从猩猩肠道中分离的一株毛滴虫

1984年1月10日从上海动物园的猩猩(Ponge pygmaeus)粪便中检获一种鞭毛虫,即取其新鲜粪便接种于洛克液琼脂血清培养基中,共接种两管,每一培养管各加入青霉素2500单位,链霉素2.5mg;培养于35℃±0.5℃,三天后第一次移种时,培养管不加抗菌素,此后每周转种二次,至10月份连续培养80余代,该虫生长良好,说明这种鞭毛虫可适应于体外培养,所用的这种培养基也较合适。     

棕鞭藻对蛋白核小球藻的摄食及其营养策略

在研究稻草秸秆对蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)的化感作用时,偶然发现一株对蛋白核小球藻具有强烈的取食作用的鞭毛虫,能有效抑制小球藻的大量繁殖。经形态学观察,该种鞭毛虫具有2片淡黄色色素体,片状、周生;虫体呈球形、椭圆形或卵形,能变形,具2根不等长的鞭毛,从细胞顶部伸出;长鞭毛约为虫体的1.5倍,短鞭毛约为虫体的0.5倍;对蛋白核小球藻的吞噬能力极强,每个虫体可以吞噬3~4个小球藻,虫体大小因吞噬物的多少变化较大。初步确定这种鞭毛虫为棕鞭藻(Ochromonas sp.)。在SE、稻草以及麦粒3种培养基中的种群生长表明,这种棕鞭藻在麦粒培养基最易培养,生长速度最快。结果表明,这种棕鞭藻为混合营养类型,但以吞噬营养为主。     

在无血清培养基中生产单克隆抗体

<正>最近已经证明,一些细胞系在只需有激素和其它生长因子的无血清培养基中能够生长。Barnes和Sato(1979)曾指出,人类乳腺肿瘤细胞系(MCF-7)在补加有胰岛素,铁蛋白,表皮生长因子(EGF)前列腺素F2和冷不溶球蛋白(CIg)的培养基中能够生长。 我们认为,在无血清培养基中能够增殖和分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系,有助于这些单克隆抗体的纯制。本文介绍一种简单的限定的细胞生长系,在该系中血清     

一种淡水涡鞭毛虫人工培养成功

于1981年11月初,我们采到一种淡水涡鞭毛虫(甲藻)Glenodinium gymnodinium Penard,随即在实验室进行试探人工培养。所用的培养基为经改良的一个团藻培养基配方。我们采取过渡性的初步培养、纯化培养和扩大培养三步法,利用光强度800—1200勒克斯(Lux),每日照光10—12小时,一般室温在15—22℃(冬季不低于9℃,夏季不高于28℃)下,细胞已完全能正常的生长、繁殖而被培养成功。在对细胞的一些特征进行观察时,发现所培养的光薄甲藻是世界上较为罕见的含有两种不同类型的细胞核的涡鞭毛虫类生物。     

CHO工程细胞 (11G-S) 悬浮培养的无血清培养基的设计

以悬浮适应的表达重组尿激酶原 (Pro-urokinase,pro-UK) CHO工程细胞系11G-S为对象,采用Plackett-Burman实验设计及响应面分析法,设计支持CHO工程细胞 (11G-S) 悬浮生长的无血清培养基。以细胞密度为评价指标,在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman实验设计对影响细胞生长的培养基添加成分进行考察,确定了3种对细胞生长明显促进作用的培养基添加成分：胰岛素、转铁蛋白及腐胺。继而利用响应面法分析了这3种添加成分的最佳水平范围,设计了一种适用于CHO工程细胞 (11G-S) 悬浮培养的无血清培养基SFM-CHO-S。11G-S细胞在SFM-CHO-S批次悬浮培养的细胞最大生长密度达到4.12×106 cells/mL,pro-UK的最大累积活性达到5 614 IU/mL,培养效果优于商品化的同类无血清培养基。     

钝齿棒杆菌AS1542以油酸为生长促进因子变异株的选育

以谷氨酸生产菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1542,经紫外线照射得到一种以油酸为生长促进因子的变异株207。在生物素浓度为0—20微克/升的培养基中,油酸显著促进菌体的生长和产酸。     

