶导数光谱法测定脑活素注射液中色氨酸的含量,可以消除该注射液中其它成份对其干扰。以水作为参比:波长选定282.0nm(峰):285.2nm(谷),色氨酸测定浓度0～0.05mg/ml,线性关系良好,回归方程D=94.585C—0.0111r=0.999.9平均回收率(%)100.6(n=5 CV(%)=1.2)     

芒柄花素的放射免疫测定法

本文建立了芒柄花素(formononetin)的放射免疫测定法(RIA)。该方法利用芒柄花素的衍生物作为同位素示踪物,获得的针对芒柄花素—7-O—羧甲基—牛血清白蛋白(BSA—F)的抗血清对芒柄花素具有高的亲和性(Ka=6.8×10~9 L/M)。方法的检出限量为3.5±1.24 ng(n=13),检出范围为3.5—100 ng。用此方法测定红三叶草(Trifolium pratense L.)中的芒柄花素含量,批内、批间的平均误差分别为6.5％和11.9％,加样回收率平均为98.5％。红三叶草中芒柄花素含量为0.1305±0.495％(n=12)。南京地区夏季杂牧草饲料中芒柄花素含量为0.0062±0.030％(n=6)。并用此方法测定了饲喂红三叶草的湖羊血清中芒柄花素的血浓-时间曲线图。     

恒河猴血清孕酮含量测定方法

目的建立恒河猴血清中孕酮含量测定方法。方法本文采用放射免疫测定技术。结果孕酮的回收率为94％,批内CV为5．1％～8．3％,批间CV为4．5％～7．7％,灵敏度为5～10Pg。说明该方法具有较高的灵敏度、特异性、准确性。分别测定了幼年组、成年组和老年组的雌性恒河猴的血清中的孕酮含量分别为：（0．20±0．04）ng／mL、（6．26±0．17）ng,mL和（0．35±0．06）ng/mL;成年雌性恒河猴月经周期孕酮的变化范围为：滤泡期为（1．10±0．12）ng／mL,排卵期（2．36±0．18）ng/mL,黄体期（6．17±0．15）ng/mL,妊娠期随着妊娠月份的增加,孕酮浓度也增加,最高可达50ng／mL。结论经实验验证,该方法灵敏、可靠、适用,可作为恒河猴血清中孕酮含量测定的一种方法。     

散射比浊法检测糖化血红蛋白及临床意义

目的:探讨散射比浊法检测糖化血红蛋白的临床应用价值;方法:采用散射比浊法检测糖化血红蛋白,分析其检测的精密度、线性关系、抗干扰能力及相关性分析.结果:散射比浊法批内CV分别为3.1％和4.3％,批间CV分别为3.8％和5.0％;线性关系Y=l.025X+0.024,R2=0.996;胆红素、三酰甘油、尿素抗干扰实验实测值均在可信区间;散射比浊法与色谱法相关性方程为Y=0.968X+0.364,R=0.976,(P＞0.05).结论:散射比浊检测糖化血红蛋白精密度较高,线性关系良好,抗干扰能力强,相关性良好,可适用于基础和临床实验.     

血水草地下部分白屈菜红碱的含量测定

提出一个单波长扫描测定血水草地下部分白屈菜红碱含量的方法,药材以95％的乙醇提取在320nm处测定,回收率为96.3％(CV=2.39％),结果稳定可靠。     

蚀斑法检测流感病毒滴度方法的建立及初步验证

目的建立流感病毒滴度蚀斑检测方法,研究其适用性,为基于Vero细胞基质的四价流感裂解疫苗原液生产过程提供质控手段。方法通过优化覆盖物琼脂糖含量、病毒吸附时间及培养温度等参数,建立蚀斑法检测流感病毒滴度检测的方法,对其进行初步验证,并与鸡胚法进行比较。结果通过对流感病毒培养条件的优化,确定覆盖物中最佳琼脂糖终浓度为1.0%(P=0.001,P0.05)、最佳吸附时间为90 min(P=0.001,P0.05),与对照差异具有统计学意义;不同温度(33℃、35℃和37℃)培养条件对病毒滴度的影响差异无统计学意义(P0.05)。对病毒液重复性试验结果显示,由同一组试验人员连续测定8次,CV在3.73%～7.04%之间;同一组试验人员在不同工作日内对3批甲型(H3N2)病毒液测定,CV在3.46%～4.12%之间;不同试验人员测定结果的CV在1.77%～5.63%之间。表明蚀斑法重复性好、准确度高。蚀斑法与鸡胚法检测病毒滴度分别为7.84 lgPFU/mL和7.24 lgEID_(50)/mL,CV分别为2.90%(5%)和10.21%。蚀斑法在流感病毒2017—2018年流行株病毒滴度检测中应用,均获得稳定的检测结果。结论建立的蚀斑法简便、稳定且灵敏度高,能够准确地检测流感病毒的滴度,可用于流感疫苗生产过程的质量控制研究。     

