抗人表皮生长因子受体单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

 用人上皮癌细胞系A 431细胞作为抗原免疫BalB/c小鼠,制备七株抗人表皮生长因子受体的单克隆抗体的杂交瘤,这些杂交瘤经三次亚克隆后仍能稳定地分泌单克隆抗体。对其中四株杂交瘤分泌的单克隆抗体进行了鉴定。免疫沉淀放射自显影结果示单克隆抗体3、101和176均可识别A 431细胞膜抗原MW为170000的蛋白质即EGF受体。单克隆抗体59可以识别低分化鼻咽癌细胞膜上EGF受体。单抗3、176和59等可抑制EGF与受体的特异结合,而101和94则不能抑制EGF与受体的结合。 用Protein-A Sepharose CL4B纯化了单抗,纯化的单抗主要为IgG_1亚类。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化的单抗进行了纯度测定。     

抗重组人表皮生长因子单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

建立能稳定分泌特异性抗重组人表皮生长因子(rhEGF)单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,制备出高效价的 ,具有生物学活性的抗重组人表皮生长因子单克隆抗体 ,为EGF及其单克隆抗体在肿瘤生长调节中的作用研究 ,为肿瘤的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。此外 ,为EGF的亲和层析纯化提供材料。以BALB/c小鼠脾细胞为饲养细胞 ,运用细胞杂交瘤技术制备 ,间接ELISA法筛选出能稳定分泌针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株 ;对杂交瘤细胞进行染色体核型分析并以体内诱生法产生腹水以获得大量单克隆抗体 ,并采用HiTrapProteinAHP柱对其纯化…     

表皮生长因子受体

表皮生长因子受体（EGFR）是一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面受体,其胞内区的3个亚区是其发挥酪氨酸激酶活性、介导信号转导的关键部位。表皮生长因子受体和其他的erbB受体可形成同源和异源的多种二聚体,不同的二聚体与表皮生长因子受体的6种配体形成的不同组合可将不同的细胞外刺激传入胞内。表皮生长因子可激活多种下游信号路径,产生多种生物学效应,ras-raf-MEK-erk/MAPK途径与增殖的激活有关,PI3K－PKC－IKK途径与细胞移动性的增强有关。表皮生长因子受体与肿瘤的发生发展和器官的修复有密切的关系,针对表皮生长因子受体的肿瘤治疗和器官修复具有良好的应用前景。     

表皮生长因子及受体在甲状腺肿瘤中的表达

目的:研究表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)及受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)及在甲状腺肿瘤中的表达。方法:应用免疫组织化学法检测91例甲状腺病变组织中EGFR和EGF的表达情况。结果:结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤、分化型甲状腺癌标本中EGFR表达的阳性率分别为15%、25%、68.62%,EGF表达的阳性率分别为10%、15%、68.62%,其中EGFR、EGF在分化型甲状腺癌与其余两组间差异均有统计学意义(P<0.05)。EGFR和EGF在甲状腺乳头状癌中的表达与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期等临床因素无明显相关。结论:EGF和EGFR的表达可作为鉴别甲状腺肿瘤良恶性的一个指标。     

小鼠抗人胰岛素受体单克隆抗体的制备、纯化及鉴定

 M11D杂交瘤细胞株是由人胎盘细胞膜纯化所得胰岛素受体免疫BALB/C小鼠后,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞株NS-1细胞融合所得。该杂交瘤细胞分泌的抗体经ELISA及放射免疫沉淀法证实为胰岛素受体特异的单克隆抗体。该抗体经Protein A-Sepharose亲和层析分离、纯化,SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳鉴定得分子量分别为53000及23000的两条区带,免疫双扩证明为IgGl。该抗体特异地沉淀125Ⅰ-人胎盘细胞膜胰岛素受体,沉淀经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后放射自显影得分子量为135000的特异显影带,与胰岛素受体α亚基分子量相同,说明M11D为抗胰岛素受体α亚基的单克隆抗体。     