动物细胞培养及单克隆抗体

923289限定培并基培并杂交瘤:替代血清及其它优点〔法〕/Bosehetti,E.…了Ann。Pharm。Fr一1901,遵9(4)。一198一205〔译自DBA,1992,11(5),92 02825〕 用3种杂交瘤细胞系ATCC HB4、ATCcHB72和ATCC HB8o检验有血清和无血清培养基培养细胞的功效。介绍了这3种细胞系的性成步骤。将市售的IMDM培养基(含7%胎牛血清)与Imoeell培养基(含抗生素)作比较。采用Faleon箱和细胞培养器,细胞密度为3000。个/ml。HB72和HB80在有血清培养基中生长更好,而HB4则在无血清培养基中生长更好。事实上,HB4的MAb生产变化不明显,而另外2细胞系还略…     

土壤原生动物对川滇高山栎恢复时间的响应及生长季动态

青藏高原东缘生态环境脆弱, 森林频繁遭到砍伐, 生物多样性受到严重威胁, 森林砍伐后的生态恢复成为研究热点。原生动物在生态恢复中作为指示生物起着重要作用。本文就未砍伐、砍伐后不同恢复时期(20年、10年和1年)生的川滇高山栎(Quercus aquifolioides)林的土壤理化性质和原生动物在生长季的变化进行比较研究, 以探讨生长季不同月份、不同恢复期的原生动物数量变化规律, 分析土壤理化性质与其相关性。结果表明: (1)恢复10年和1年的林地的鞭毛虫数量(193个/g干土, 164个/g干土)显著高于原始林地(22个/g干土), 肉足虫在恢复1年的林地中数量最多(600个/g干土), 纤毛虫数量则随次生演替进程逐渐增多。(2)在生长季不同月份原生动物的数量呈先增加后减少的趋势。鞭毛虫和肉足虫的峰值分别出现在7月和8月, 而纤毛虫的数量在7、8、9月明显高于6月。(3)原生动物数量与土壤理化性质密切相关。鞭毛虫数量与pH值呈显著正相关(P = 0.019), 纤毛虫数量与铵态氮(P = 0.002)和碳氮比呈显著正相关(P = 0.022), 肉足虫数量与硝态氮(P = 0.008)和碳氮比(P = 0.016)呈显著负相关。结果显示, 三种原生动物数量在生长季不同月份表现出较大的波动性, 其数量变化受土壤理化性质等多种因素调控。纤毛虫数量对川滇高山栎林砍伐恢复有正响应, 而鞭毛虫、肉足虫数量有负响应。     

一种具有两种不同细胞核的淡水涡鞭毛虫(淡水甲藻)的发现

我们于1981年11月,在昆明地区的水池中采集到一种具有两种不同性质的细胞核的淡水涡鞭毛虫,并且在实验室中首次长期培养成功。这种涡鞭毛虫经中国科学院武汉水生生物研究所魏印心及倪达书鉴定后,定为光薄甲藻(Glenodinium gymnodinium Penard)。 具有两种不同类型细胞核的涡鞭毛虫,在世界上是很为罕见的,国外发现的两个种 (叶状光甲藻Glenodinium foliaceum和波罗的海多甲藻Peridinium balticum)都为海产种,另外的两个种(蓝裸甲藻Gymnodinium     

CHO工程细胞株低血清培养的初探

以DMEM: F12(1: 1)为基础培养基,对CHO细胞的低血清培养进行了初步探索,降低培养基中血清含量,观察了细胞在10%、5%和1%等不同浓度低血清培养条件下生长状态和外源蛋白表达活性的变化.试验结果表明:在含1%血清的F12: DMEM(1: 1)培养基中,细胞仍能保持良好的生长状态,且培养上清中的目的蛋白活性与常规血清浓度10% DMEM培养条件下的活性接近.从而达到了既可以降低生产成本,又可以降低纯化难度的目的.     

无血清生长的化学转化细胞产生并应答转化生长因子

BA10-IR细胞系是7-甲基苯蒽[7-MethylBenz(a)Anthracene(7-MBA)]转化的叙利亚地鼠胚成纤维细胞。该细胞克隆化后分离出一株在无血清无外源分裂因子培养基中生长的亚系——BA10—IR S~-/M~-。BA10-IR S~-/M~-细胞在无血清无外源分裂因子培养基中产生转化生长因子(TGFs),并刺激指示细胞在半固体培养基中着壁不依赖生长。同样BA10—IR S~-/M~-细胞所释放的TGFs能加强BA10-IR S~-/M~-本身无血清着壁不依赖生长能力。这可能正是BA10-IR S~-/M~-细胞能在无血清条件下长期生长的原因。自身分泌TGFs,又刺激自身生长,形成了一个自发生长调节系统。     

