用银染色显示的rHuIFN-αD垂直板聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定法

本文报道了用聚丙烯酰胺垂直凝胶板进行蛋白质等电聚焦的方法,用改进的银染法使测定灵敏度达到ng水平。通过分析蛋白质等电聚焦的影响因素,建立了稳定的电泳条件,并用该方法发现了重组人αD型干扰素(rHu IFN-αD)基因表达产物的带电荷不匀一性。     

rhIGF-1等电点的测定

目的：通过测定rhIGF-1等电点为例,建立一种快速测定蛋白质等电点的方法。方法：采用等电聚焦电泳（isoelectric focusing,IEF）和高效液相色谱（HPLC）连用的方法,主要以7．5％的凝胶浓度、3％的交联度及6％的两性电解质浓度配置凝胶,电泳后的凝胶经凝胶成像系统和HPLE分析确定目的条带及其pI值。结果：rhIGF-1的等电点为pI=8．20,pH梯度曲线线形回归方程为Y=0．0664X＋3．8217,相关系数r达0．9956,说明等电聚焦电泳测定结果准确。     

光敏核不育水稻61kD特异性蛋白质的纯化和N—端序列分析

用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和制备型等电聚焦纯化了曾报道的光敏核不育水稻 (Oryza sativa)农垦 58S叶绿体的特异性蛋白质 P2 ,得到 SDS- PAGE和等电聚焦 (IEF )纯的 P2。经 SDS- PAGE和 IEF测定 ,该纯蛋白质的分子量是 61 k D,等电点是 5.8。现称 P2为 P61。氨基酸序列分析表明 P61的 N-端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体 ATPaseβ亚基的 N-端氨基酸序列同源。     

一种简单、快速、微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法

Bio-Rad公司的微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(ModelⅢ Mini IEF Cell),不需要使用电极缓冲液,聚焦电泳时间仅用1.5小时,效果甚佳,但要使用该公司专有的凝胶支持薄膜,难于推广应用,我们经过试验,建立了一种简单、快速的微量凝胶等电聚焦电泳方法,40min完成等电聚焦过程,采用快速染色、脱色和干燥,将电泳图谱制成透明的薄膜,整个过程可以     

三种分析水稻F1代幼苗生长过程中酯酶同工酶变化的电泳方法比较

利用聚酯胶片作为凝胶支持物的超薄等电聚焦电泳(UTLIEF)研究水稻F1种子萌发过程中的酯酶同工酶多态性变化的结果表明,UTLIEF相比非变性不连续聚丙烯酰胺电泳(native-PAGE)和常规等电聚焦电泳(IEF)得到的酯酶同工酶图谱更清晰,酶带数目和强弱的多态性变化更高,用pH 2～9的两性电解质时等电聚焦的电泳效果较好.     

等电聚焦法测定2.5S NGF的等电点

采用水平等电聚焦法测定了２５Ｓｍ神经生长因子（ＮＧＦ）的等电点。经测定,纯化的２５ＳｍＮＧＦ的等电聚焦为三条带,这与文献报道相一致,等电点ｐＨ值分别为ｐＨ８７、９０、９３,其主要成分为β亚基ＮＧＦ及其修饰物的混合物,包括在羧基端失去８个氨基酸残基和在氨基端失去１个精氨酸残基,由这三种组分构成的ＮＧＦ统称为２５ＳｍＮＧＦ。     

超高分辨率毛细管等电聚焦—电喷雾质谱联用方法观察蛋白质亚型

在线的毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用 ,作为一种二维的分离系统 ,对毛细管等电聚焦过程中形成的蛋白质亚型进行了分析。这种分析系统通过使用中性的涂层毛细管 (80cm长 )、动态的毛细管位置调整方法和鞘流液接口得以建立。蛋白质首先在毛细管等电聚焦过程中根据它们等电点的差异得到分离 ,然后被电喷雾质谱鉴定。已聚焦好的蛋白质区带通过结合阴极移动和重力移动的方法从毛细管中流出而进入质谱仪。由于在此特定情况下这种方法具有极高的分辨率 ,有三种血红蛋白A和镰刀型血红蛋白的亚型 (具有几乎相同的电荷分布和分子质量 ,但它们的等电点差异在 0 .0 4到 0 .0 8之间 )和两种乳球蛋白A的亚型 (等电点差异为 0 .6 )被检测到。这些蛋白质亚型的等电点、相对含量和分子质量都通过毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用方法同时得到了确定。     

