影响人骨髓CFU-C产率某些因素的分析

在CFU-C(粒系或单核-巨噬细胞集落生成单位)体外琼脂培养中,只有在CSF(细胞集落生成刺激因子)的作用下粒系祖细胞才能增殖、分化,生长成为细胞集落。CSF来源广泛,其刺激活力文献报告不一。此外,CFU-C产率波动较大,影响因素甚多。本文在相同的实验条件下,比较了不同来源的CSF刺激活力,并对影响CFU-C产率的某些因素进行了分析。     

不同刺激因子对狗骨髓CFU-C的影响

集落刺激因子(CSF)是集落形成单位(CFU-C)体外培养中的一个必不可少的条件,对培养结果的好坏起着决定性的作用。在狗的骨髓细胞培养中,同种异体血清是目前普遍采用的一种CSF,但由于制备方法不同,其刺激活力可有显著差别。为了确定狗血清刺激活力的适宜条件,我们对几种不同的CSF进行了研究。     

森永乳业、绿十字公司6月申请制造来自尿的M-CSF的认可

森永乳业、绿十字公司上月明确向厚生省提出两公司共同开发的来自尿的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF,商品名为“P-100”)的制造承认申请。CSF作为干扰素的优胜后补者,正在进行临床开发。达到开发医药的最终阶段的制造承认。这在世界上还是第一次。估计今后商品化的粒状白细胞CSF、粒状巨噬细胞CSF、重组     

FDA批准了Leukine

四月份,根据一个咨询委员会所提的建议,美国食品和药物管理局(FDA)批准了Immunex Corp.(Seattle, WA)的重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)译本.GM—CSF能够治疗患有急性髓细胞性自血病(AML)的成年患者。AML是一种非常普通的且能致死的急性白血病。     

FDA给Amgen及Immunex的CSF开绿灯

美国食品与药物管理局(FDA)的生物学反应修饰剂顾问委员会在1990年12月13日的会议上建议批准两种不同的重组型集落刺激因子(CSF)进入市场.顾问委员会的提议虽不能保证正式批准,但FDA以往总是听从上述委员会的提议,因此,有理由期待明年伊始获得正式批准. 第一项是批准应用Amgen的重组型粒细胞CSF(G-CSF)来预防因使用非骨髓癌癌症冶疗药物而引起的感染.G-CSF可刺激产生嗜中性细胞.这是一种白细胞,机体用     

人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子在大肠 杆菌中的克隆与表达

利用基因重组技术构建人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子(bGM—CSF)的高效表达菌株E．Coli HB101／pZw．GM47,经酶切电泳、DNA测序、SDS—PAGE、Western印迹及生物活性测定等分析鉴定,证明能特异性表达有生物活性的14kDaGM—CSF,表达水平达40％以上,比活性高达5×10⁷u／mg．具有良好的开发应用前景。     

大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化

对重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—csF)高效表达克隆pzw．GM的表达产物进行了纯化,并对纯化的人GM—CSF进行了N端氨基酸序列分析。人GM—CSF基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换一系列纯化步骤,终产物纯度达99％,按蛋白总量计算回收率达10％,比活性达1×10⁷／mg蛋白质。通过测定纯化人GM—csF的N端l 6个氨基酸序列,与由其DNA序列推导的氮基酸序列完全一致,为大批量重组人GM—CSF的生产创造了条件。     

聚乙二醇定点修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体的研究

研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF150%以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)。然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐(mPEG-Mal)修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)。SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95%,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF,NeulastaR○),药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药效学研究

比较研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)升高环磷酰胺所致外周血白细胞降低的Blab/c小鼠的白细胞效果.结果显示一次注射聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与多次注射重组人粒细胞集落刺激因子的药效作用相当,且各剂量间呈良好的量效关系.     