培养基血清浓度对人表皮干细胞增殖分化的影响

目的:比较不同血清浓度培养体系对表皮干细胞增殖分化的影响.方法:采用两步酶消化法和IV型胶原差速贴壁相结合的方法获得人原代表皮干细胞,分别以0%、5%、10%、15%和20%血清浓度的培养基在96孔板中进行培养.观察表皮干细胞形态,克隆形成及增殖的情况,应用四甲基偶氯唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞存活和生长情况,分析量效和时效关系;持续传代培养细胞,每次传代的同时取适量细胞,用免疫细胞化学的方法进行表皮干细胞和表皮细胞相应标志物(K19、K14和K10)的测定.结果:表皮干细胞在各种血清浓度的培养基内均能形成克隆,增殖良好.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定,所得相同时间点各组OD值在统计学上没有差异(P>0.05),表皮干细胞生长速度各组间无差异.第1代表皮干细胞K19均有表达,而K14和K10表达均为阴性;其后高血清浓度(15%、20%)培养基中细胞较低血清浓度(0%、5%)先出现K14、K10蛋白的表达;培养至第10代是各组细胞均出现K10高表达,而K19、K14表达阴性.结论:在低血清浓度(0%、5%)的培养基中表皮干细胞生长良好,且能够相对较好保持表皮干细胞的特性.     

青藏高原东麓高山豆［Tibetia himalaica(Baker)H.P.Tsui］根瘤菌的遗传多样性

【目的】分离纯化青藏高原东麓(四川甘孜藏族自治州)高山豆根瘤菌,揭示其遗传多样性。【方法】采用纯培养法从该地区高山豆植物根瘤中分离纯化根瘤菌;通过BOXAIR、16S rDNA-RFLP及PCA(PrincipalComponent Analysis)来分析高山豆根瘤菌的遗传多样性;通过16S rDNA序列同源性确定菌株的系统发育地位;通过测定菌株的耐盐性、初始pH生长范围及生长温度范围来分析高山豆根瘤菌的抗逆性。【结果】从8个县12个采样点共分离纯化出22个菌株。22个菌株在16S rDNA PCR-RFLP分析中聚成4个遗传群,在BOX-PCR分析中则聚成9个遗传群。高山豆根瘤菌16S rDNASimpson遗传多样性指数D=0.872。22个菌株分别属于Rhizobium(11/22株)、Mesorhizobium(4/22株)、Rhizobium-Agrobacterium(7/22株)3个属。生理性状测定试验表明,所有菌株均能在1%NaCl的YMA培养基上生长,大多数(15/22株)菌株能在4%NaCl的YMA培养基上生长,其中,SCAU679、SCAU694、SCAU706等3个菌株能在7%NaCl的培养基上生长,SCAU689能在8%NaCl的培养基上生长;15/22的菌株能在pH4-11的培养基上生长;16/22的菌株能在4-45℃条件下生长,所有菌株能在60℃(处理10 min后置28℃)条件下生长。【结论】青藏高原东麓(四川甘孜州)高山豆根瘤菌具有丰富的遗传多样性。大多数菌株对高盐、高温、低温及过酸过碱环境均具有很强的耐受能力。     

CHO细胞法检测百日咳毒素毒性的影响因素

目的考察不同培养基、不同牛血清、血清灭活与否及生产过程中添加的各外源物质对百日咳毒素(pertussis toxin, PT)在中华仓鼠卵巢细胞(chinese hamster ovary cell, CHO)簇集试验中的影响。方法分别使用3种培养基F-12K、DMEM/F12和1640培养CHO细胞,并进行CHO细胞簇集试验,观察细胞生长状态及PT引起细胞簇集的敏感性;分别选取2个厂家的牛血清(对2种血清进行灭活和不灭活处理)培养CHO细胞,观察4种牛血清对细胞生长及簇集的影响;选用生产过程中添加的物质进行CHO细胞簇集试验,观察细胞生长状态及是否出现簇集,确定不影响细胞生长的最高浓度,同时使用不影响细胞生长的各添加物质最高浓度进行小鼠组胺致敏试验,观察与CHO细胞簇集试验结果是否一致。结果 3种培养基对CHO细胞生长及CHO细胞簇集存在明显差异,F-12K培养基培养的细胞形态规则、典型,其他2种培养基培养的细胞生长缓慢,且对PT的敏感性均低于F-12K培养基;4种牛血清中胎牛血清培养的细胞生长最快且形态规则,簇集试验敏感性优于其他3组血清;添加的各外源物质均会导致细胞生长缓慢或死亡,在稀释至一定浓度后可以排除添加物质对CHO细胞簇集试验的影响,同时在小鼠组胺致敏试验中不会引起动物死亡。结论 F-12K培养基最适宜实验室CHO细胞生长,不同血清对细胞生长和簇集的敏感度有一定差异,添加的外源物质残留量应进行控制以保证试验结果的稳定可靠。     