微生物法测定食品中泛酸的含量

利用植物乳杆菌（ATCC8014）对泛酸的含量在一定条件下成线性关系,通过吸光度测定细菌繁殖浓度,可间接测定食物样品中泛酸的含量,并检测其回收率。结果表明标准曲线在10—100ng范围内线性关系良好,批内相对标准差（RSD）为2．1％-4．3％,批间测定RSD为2．7％-4．1％,回收率为88．4％～100．5％,达到了较好的分析效果。     

尿酸酶－鲁米诺化学发光传感器

研制了依赖于鲁米诺化学发光反应和固定化尿酸酶柱的测定血清尿酸的生物传感器。其测定血清样品响应时间47s。测定每份样品需时1．5min,样品体积17μl。工作曲线的线性范围1~20mg／dl。批内不精密度3．22％～4.36％,批间6.18%～7．8%。测定值回收率为93％～109％。与医院常规酶试剂盘方法比较相关系数r=0.9909。固定化尿酸酶柱室温使用,4℃冰箱保存,连续使用5个半月测定样品2000次以上,仍保持原酶柱活力的94%。     

微量定磷法测定红细胞钙调素含量

 磷酸二酯酶在钙调素(CaM)激活下水解cAMP为AMP。后者经蛇毒水解为无机磷酸和腺苷。用孔雀绿显色测定无机磷酸量与标准CaM比较即可测出CaM活性。该法测定CaM灵敏度3.4ng,可测范围3.4—48ng,批间变异系数3.8％—6.4％。 纯化的红细胞(RBC)经超声破碎,沸水浴加热,离心上清与标准CaM所作的磷酸二脂酶平行激活曲线呈正相关(r=0.9900,p<0.0005)。RBC CaM含量测定,批间变异系数11.5％,回收率97.8％±2.0％。本法测得30例正常人RBC CaM含量为6.31±1.5fg/cell,性别之间无显著差异(p>0.5)     

分光光度法测定金荞麦(-)-表儿茶素含量的方法研究

为建立香荚兰素-盐酸分光光度法对表儿茶素含量的测定方法,实验分别以乙醇和水作溶剂,在34.79～208.74μg范围内取样置50 mL容量瓶测定,结果发现:①以乙醇作溶剂时,测定波长为508 nm,1%香荚兰浓盐酸添加量应超过40mL(CV≤1.86%),测定时间以40 min后为宜(CV≤2.65%),标准曲线线性关系(R=0.999 3)与精确度(CV=2.66%)、准确度(P0.05)良好。②以水作溶剂时,测定波长为504 nm,显色反应不稳定,标准曲线线性关系(R=0.988 1)也较一般。③采用乙醇作溶剂时,测得金荞麦块根中(-)-表儿茶素类物质含量占干物质的2.22%(CV≤3.90%),该法操作简便,灵敏度高,重现性好。     

网织红百分数法测定rHuEPO体内生物学活性的研究

本文通过对网织红百分数法测定rHuEPO体内生物学活性进行研究,找出网织红细胞百分数与rHuEPO浓度线性相关的范围。从而确定了用计数网织红细胞百分数的方法测定rHuEPO体内生物学活性。提出在rHuEPO体内生物学活性测定中选择合适的稀释液至关重要。对(3,3)法测定rHuEPO体内生物学活性进行了统计,批间CV、批内CV均接近10%,单次实验FL%平均数为3126%,并提出鼠间差异是造成FL%较大的主要原因;对(3,3)法与(2,2)法测定rHuEPO体内生物学活性进行比较,发现(2,2)法较(3,3)法更适合用于rHuEPO生产过程中rHuEPO体内生物学活性的测定。     

组织型纤溶酶原激活剂的发光分析法及其应用

 本文建立了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活力的发光固相测定方法。用氨基乙基丁基异鲁米诺(ABEI)标记纤维蛋白原(Fg),在一定条件下,t-PA作用于固相(包被ABEI-Fg),产生纤维蛋白的降解产物。测定可溶性降解产物的发光强度,即能计算t-PA活性。该方法的标准曲线范围对t-PA为0.156IU/mL～40IU/mL。灵敏度可达0.156IU/mL。回收率为98.6％(n=27)。批内批间变异系数分别为6.6％及10.3％。该方法曾用于检测细胞培养液中提取t-PA样品及t-PA基因表达时培养液中t-PA的活性。也曾用于检测从组织中纯化t-PA样品及血浆中t-PA活性的测定。文中讨论了该方法与其它方法优缺点的比较。     