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外扩增、鉴定及生物学特性研究

目的:对树突状细胞体外大量扩增及树突状细胞的临床应用提供理论基础.方法:以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白介素-4(rmIL-4)和重组小鼠肿瘤坏死因子-α(rm TNF-α)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞表面分子,并应用混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞的增殖能力.结果:经体外诱导培养第2天即可见大量细胞集落形成;培养至第9天,DC成熟,具有典型的形态,同时DC可以显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖.结论:体外诱导培养可以获得大量小鼠骨髓来源的DC,可广泛应用于临床实验及实验研究.     

FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响*

用脐血进行千细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限。因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Flt-3配体(FL)和干细胞因子(SCF)、白介索3(IL一3)、IL-6、粒细胞集落刺激因子(G-csF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)的组合对脐血细胞扩增和分化的影响。培养42d,总细胞最多扩增了385,30±163 51倍(FL+SCF+G．CSF+GM—CSF),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)在第28天达到最高,最高扩增了409．52±189．50倍(FL十SCF+IL-3+IL一6)。FL与SCF等细胞因子具有协同作用,对所有考察的细胞因子组合中,加入FL都使总细胞和CFUGM的扩增倍数增加。FL+SCF培养的总细胞扩增最小,而CFU-GM长时间保持在较高水平,表明这FL和SCF有利于保持造血干细胞的活性,防止细胞分化。在存在G-CSF和GMCSF的培养中,总细胞获得了最大的扩增,但CFU-GM达到最大后很快下降至O,表明G-CSF和GM—CSF促进了细胞的分化。结果提示,细胞因子组合对脐血造血细胞的扩增和分化具有重要的作用．FL和SCF可促进造血细胞的扩增,而G-CSF和GM—CSF等可导致细胞的过度分化。     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在烟草种子中的表达

TransgenicResearch 2 0 0 2年 1 0月 1 1卷 5期 5 2 1～ 5 31页报道 :种子不仅是高等植物延续生命的重要材料 ,也是人类食物、药品和工业原料的重要来源。近年来已将不同来源包括人类、细菌和病毒的可利用的基因序列表达于植物 ,也试图利用转基因种子蛋白来生产药物。已知人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)在调节白血细胞 (粒细胞和单核细胞 )的生成和功能中可发挥重要作用 ,在抗感染中具有重要的临床意义。还发现GM CSF在化疗、骨髓移植、抗癌和抗艾中也具有多种临床应用。因此 ,目前已有一些国家将重组GM CSF用于临床治疗…     

产黑色素类杆菌ATCC25845内毒素对小鼠集落刺激因子的诱生活性

产黑色素类杆菌(Bacteroides melaninogenicus)是口腔感染的主要致病菌,由该菌产生的内毒素在致病中具有重要作用。本文采用半固体琼脂培养基培养小鼠骨髓细胞.以形成的集落数作为集落刺激因子(CSF)的水平指标,研究了产黑色素类杆菌内毒察的CSF诱生活性。实验发现,在一定范围内,CSF水平随内毒索剂量增加而上升,但当内毒索剂量大于50μg时。CSF水平不再继续上升。产黑色素类杆菌内毒素的集落形成单位数(CFU-C)为66.6±8.5。     

成骨生长肽的合成及其与粒细胞集落刺激因子之间的协同作用

Fmoc法固相合成成骨生长肽 (sOGP) ,HPLC鉴定纯度大于 98.6 % ,质谱测定 ,分子量 15 2 3.5kD ,与理论分子量相符 ,N端全序列测定结果正确。Balb/c小鼠体内实验证实sOGP与临床使用的人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)之间有明显的协同作用。实验共分两部分 :第一 ,sOGP共给予 13天 ,每天 1次 ,其中在给予sOGP 5天后开始同时给予rhG CSF ;第二 ,同时给予sOGP和rhG CSF ,每天 1次 ,连续 10天 (sOGP ,0 .5nmol/鼠 ;rhG CSF ,2 μg/鼠 )。两组都显示 ,sOGP能显著地协同rhG CSF促进外周血白细胞数和淋巴细胞数增加 ,但对外周血红细胞和血小板数无影响。骨髓有核细胞记数、骨髓涂片、胸骨切片和脾脏切片显示 ,联合给予sOGP及rhG CSF并未造成髓系和淋巴系异常增生。因此 ,sOGP是一种可以增强目前临床上广泛使用的rhG CSF功能的新的因子 ,是一种极有开发前景的新药。     