表皮生长因子受体及其变异性质

EGFR主要由三个结构区域组成,即EGF结合区域、跨膜区域和依赖EGF蛋白激酶区域。EGFR被激活后,不仅能使许多底物蛋白磷酸化,自身也发生磷酸化,这些磷酸化作用在信息传导中有重要作用。EGFR与EGF结合后,其复合体以胞饮方式内容形成受体小体,除部分被降解外,大部分在高尔基GERL区加工后到达细胞核调节基因表达。本文通过对受体激活模型和用体外遗传变异方法对变异EGFR的研究阐述了EGFR的结构与功能的关系。     

阿霉素肾病大鼠表皮生长因子及其受体的表达

目的研究阿霉素肾病大鼠肾组织中表皮生长因子(EGF)及其受体EGFR的表达分布以及表达量与尿蛋白之间关系。方法选择第5天、14天、28天作为动态观察的时点,同期设立正常对照。采用荧光定量RT-PCR、免疫组织化学及计算机图像定量分析EGF mRNA以及EGF、EGFR蛋白在肾组织的表达,同时测定24 h尿蛋白定量。WT1和EGFR双重免疫组化确定EGFR在肾小球内确切细胞定位。结果阿霉素注射后第5天,EGFmRNA即较正常增高,28 d明显增高并高于5 d和14 d。正常对照组EGF阳性细胞主要分布于远曲小管和髓袢,阿霉素组EGF还在集合管和近曲小管上表达;EGF阳性表达范围和强度随尿蛋白增加而增加;EGFmRNA表达量以及EGF在肾小管中的表达强度与24 h尿蛋白量呈正相关。肾小管上皮细胞广泛表达EGFR,阿霉素组EGFR在小管表达均高于正常,但组间各时点差异无显著性;随尿蛋白增加EGFR在肾小球内表达逐渐增多。EGFR在肾小球和肾小管中的表达强度均与24 h尿蛋白量呈正相关。WT1和EGFR双重免疫组化显示阿霉素肾病组EGFR可在足突细胞上表达,正常组则无。结论阿霉素肾病大鼠的肾小球脏层上皮有EGFR的表达。EGF/EGFR可能参与了阿霉素肾病的发病过程以及蛋白尿的形成。     

恶性转化的成纤维细胞表皮生长因子受体的研究

本文用受体的放射性配基结合分析方法观察了C_3H小鼠胚胎成纤维细胞C_3H_(10)T1/2 CL8(简称NC_3H_(10))和~3H-TdR恶性转化的C_3H_(10)T1/2CL8(简称TC_3H_(10))的表皮生长因子受体(EGFR)。结果表明细胞恶性转化前后的EGFR都存在高亲和力和低亲和力两种结合位点,细胞恶性转化后能结合表皮生长因子的EGFR结合位点减少,Western blotting和受体的亲和交联分析表明EGFR的分子量为170kD,是单链多肽。     

表皮生长因子受体的分离与纯化

建立了一种从胎盘合胞体滋养层微绒毛膜蛋白中简单迅速两步纯化 EGFR 蛋 白的方法.用 Triton X-100 抽提微绒毛膜蛋白,使之两次通过 FPLC(Fast Pro-tein Liquid Chromatography)系统的 Superose 6 色谱柱纯化.SDS 胶电泳后,得到单一的 170000分子量 EGFR 蛋白带.纯化后的受体在 EGF,MnCl₂ 和 (γ-³²P)ATP 条件下,仍然保留胞内所具有的对 EGF 敏感的使受体自身磷酸化的蛋白激酶活性.     