蜈蚣碱性蛋白SSmp—d的分离纯化及其部分理化性质的鉴定

少棘巨蜈蚣经９５％乙醇脱脂后,再经４℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱,等电聚焦制备电泳,再经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０柱,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱,最后经ＨＰＬＣ制备得到一个纯的碱性蛋白,命名为ＳＳｍｐ－ｄ。该蛋白经ＨＰＬＣ、超薄等电聚焦电泳检验是均一的。采用ＨＰＬＣ和Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｐａｋ＾ＴＭ１２５柱测定其分子量为２４．６４ｋＤ。ＩＥ     

种子蛋白质超薄等电聚焦电泳鉴定杂交水稻种子纯度的准确性初探

分别用超薄等电聚焦电泳技术和田间小区种植技术鉴定杂交水稻64SxEP431 F1种子纯度和比较两者吻合程度的结果表明这两种方法鉴定的纯度完全吻合.显示超薄等电聚焦电泳技术可用于鉴定杂交水稻种子纯度.     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦

等电聚焦也曾称为等电点分离、等电点划分、等电点分析、聚焦电泳等。1966年瑞典学者Vesterberg和Svernsson首先合成了两性载体电解质,并成功地用于肌红蛋白分离,使这方法具有实用价值。等电聚焦的先决条件就是要求有稳定的pH梯度。按照支持pH梯度的介质不同,可     

一种改良的醋酸纤维素膜血清蛋白等电聚焦电泳方法

目前在等电聚焦电泳技术中,应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶平板薄层等电聚焦。该法具有分辨率高的优点,但需采用高纯度试剂,价格昂贵,而且超薄层制板(≤0.5mm)技术要求也较高,这些条件限制了它的推广应用。利用醋酸纤维素膜进行等电聚焦,则可弥补上述缺点。但众所周知,醋酸纤维素膜存在较强     

用等电聚焦技术对三种马鸡亲缘关系的研究

本文用0.5mm薄层等电聚焦电泳技术对三种马鸡的卵清蛋白进行了比较分析。电泳谱和扫描结果表明,藏马鸡和蓝马鸡的亲缘关系比褐马鸡更近些。而且地理分布、骨骼和化石材料方面的分析结果和等电聚焦的结果是一致的。     

循环自由流等电聚焦方法的建立及应用研究

等电聚焦是利用蛋白质分子或其它两性电解质分子的等电点不同,在一个连续、稳定、线性的pH梯度中进行蛋白质分析分离的技术。薄层凝胶等电聚焦具有高分辨率,但上样量小,聚焦后样品分析处理不便,仅局限于分析。循环自由流液相等电聚焦以液体循环流动代替固相载体,上样量大,聚焦后样品分析处理方便,有较大的制造潜力。Bier等已开展这项技术的研究。该技术应用到遗传工程上可对干扰素等进行精制纯化^[3]。本实验应用循环自由流等电聚焦仪(Recycling free-flow isoelectric fo-cusing,RIEF)进行了pH梯度的建立、模型化合物的分离、相关参数的比较,并被步应用于生物活性蛋白的精制和活性回收,旨在为遗传工程产品下游工艺提供一种新型而行之有效的方法。     

一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置

薄层等电聚焦分析电泳是近年来发展起来的一种高分辨率的蛋白质分析技术。等电聚焦是利用两性载体电解质,在外加电场的作用下,形成稳定的pH梯度,使得蛋白质、酶及多肽按其各自不同的等电点聚焦在相应的pH位置上,以便达到分离的目的。薄层等电聚焦分析电泳可以在一块薄层胶片上分析多个样品,操作方便、分辨率高,所以被人们广泛地采用。本文介绍一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置,它适用于我们现有的一般实验室条件,勿需进口成套贵重设备,同样能得到满意的分析结果。 1.电泳装置的配备我们自制了简易的电极架(图1)。上架用     