重组人成骨生长肽的表达、纯化和活性的研究

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide ,rhOGP) .体外实验证明 :rhOGP对成纤维细胞 (NIH3T3)的增殖有促进作用 .体内实验证明 :rhOGP加速兔移植骨成活 ,使血清中碱性磷酸酶活性增高 ,骨钙素增高 .重组人成骨生长肽促进成骨 ,有可能成为治疗骨移植及骨折愈合的有效药物     

自生固氮菌第二固氮酶的研究——Ⅰ.菌种的分离和鉴定

从四川攀枝花钒铁矿周围的土壤中分离出一株具有较高乙炔还原活性的固氮菌,经鉴定为棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii),在Asby's培养基上生长时产生黄绿色荧光、还原乙炔。当培养基中加入1μM NaVO_3时,生长旺盛,产生深绿色荧光,具有乙炔还原活性。实验表明,该菌株含有第二固氮酶。     

自病人气管灌洗物中分离出一株嗜肺性军团杆菌

本文报道了用自制的蓝藻军团杆菌选择性培养基从病人气管灌洗物中分离到一株嗜肺性军团杆菌(Legionella pneumophila)并与BCYE及硝酸铁琼脂平板等培养基作了比较,发现该菌在蓝藻军团杆菌选择性培养基上生长最好。生化、动物试验;细菌学、血清学的鉴定和诊断及临床治疗效果观察均与军团病杆菌(LDB)的鉴定标准相符合,证明经分离得的是一株嗜肺性军团杆菌血清6型菌株。     

人胸腺上皮细胞培养及其分泌产物

本文通过降低培养基中血清含量,向RPMI 1640培养基中补加三碘甲腺原氨酸而获得一种人胸腺网状上皮细胞占优势生长的培养物。在此培养基中细胞经传代培养长达90天,仍维持正常形态特征。胸腺组织在培养14天后,新生细胞的突起形成网状结构,细胞化学检查和电镜观察表明具有丰富的分泌颗粒,囊泡及张力原纤维束和桥粒等上皮细胞特征。收集合并细胞培养液,经部分纯化后检查其生物活性,表现出具有促进玫瑰花结形成和降低胸腺细胞TdT活性的作用,说明培养细胞的分泌产物具有胸腺激素活性。根据形态学,细胞化学和生物活性检测结果,我们倾向于认为该培养物主要为网状上皮细胞。     

中华羊茅内生真菌Neotyphodium sp.生物学与生理学特性的研究

本文对中华羊茅Festuca sinensis内生真菌Neotyphodium sp.的生物学与生理学特性进行了报道。研究发现:中华羊茅内生真菌能在10-30℃生长,5℃和35℃几乎不能生长,最适生长温度是25℃;适宜的pH是7-9;不同的碳、氮源利用能力不同,利用能力最好的分别是甘露醇和酵母浸液;在不同培养基上的生长速度与产孢特性存在差异,马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上生长最快,水琼脂(WA)和海水营养琼脂(SNA)培养基上生长最慢,但WA和SNA产孢最多。     

绞股蓝组织培养的研究

绞股蓝外植体在不同激素浓度的MS培养基上培养,经过正交试验选择了四种最适培养基配方。形态观察和同工酶测定结果表明,在MS基本培养基中添加NAA(1.0～2.0mg/L)可促进愈伤组织和根的生长;添加6-BA(2.0mg/L)也能诱导愈伤组织,并能分化丛生芽;而在6-BA(1.0mg/L)中加入低浓度的NAA(0.1mg/L)和2,4-D(0.1mg/L),对诱导愈伤组织和丛生芽的分化有增效作用。经染色体观察和试管苗大田试种,未发现遗传性变异。