表皮生长因子受体EGFR及其信号传导

表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)是ErbB家族成员之一,具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体。EGFR被配体激活后启动胞内信号传导,经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应,调节转录因子激活基因的转录,指导细胞迁移、黏附、增殖、分化、凋亡,且与肿瘤的形成和恶化密切相关。本文对EGFR的结构特性、几种重要的信号通路及各个信号通路之间的交联,以及信号的衰减等方面的研究进展进行了综述。     

表皮生长因子受体与他莫西芬耐药机制

雌激素受体及其信号通路在乳腺癌的发生发展中发挥着关键作用。到目前为止,抑制或阻断雌激素信号通路的内分泌治疗尤其是他莫西芬,仍是对雌激素受体阳性乳腺癌患者最有效的治疗手段之一。然而,他莫西芬的耐药问题直接影响了乳腺癌患者的治疗及预后。最近多项研究表明雌激素受体与表皮生长因子受体家族尤其是HER2介导的信号传导通路在多个点上相互交叉,彼此影响,与他莫西芬的耐药密切相关     

人表皮生长因子受体在大肠杆菌菌膜上功能性表达

为将人表皮生长因子(EGF)受体膜外第Ⅲ功能区(hEGF-RⅢ)表达于大肠杆菌菌膜上,重组构建了EGF-RⅢ表达载体,并转化获得大肠杆菌表达株.放射性受体分析发现¹²⁵I-EGF可与表达菌特异性结合,其特异性结合量随反应的时间和温度而变化,Scatchard分析显示表达菌表达单一亲和性受体,其解离常数为3.0×10^-11 mol/L,每个细菌约有738个结合位点.免疫电镜显示EGF-RⅢ多分布于细菌菌膜上.     

抗人Leptin单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

本研究用本室制备的重组人Leptin为抗原,以鼠伤寒沙门氏裸菌为佐剂,通过脾内、腹腔、静脉三种途径相结合免疫BALB/c鼠,以PEG为促融剂,将免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞进行融合,HAT、HT选择性培养基、间接ELISA筛选阳性克隆,有限稀释法进行4次克隆化,获得三株能稳定分泌抗人Leptin单抗的杂交瘤细胞株。对所获得的细胞株及其分泌的单抗特性进行较系统的鉴定显示,获得的单抗特异性高,亲和力强,免疫球蛋白亚类均为IgG3。初步应用的研究显示,获得的单抗不仅可用于体外Leptin的免疫印迹检测,而且可通过免疫组化、免疫荧光等技术用于脂肪组织中Leptin的检测,为Leptin的基础和临床研究奠定了基础。     

人肝癌细胞表皮生长因子受体以及佛波酯对它的调度

Using radioligand binding assay, the presence of epidermal growth factor (EGF) receptors in cells of two human liver cancer cell lines, BEL-7402 and SMMC-7721, was demonstrated. The ligand binding data were analyzed by a computer program. The dissociation constants (KD) of the ligand-receptor binding complex at equilibrium for 7402 and 7721 cells were 1.2 nM and 0.8 nM respectively, and their number of EGF receptors per cell were 6.2 x 10(4) and 2.5 x 10(4) respectively. After the treatment of cells with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), no change either in the affinity or in the number of EGF receptors was found in 7721 cells. However, in the case of 7402 cells, while the number of receptors, like 7721 cells, remained unchanged, the affinity of EGF receptors displayed a time dependent modulation after PMA treatment. It dropped within the first hour to a KD value of 3.0 nM and then gradually returned to the normal control value at 48 hours or even slightly higher than normal (0.95 nM) at 96 hours of treatment. The modulation or down-regulation of EGF receptors by PMA in 7402 cells was paralleled by the simultaneous inhibition of DNA synthesis in these cells as evidenced from their reduction of 3H-TdR uptake. It is not clear what is the basis for the differences found between 7402 cells and 7721 cells in their number of EGF receptors per cell and their responsiveness to PMA treatment. It might be related to their difference in autocrine secretion of alpha-transforming growth factors.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

表皮生长因子受体在正常大鼠眼组织中的表达

采用免疫组织化学方法观察了表皮生长因子受体在正常大鼠眼组织的表达。结果发现：角膜上皮的深层细胞和角膜缘上皮细胞、部分结膜上皮细胞和结膜下结缔组织内成纤维细胞均强烈表达表皮生长因子受体。结果显示：表皮生长因子受体阳性细胞主要分布于眼表层组织。这些细胞不仅是眼组织损伤后修复、而且是多种手术能否成功和某些疾病形成中起重要作用的细胞