猪血纤维蛋白溶酶原的纯化及性质研究

 用偶联有L-赖氨酸的Sepharose 4B亲和柱对猪血纤维蛋白溶酶原进行分离纯化,所得酶原在酸性及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质区带,在碱性条件下电泳及等电聚焦电泳表现出较明显的不均一性。还原及非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得酶原分子量为88kD,经尿激酶激活后,进行还原SDS-凝胶电泳,出现两条新的蛋白质区带,分子量分别为63kD和26kD。酶原含中性糖1.35％,N-末端为异亮氨酸。尿激酶激活后产生的血纤维蛋白溶酶以对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯为底物,测得Km为4.2m mol/L,V_(max)为13.5 IU。6-氨基已酸对酶活性有双重影响。此外,还观察了胰蛋白酶对猪血纤维蛋白溶酶原的激活。     

组织型纤溶酶原活化物的纯化及性质研究

新鲜猪心组织制成丙酮粉后,用0.45mol/L,pH4.2醋酸钾抽提组织型纤溶酶原活化物(t-PA)。抽提液经硫酸铵盐析,Benzamidine和血纤维蛋白亲和层析,Sephadex G-150凝胶过滤,纯化得到t-PA。比活11000IU/mg,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,分子量为67000。 本文比较了t-PA、高分子量尿激酶(H-UK)和低分子量尿激酶(L-UK)的热稳定性及抑制剂对它们的抑制作用。结果表明,抑制剂对H-UK的抑制作用最强,L-UK次之,t-PA最弱;三者的热稳定性相似。     

蚯蚓纤溶酶原激活剂的分离纯化及其性质

为了从赤子爱胜蚓中获得主要表现为纤溶酶原激活活性的蛋白酶,采用盐析、离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水吸附层析从蚯蚓组织匀浆中纯化出6种具有纤溶活性的酶组分(F1、F2、F3、F4、F5和F6).它们均为单一多肽链;表观分子量分别为28500、29500、26100、26300、14850和32800;经非还原型SDSPAGE和扫描仪扫描,纯度分别为100%、95.2%、96.5%、93.6%、98%和97.8%;等电点(pI)均不高于3;SDSPAGE后,用Schiff试剂染色显示F5为糖蛋白;纯化的6种酶于20℃～50℃保温1h,酶活力基本不变;F1和F2、F3和F4、F5和F6分别在pH4～10、4～11、7～12范围内稳定;水解BAEE试验及纤溶活性抑制试验表明,F6既是丝氨酸蛋白酶,又是含金属离子的蛋白酶,其它5种酶为胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶;免疫双扩散试验结果初步表明,F1和F5以及它们和其它4种组分之间无共同的抗原决定簇;用纤维蛋白平板法及以ChromozymU和ChromozymPL为底物测定,除F1外,其余5种酶的纤溶酶原激活活性明显强于其直接纤溶活性.     

重组组织型纤溶酶原激活剂大规模纯化及部分性质的研究

收集产重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ－ＰＡ）的ＣＨＯ工程细胞灌流培养上清,经过Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ扩张柱床和赖氨酸－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和吸附色谱纯化后,最后产品的比性达到６０００００ＩＵ／ｍｇ蛋白,ｒｔ－ＰＡ总活性回收率在９８％左右,经还原ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析主要为高相对分了质量ｒｔ－ＰＡ蛋白,ＨＰＬＣ分析达到色谱纯,Ｎ端１５个氨基酸序列和ｐＩ与献报道的一致。蛋白质印迹实验证实具有ｔ－Ｐ     

血纤维蛋白溶酶原激活剂的研究进展

血纤维蛋白溶酶原激活剂(Plasminogen Activator,简称PA)由于与许多基本的细胞生理现象有关,如细胞分裂、细胞伸展、肿瘤浸润和转移灶的生长等,因而引起了人们的注意。近年来对它的研究日益增多和深入。本文就有关PA的一些性质、检测方法以及在细胞生理及病理过程中某些有关功能作一简述。     

Genentech公司的血纤维蛋白溶酶原激活剂

组织血纤维蛋白溶酶原激活剂（Tissue Plasminogcn Aetivator,TPA）是一类纤维蛋白溶解酶,作为药物主要治疗血栓、血管梗塞一类的病。 各种血栓症是造成死亡的一大原因,据西方报导,要占到西半球死亡人数的半数以上。因之,寻找分解血栓块的药物制剂,一直是医药工业的一大课题。     

烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究 Ⅰ分离纯化及理化性质(英文)

通过DEAE-SephadexA-50,DEAE-SepharoseCL-6B,MonoQ （FPLC）三步离子交换柱层析,纯化得到一新的纤维蛋白原溶酶,在碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上均呈单一的蛋白带。分子量为2600,等电点pl4.7;它是一个糖蛋白,含糖量6.4%,其中中性糖0.3%,已糖胺4.9%,唾液酸1.2%。烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg由187个氨基酸组成,含有较高的酸性氨基酸,此外甘氨酸含量也较高。TMVFg热稳定性强,而酸不稳定,在280 nm处具有典型的蛋白吸收峰,在无离子水中紫外消光系数E0.1%/280 nm=1.558。纯化的TMVFg具有较强的精氨酸酯酶活力,对苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）的Km值为1.4×10[-3]M。TMVFg的活性受苯甲基丹磺酰氟（PMSF）抑制;乙二胺四乙酸（EDTA）对活性无影响。TMVFg不能使纤维蛋白原凝固,但能水解纤维蛋白原α、β链。纤溶实验表明TMVFg具有激活纤溶作用。纯化的烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶对酪蛋白无作用,无出血活性,因而与凝血酶样酶、出血毒素及β-纤维蛋白原溶酶（OUYANG et al.,1977）明显不同。     

卵巢血纤维蛋白溶酶原激活物受激素调控

卵巢有多种来源的血纤维蛋白溶酶原激活物(PA)。1985年作者发现颗粒细胞和卵泡膜细胞产生不同类型的 PA。刺激颗粒细胞主要产生组织型 PA(t-PA),卵泡膜细胞主要分泌尿激酶型 PA(u-PA)。颗粒细胞的制备和培养按 Crisp 和 Denys(1975)的修改法;实验给大鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后,48小时杀死;分离收集卵泡或卵丘-卵母细胞复合物,以 DME 配方新配的培养基液洗涤。卵细胞的细     

纤维蛋白溶酶原相关生长因子家族的结构与功能

ＨＧＦ作为对肝细胞具有刺激作用的因子,已为人广泛认识。近几年有关ＨＧＦ结构－功能相互关系方面的研究结果以及与其组成,结构均相似的ＭＳＰ的发生,将视线引向与此相关的一类蛋白－纤溶酶原相关生长因子家族。ＭＳＰ的出现以及ＭＳＰ和ＨＧＦ结构与功能的特性,使得人们不再单纯地研究某一因子／蛋白的结构和功能,而更关注结构与功能间的相互关系、结构作为进化结果的意义,更重要的是在此基础上实现对相关因子／蛋白的功能预     

地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究

通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-纤维素柱和SephadexG-75柱层析从雌地鳖(Eupolyphagesinensiswalker)体内分离纯化到一种相对分子质量约为41.3kD的纤溶活性蛋白,纤维蛋白平板测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带,含糖量为10.5%。其水解纤维蛋白的比活力为547.86u/mg。该成分受蛋白抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF的抑制,但EDTA对其影响不大,提示该成分属于丝氨酸蛋白酶类。该成分在40℃下基本稳定,最适温度40℃,最适pH为8.0,其激活纤维蛋白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。     

组织型纤溶酶原激活剂的纯化制备

简述了用于大规模生产组织型纤溶酶原激活剂(tPA)的重组动物细胞及其培养工艺。从重组tPA的大规模、快速纯化的角度考虑,对tPA的纯化制备方法进行了简要评述。     

人血纤维蛋白溶酶原K5环的基因合成、表达、纯化与活性鉴定

 根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,人工合成人血纤维蛋白溶酶原 K5全基因 ,并在原核系统中以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现了高效表达 .重组蛋白通过 Ni2 +金属螯合层析得到初步纯化 ,通过肠激酶切割去除了融合标签 .应用鸡胚尿囊膜实验检测切割后的 rh K5的生物学活性 ,发现与对照组相比 ,rh K5能明显地降低血管管径、血管总面积以及血管总面积与视野面积的比值 ,表明切割后的产物具有显著抑制新生血管生成的生物学活性 .为进一步研究和开发抗血管生成药物奠定了基础 .     

用超滤法从猪血中分离纯化猪血红蛋白

为了给人工红细胞的研究提供较高纯度和浓度的血红蛋白,采用超滤膜分离的方法,通过研究分析,在一定超滤条件,从新鲜猪血中分离纯化得到猪血红蛋白。并应用SDS-PAGE凝胶电泳、紫外-可见分光光度计对纯化后的血红蛋白进行了鉴定分析。经分析,优化的超滤条件为:操作压力0.05Mpa、料液温度12℃;在此条件下分离纯化的猪血红蛋白,纯度达到了99%以上,浓度较纯化前提高了近20倍。     

正常细胞和肿瘤细胞纤维蛋白溶酶原激活物活性的比较

PA是一类蛋白水解酶,它可以把血液中的纤维蛋白溶酶原(PGN)激活成纤维蛋白溶酶(PN)。PN也是一种蛋白水解酶,它可以把纤维蛋白凝块水解成可溶性的产物,它对由赖氨酸或精氨酸的羧基形成的肽键有专一性。正常细胞用化学致癌物。肿瘤病毒等转化之后,纤维蛋白溶酶原激活物(PA)的活性可以提高几十倍,甚至上百倍。 Philip,L.Carl等根据肿瘤细胞PA活性较高这一特点,正在研制一种选择性杀伤肿瘤细胞的新型抗癌药。即把具有一般杀伤作用但     

纤维蛋白对尿激酶原激活纤溶酶原反应动力学的影响

反应体系中存在的纤维蛋白（fibrin）对尿激酶（UK）、scu-PA以及组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）激活纤溶酶原（plasminogen）的反应有不同的作用：UK、t-PA激活plasminogen的反应可被反应体系中存在的fibrin所加强;fibrin对scu-PA激活plasminogen反应的动力学常数无明显影响;但对小分子质量scu-PA与单链抗体的嵌合分子激活plasminogen的反应起明显的抑制作用.为确定反应体系中存在的fibrin对scu-PA的K区插入突变体-InB激活plasminogen反应的影响,测定了在反应体系中存在fibrin的情况下的InB激活plasminogen反应的K_m^fibrin以及k_cat^fibrin.K_m^fibrin＝4.2 μmol·L^-1,远远大于无fibrin时的K_m＝0.379 μmol·L^-1,说明有fibrin存在时突变体InB与天然底物plasminogen的亲和性降低了.k_cat^fibrin＝0.107 s^-1,也远远大于无fibrin时k_cat＝0.0165 s^-1,说明有fibrin存在时突变体InB对plasminogen的反应活性增强了.原因可能是：与fibrin结合的plasminogen的构象发生了有利于被纤溶酶原激活剂水解的变化.     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质邢宝东殷慎敏茹炳根（北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京１００８７１）关键词蚯蚓;纤溶酶;纤维蛋白收搞日期：１９９７－０１－２１;接收日期：１９９７－０３－２７。蚯蚓作为中药已有悠久历史,许多中医都把它作为活血药...     

猪肾胆绿素还原酶的分离纯化及部分性质的研究

猪肾胆绿素还原酶的分离纯化及部分性质的研究张楚富,吴志平,朱汝（武汉大学生命科学学院４３００７２）关键词猪肾胆绿素还原酶,红色三嗪染料－琼脂糖凝胶４Ｂ层析,米氏常数在哺乳动物中,胆绿素还原酶（ＥＯ１．３．１．２４）广泛存在于肝、脾、肾、肌肉和脑等组织...