黑麦基因组中不同染色体在缺磷胁迫下对普通小麦根系分泌酸性磷酸 …

以一整套中国春－帝国黑麦二体附加系为材料，通过在低磷胁迫下对其根系分泌Ａｃｐｈ能力测定及同工酶等电聚焦分析证明：缺磷胁迫是Ａｃｐｈ基因表达的诱导因子，帝国黑麦不同染色体的中国春小麦背景中对其根系在低磷胁迫下Ａｃｐｈ的分泌具不同的正效应，其中以１Ｒ染色体的效应最为强烈，Ａｃｐｈ等电聚焦（ＩＥＦ）的酶谱清楚地表明黑麦的１Ｒ染色体上携有在缺磷胁迫下诱导表达的Ａｃｐｈ基因。     

小麦不同细胞质雄性不育系及其保持系萌动胚及幼芽可溶性蛋白等电…

用等电聚焦电泳分析的方法,测定了小麦３种细胞质雄性不育类型（Ａ型、Ｅ型、Ｔ型）及其相应同核保持系萌动胚及动幼芽可溶性蛋白。发现雄性可育系等电点（ｐＩ）为４．９０的蛋白质成数量高于相应的不育系;ｐＩ为６．８５的蛋白质可能是Ｔ型细胞质基因表达的结果;ｐＩ为７．６的蛋白质可能为津丰Ａ不育系特有的区带。表明细胞质来源不同的不育类型,其萌动胚及动芽可溶性蛋白等电聚焦电泳图谱差异明显,有可能作为鉴别它们的依据     

黑麦基因组中不同染色体在缺磷胁迫下对普通小麦根系分泌酸性磷酸酯酶(Acph)遗传效应的研究

以一整套中国春－帝国黑麦二体附加系为材料,通过在低磷胁迫下对其根系分泌Ａｃｐｈ 能力测定及同工酶等电聚焦分析证明：缺磷胁迫是Ａｃｐｈ基因表达的诱导因子,帝国黑麦不同染色体在中国春小麦背景中对其根系在低磷胁迫下 Ａｃｐｈ的分泌具不同的正效应,其中以 １Ｒ 染色体的效应最为强烈, Ａｃｐｈ等电聚焦（ＩＥＦ）的酶谱清楚地表明黑麦的１Ｒ染色体上携有在缺磷胁迫下诱导表达的Ａｃｐｈ基因。     

琼脂糖平板制备聚焦电泳法进一步提纯胸腺素组分五

用琼脂糖平板等电聚焦电泳法,由胸腺素组分五中分离出三种在聚焦电泳谱上是单一谱线的多肽成份——CP1、CP2和CP3,等电点分别为4.3、4.9和5.6。测定了这些多肽对脐带血中淋巴细胞形成羊红细胞玫瑰花的影响。与对照相比,CP1(2微克/0.6毫升),和CP3(0.2-2微克/毫升)分别在统计学上呈显著和非常显著差异。在相同测定条件下,这三种多肽成份的活性均高于化学合成的胸腺多肽——胸腺素α_1。     

中国汉族人群间-α-胰蛋白酶抑制因子(ITI)的遗传多态性

我们建立了测定间-α-胰蛋白酶抑制因子遗传表型的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦免疫固定技术,应用这种方法对居住在成都地区的汉族群体进行了群体研究和家系调查,结果表明中国汉族人群间-α-胰蛋白酶抑制因子具有遗传多态性,它有希望成为法医血液遗传学新的遗传标记。     

菠菜种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与部分性质研究

以菠菜种子为材料,经脱脂、酸性溶液抽提、热变性、硫酸铵分部沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物。再经离子交换、亲和层析和凝胶过滤,分离得到胰蛋白酶抑制剂SOTI,纯化倍数为57．22。SDS-PAGE测定其分子量约为22kD,等电聚焦测定其等电点为4．02。SOTI具有较高的热稳定性,在100℃处理后仍然具有一定的抑制活性。