SYBR Green I荧光RT-PCR法检测贝类中的诺如病毒

针对诺如病毒II型的保守区域设计引物,建立了SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测诺如病毒II型的反应体系。此方法的病毒检测下限达到102拷贝,标准曲线的线形范围为102~106拷贝,相关系数为0.9952,斜率为?2.982,截距为35.84。对诺如病毒II型检测特异,与轮状病毒、腺病毒、甲肝病毒、星状病毒无交叉反应。针对质粒标准品检测的批内试验变异系数 (CV) 为0.95％~1.69％ (n=5),批间试验CV为0.87％~1.24％ (n=3)。运用此方法随机检测30份贝类水产品,检测出2份阳性样品。结果表明,SYBR Green I荧光RT-PCR检测诺如病毒II型的方法灵敏、特异、重复性好,可应用于贝类水产品的快速检测。     

时间分辨免疫荧光分析测定人血清铁蛋白

用一种新型非放射性免疫分析——时间分辨荧光免疫分析法测定人血清铁蛋白含量。方法灵敏度达2ng/ml;测量范围5—1500ng/ml;批内、批间变异系数分别为7.1±0.8％和10.0±1.3％(x±SD);回收率为98.4±7.4％。测定值与RIA法测定值比较,相关性良好。     

高效液相色谱测定血清中的非胆因醇甾醇

本文介绍一种用高效液相色谱同时测定血清中２４－脱氢胆固醇、７－烯胆甾烷醇、菜油甾醇、胆甾烷醇和β－谷甾醇的方法。血清加内标（６－氯豆甾醇）后用氢氧化钾醇溶液皂化,用正已烷提取其中的各种甾醇,将提出的甾醇衍生为苯氨基甲酸酯,用ＨＰＬＣ分离测定。本法样品处理简单,色谱分析时间短,批内和批间变异系数分别为２．２～３．８％和３．３～６．７％。本文也首报告我国成年人血清非胆固醇甾醇水平,５种甾醇血清深度的总     

高效液相色谱测定血清中的非胆固醇甾醇

本文介绍一种用高效波相色谱（ＨＰＬＣ）同时测定血清中２４－脱氢胆固醇、７－烯胆甾烷醇、菜油甾醇、胆甾烷醇和β－谷甾醇的方法。血清加内标（６－氯豆甾醇）后用氢氧化钾醇溶液皂化,用正己烷提取其中的各种甾醇,将提出的甾醇衍生为苯氨基甲酸酯,用ＨＰＬＣ分离测定。本法样品处理简单,色谱分析时间短,批内和批间变异系数分别为２．２～３．８％和３．３～６．７％。本文也首次报告我国成年人血清非胆固醇甾醇水平,５种甾醇血清浓度的总和平均为１．５４ｍｇ／ｄｌ,是胆固醇的０．８６％。     

病理性瘢痕中主要氧化酶和抗氧化酶活性测定

采用化学比色法测定正常皮肤(8例)、增生性瘢痕(10例)及瘢痕疙瘩(10例)组织中黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)、铜锌超氧化物歧化酶(copper,zinc-superoxide dismutase,CuZn-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)活性以及丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量.结果表明:与正常皮肤比较,病理性瘢痕中XO和CuZn-SOD活性增加、CAT活性降低(P<0.05)而GPX活性不变,CAT/CuZn-SOD和GPX/CuZn-SOD活性比率下降(P<0.05),同时MDA含量升高(P<0.05).增生性瘢痕、瘢痕疙瘩之间比较均无差异.上述结果表明,在病理性瘢痕中,氧化酶XO,抗氧化酶CuZn-SOD、CAT以及GPX的活性改变可能是引起活性氧水平升高的原因之一,在抗氧化剂选择上,CAT可能较为合理.     

应用微量滴定法测定天花疫苗效力

微量滴定法代替血球吸附法测定天花疫苗效力。通过对Vero细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化,确定了微量滴定法测定天花疫苗效力的方法,用Vero细胞微量滴定法和血球吸附法测定14批天花疫苗。两种滴定方法的检测结果差异有显著意义(P<0.05),二者存在正相关(r=0.76,0.001相似文献   

吖啶酯发光法分析测定组织型纤溶酶原激活剂的研究

本文建立了灵敏度高、能定量测活且成本低廉的吖啶酯(AE)发光分析组织型纤维溶酶原激活剂(t-PA)的方法。该法灵敏度达0.125 IU/ml;在t-PA 0.125～8.0IU/ml范围内,t-PA活力单位对数与其发光计数呈良好的线性关系(r=0.997);批内变异系数为8％(n=8);回收率为86～122％。本法用于测定人黑色素瘤细胞mt-PA、CHO细胞表达的rt-PA,获得与纤维蛋白琼脂板测定法(FAPA)相一致的结果;测定健康人静脉闭塞前后血浆中t-PA活性的变化,显示出明显差别,静脉闭塞后血浆中t-PA活性约为静脉闭塞前的2～3倍。该法对肺癌患者血浆t-PA活性测定结果明显高于正常人,因而具有临床诊断价值。