低能量激光对造血细胞的增殖作用

激光能刺激造血细胞增殖,促使粒-巨噬细胞集落形成单位(GM—CFUc)增多。从人脐带血中分离制备的有核细胞,加入集落刺激因子(CSF)后,形成的GM—CFUc为18.6±12.6/10~4;如果加入的CSF是经激光照射后的细胞制成的,其GM—CFUc为40.5±20.2/10~4;若先用激光照射脐带血的有核细胞,在培养时加入的是未经激光处理细胞制成的CSF,也有增殖效应,GM—CFUc为36.5±18.5/10~4;如果脐带血有核细胞和制备CSF的细胞都用低能激光照射,就可以见到GM—CFUc明显地增多,其值为57.4±41.2/10~4是未经激光处理者的三倍。表明激光照射脐带血有核细胞及制备CSF的细胞均可使GM—CFUc增殖。     

造血因子受体酪氨酸激酶受体家族

在造血因子的研究初期,人们曾人为地将造血因子分为淋巴因子(IL)、集落刺激因子(CSF)等几类,但随后的工作证明这种分类方式并不能明确地表明各种因子的特性,因为因子的作用常常是广谱的和交叉的,这种同一因子对不同种类细胞产生不同反应的现象让人们开始关注与此有关的受体。DNA重组技术在此领域的应用使相关的工作不断深入。近几年在大多数的造血因子受体分子克隆成功的基础上,根据同源分析     

粒细胞集落刺激因子在临床中的应用

粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulatmg factor,G-CSF)是刺激骨髓细胞集落形成的一种造血因子,能特异性地刺激和调节粒细胞的增殖、分化、存活和活化。在临床上,G-CSF可作为各种中性粒细胞减少症以及其他相关疾病的治疗药物。天然人G-CSF(hG-CSF)来源非常有限,价格昂贵,不能满足临床应用的需要。随着生物技术的发展,在八十年代中期国外已获得了重组人G-CSF(rhg-CSF),国内随后也在大肠杆菌中表达了人G-CSF,从而可以大量生产相对廉价的rhG-CSF,以满足临床的需要。因此,G-CSF的临床应用越来越广泛。本文将从几方面介绍一     

用于粒-巨噬祖细胞培养的横纹肌条件培养液

造血粒-巨噬祖细胞(Granulocyte-macrophge progenitor,以在半固体培养基中细胞集落形成单位Colony forming unit,GM-CFU-C来表示)增殖分化时,需要细胞集落刺激因子(Colony stimulating factor,CSF)参与。虽有许多方法可以获得CSF,但有的方法较复杂,有的材料来源不易,有的活性不高。我们在研究药物作用原理过程中,观察到横纹肌组织可以产生CSF,经过进一步研     

生长因子促进了强剂量化学疗法在治疗某些癌症中的应用

最初设想的集落刺激因子(CSF)的各种用途,除了作为佐剂提高化学疗法的成功率以外,在临床试验中都得到了肯定.现在,越来越多的证据说明,至少有一种CSF,即粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),可促进高强度化学疗法,因而提高某些癌症患者的存活率.临床试验的结果尚未公布,但是强剂量疗法与GM-CSF处理相结合这一途径已在试点研究中得到了试验,结果很多患者的肿瘤完全消退而且不再复发.多机构随机研究即将开始并在2～3个月后公布.同时,新墨西哥大学癌症中心主任James Neidhart正在积极研究CSF的这种用途,他总结出如下结果.     

聚乙二醇定点修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体的研究

研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体（rmhG-CSF）的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF 150％以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体（rmhG-CSF）。然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐（mPEG-Mal）修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体（PEG-rmhG-CSF）。SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95％,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子（PEG-rhG-CSF,Neulasta^?）,药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍。