性激素对大鼠诱发肝癌中胎盘型谷胱甘肽S—转移酶（GST—P）表达的影响

Using Solt-Farber method for the induction of rat hepatocarcinoma, the changes of the activity of glutathione S-transferase (GST) and the content of placenta form GST (GST-P) were studied during hepatocarcinogenesis, then the effects of sex hormones on the hepatic expression of GST-P were observed using immunohistochemical method. The results showed that both GST activity and GST-P content began to increase at the 3rd week, and reached the highest level at the 5th week (Table 1). Therefore, the 5th week was selected for the study of GST-P expression in the livers of rats treated with different protocol (Fig. 1). It was found that GST-P was highly expressed in the livers of sham-castrated male rats after chemically induced hepatocarcinoma (PLATE I, Fig. 1A, Table 2). When estradiol was administrated to these rats, both the number and area of GST-P positive(+) foci decreased significantly (PLATE I, Fig. 1B, Table 2). While testosterone was administrated instead of estradiol, the decrease of the area but slight increase of the number of GST-P positive foci were found (PLATE I, Fig. 1C, Table 2). After orchiectomy, the areas of GST-P (+) foci in carcinogen treated liver of male rats were smaller than those in rats with sham-orchiectomy and same carcinogen treatment (PLATE I, Fig. 2A, B, Table 3). When the orchiectomized male rats were administrated with estradiol, the areas of GST-P (+) foci decreased further (PLATE I, Fig. 2C, Table 3). In contrast, after ovariectomy of the female rats, the areas of GST-P (+) foci in carcinogen treated livers were slightly increased as compared with those in the rats with sham-ovariectomy and same carcinogen treatment (PLATE I, Fig. 2D, E, Table 3). While the ovariectomized female rats were administrated with testosterone, the areas of GST-P (+) foci increased further (PLATE I, Fig. 2F, Table 3). Regardless of whether castrations were done or not, GST-P expression in livers of male rats induced hepatocarcinoma was higher than in livers of female rats (PLATE I, Fig. 2A, B, D, E, Table 3). These results indicated that estrogen may inhibit but androgen may promote the GST-P expression in the rat liver during hepatocarcinogenesis. This may be related to the higher incidence of liver carcinoma in male than in female.     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶中巯基的研究

 用巯基试剂5.5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)测得人胎盘谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)的总巯基数为每亚基2个,均为表面巯基,,其中一个与DTNB反应快,被修饰后可导致酶活力全部丧失。另一巯基与DTNB反应较慢,可能与酶活力无关。用在12℃测定剩余巯基和Stallcup-Koshland作图法求得DTNB修饰快反应和慢反应巯基的速度常数分别为44056和162min~(-1)(mol/L)~(-1)。底物谷胱甘肽的衍生物S-正辛烷谷胱甘肽(S-o-GSH)能保护GST-π能保护的快反应巯基免受DTNB的修饰,使反应速度常数随着S-o-GSH浓度的增高而降低。S-o-GSH也能保护酶被N-乙基马来酰亚胺(NEMI)修饰失活,但不能保护慢反应巯基被DTNB修饰。另一底物2,4-二硝基氯苯(CDNB)对NEMI的修饰失活没有保护作用。上述结果提示快反应巯基参与GST-π和谷胱甘肽的结合,是组成活性中心的重要基因。     

小鼠皮肤癌变过程中GST—π免疫组化染色观察

为探讨谷胱甘肽s-转移酶(GSTs)在小鼠皮肤癌变中的作用,本实验利用GST-π抗体和免疫组织化学方法,观察GST-π在小鼠正常皮肤(n=6)、良性增生(n=8)、异性增生(n=12)、鳞状细胞癌(n=9)中的表达和作用部位.结果表明,在正常皮肤标本中GST-π几乎没有表达;在良性增生中,细胞质染色为50%,细胞核周染色为12.5%;在异性增生中细胞质染色为83.3%,细胞核周染色为75%;在鳞状细胞癌细胞质染色为100%,细胞核周染色为88.9%.GST-π在小鼠皮肤癌变过程中含量明显增高,尤其GST-π在皮肤角化层和核周的表达,可以作为诊断癌症的一种标志.     

人肺癌变早期阻断及基分子机制研究

以人胚肺为实验材料,进行了ｏｌｔｉｐｒａｚ对人肺癌变早期阻断及其分子机制的研究,结果显示：ｏｌｔｉｐｒａｚ阻断人肺癌变在香烟凝聚物（ＣＳＣ）运用前或同时运行效果较好;ｏｌｔｉｐｒａｚ阻断人肺癌变时能使谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴｓ）活性和ＧＳＴ－π蛋白含量降低;ｏｌｔｉｐｒａｚ能使ｍｐ５３蛋白表达减弱;ｏｌｔｉｐｒａｚ仅能阻止而不能逆转ｒａｓ基因突变;ｏｌｔｉｐｒａｚ能诱导人肺腺癌细胞凋亡,在使用     

胎盘型谷胱甘肽S－转移酶基因在胃癌中的表达

用Ｄｉｇ－ＧＳＴ－πｃＤＮＡ探针分子杂交方法,检测了正常胃组织,胃癌及相应癌旁正常组织中ＧＳＴ－πＤＮＡ和ＧＳＴ－πＲＮＡ水平,发现ＧＳＴ－πＤＮＡ水平没有明显变化,而ＧＳＴ－πＲＮＡ在８例胃癌组织中有６例高于正常胃组织,在１２例低分化腺癌中有７例癌旁正常组织高于相应癌组织,表明ＧＳＴ－π基因表达增加与胃癌有关,而且早于细胞形态的变化。     

胎盘型谷胱甘肽S－转移酶基因在胃癌中的表达

用Dig-GST-πcDNA探针分子杂交方法,检测了正常胃组织、胃癌及相应癌旁正常组织中GST-πDNA和GST-πRNA水平.发现GST-πDNA水平没有明显变化,而CST-πRNA在8例胃癌组织中有6例高于正常胃组织,在12例低分比腺癌中有7例癌旁正常组织高于相应癌组织.表明GST-π基因表达增加与胃癌有关,而且早于细胞形态的变化.     

谷胱甘肽－硫转移酶在肺癌细胞耐药中的作用

将反义ＧＳＴ－πＲＮＡ通过逆转录病毒载体介导的基因转移技术,导入人肺腺癌阿霉素耐受株细胞中,经Ｇ４１８筛选,克隆出抗性克隆,测定ＧＳＴ总酶活性,对活性最低的一株克隆,进行阿霉素药敏分析和ＧＳＴ－π基因表达的原位杂交分析．结果发现,ＧＳＴ－π基因表达受到明显抑制,总酶活性也大大降低,对阿霉素的抗药性下降了２０％．     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶动力学及抑制剂的研究

研究了人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)的动力学。底物GSH和1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)的km分别为0.109和0.870mmol/L。苯唑青霉素和先锋霉素Ⅰ能抑制GST—π,以先锋霉素较明显,属非竞争性抑制。溴磺酜对CDNB也是非竞争作用,但胆红素则对CDNB竞争而对GSH非竞争地抑制酶活力。S-正辛烷和S-正已烷谷胱甘肽与GSH竞争而与CDNB非竞争地抑制GST-π。已充分证明GST-π所催化的双底物反应属随机顺序机制。化学修饰实验发现:巯基、胍基、氨基、羧基和吲哚基可能参与酶活性中心的组成。     

胆红素对人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的别构效应

胆红素是人胎盘谷胱甘肽S—转移酶(GST—π)的别构效应剂,在胆红素存在下,底物谷胱甘肽(GSH)呈同促正协同效应:胆红素浓度愈高,Hill氏系数(n_H)也愈大,胆红素本身对酶的结合也呈同促正协同效应。胆红素还能加速GST-π在缺乏疏基保护剂时的自然失活,加速GST-π的氨基被2,4,6—三硝基苯磺酸(TNBS)、胍基被丁二酮以及羧基被N-乙基-N’-(3-二甲胺基丙基)羧二亚胺(EDC)的修饰,但却抑制N-乙基顺丁二酰亚胺(NEMI)对疏基的修饰,胆红素这种对失活作用的影响可能和胆红素引起GST-π空间构象的变化有关,对其他可能性也作了讨论。     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的纯化和性质

将人胎盘组织粗匀浆经105000×g超速离心后,用S-已基谷胱甘肽-琼脂糖-6B亲和层析一步纯化法获得电泳纯的人胎盘GST(简称GST-π)。其比活性较粗匀浆高194.7倍,回收率为50％。再经DE_(52)交换柱进一步纯化,用KCl浓度梯度洗脱后为单一锐峰,等电聚集电泳呈一条带,等电点(pI)为4.60。GST-π经TSKgel-G3000SW柱高效液相层析,也为单一对称锐峰,测得其分子量为45.2kD;在SDS-PAGE电泳也为单一区带,测得其亚基单位的分子量为22.5kD。GST-π氨基酸组成分析可检出十六种氨基酸,其中以谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸及甘氨酸含量较高。 GST-π酶动力学研究证明GST-π以GST和CDNB为底物时km值分别为0.16mmol/L和0.55mmol/L,经测定表明,GST-π的最适作用pH值为7.5,在pH6.5—9的范围内较为稳定,体外GST-π在温度超过25℃对容易失活。以GST-π为抗原,得到兔抗人GST-π抗血清,其效价为1:32,与人肝GSTs不发生免疫交叉反应。     

谷胱甘肽S-转移酶的诱导表达及提纯

含有日本血吸虫谷胱甘肽S -转移酶基因的质粒 pGEX - 5X - 1在大肠杆菌BL2 1 (DE3)菌株中得到表达。 37℃[1 ]下用 1 %乳糖诱导谷胱甘肽S -转移酶 (GST)的最适表达时间为 3h。盐析粗提酶液并以Habig法[2 ] 监测GST的活性 ,用pH6 .0 ,饱和度为 30 %硫酸铵去除杂蛋白 ,并调 pH7.5 ,饱和度 70 %硫酸铵使GST大量析出并保持活性。用透析法脱盐 ,并用Sephadex -G5 0凝胶对GST进行了初步纯化。初步探讨了GST的保存方法     

胎盘型谷胱甘肽S-转移酶研究新进展

主要介绍了近年来关于胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的生化特性、基因结构和调节、在癌及癌前病变中的表达以及与肿瘤细胞耐药性关系研究的新进展。     

高效液相层析法纯化人胎盘谷胱甘肽硫转移酶

足月分娩的新鲜胎盘组织制成匀浆后,经高速离心、超速离心,谷胱甘肽(GSH)Sepharose 6B亲合层析,Amicon pM-10膜超过滤及高效液相层析,最终经SDS-PAGE鉴定,结果呈现单一亚基区带,其亚基分子量为25000。 根据我们现有高效液相设备条件,用ODS柱代替RadulovicL等报道的特异阴离子柱,用磷酸盐洗脱液代替含谷胱甘肽、二硫苏糖醇及氯化钾的梯度洗脱液,从人胎盘组织成功地制备了谷胱甘肽硫转移酶(GST)纯酶,全过程在15min内完成,保留时间及主峰面积的重复性均较理想,7次实验结果的变异系数为0.2％,最终纯化578.9倍。本研究为各种形式GST的纯化制备提供了一个新的、重复性好、分辨率高及回收理想的简易方法。