抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体IgY的动物保护作用研究

目的通过连续观察蛇伤大鼠多项生理指标的动态变化,探讨不同时段施予血清（125u血清／mg蛇毒）同等效价但量加倍的抗蛇毒IgY对其心、肺功能保护的时效性。方法SD大鼠分为80、100、120min IgY保护组和蛇毒组共4组,戊巴比妥钠腹麻,按2倍LD50（1．272mg／kg）的剂量注入舟山眼镜蛇毒。连续3h记录呼吸频率、心电图和肌电等生理指标的动态变化,于注毒后80、100、120min分3个时段注入抗眼镜蛇毒IgY,比较各组大鼠的平均存活时间、保护率及心、肺、腓肠肌功能的差异。结果蛇毒组大鼠注入2倍LD5。的眼镜蛇毒后,平均存活时间为124．4min,存活率为0;80、100min IgY的存活率均达到或超过50％。但120minIgY组的保护作用不明显。与生理盐水组相比,各组心电图异常（心率减慢、ST段抬高）、呼吸频率减慢及肌电减弱多出现在100min以后。大鼠死亡前均出现潮式呼吸直至呼吸衰竭。结论应用与血清（125u血清／mg蛇毒）同等效价但量加倍的抗蛇毒IgY,可有效地减低蛇毒对机体心、肺、骨骼肌功能的损伤,提高生存率;与抗血清（125u血清／mg蛇毒）对蛇伤大鼠保护作用的结果相比,加量后保护作用更强．保护的有效时段有一定的延长。     

中华眼镜蛇伤大鼠模型多项电生理指标的动态观察

目的建立中华眼镜蛇毒挑战剂量的大鼠模型,通过对多项电生理指标的动态观察,为蛇毒毒理及抗蛇毒制剂的研究提供实验数据。方法将SD大鼠分为蛇毒组、血清保护组和对照组,戊巴比妥腹麻,连续记录心率、血压、呼吸频率及心电图等电生理指标的动态变化,观察眼镜蛇毒的毒性反应及抗蛇毒血清对动物的保护作用。结果腹腔注入挑战剂量(4×LD50:4×0.636 mg/kg)的中华眼镜蛇毒后,大鼠平均生存时间为(3±0.33)h。蛇毒组给药30~60 min后,心率及呼吸频率均有轻度加快,Ⅱ导联ST段抬升幅度超过同期正常对照0.1 mV以上(P<0.05);130~150 min后,心率、呼吸频率及动脉血压均直线下降;达180 min时,心率、呼吸频率及动脉血压均已降到同期正常对照的30%以下,差异非常显著(P<0.01)。血清保护组给药后各指标相对平稳,与对照组比较无明显差异。结论以4倍LD50为挑战剂量造模的中华眼镜蛇伤大鼠模型,心率、血压、呼吸频率及心电图等电生理指标的动态变化与临床症状基本相符。眼镜蛇毒抗血清可有效地中和、保护眼镜蛇毒对机体的伤害。     

急危重症眼镜蛇伤大鼠多项凝血指标动态变化

目的动态观察蛇伤后大鼠多项凝血指标、病理及皮下出血情况的改变,为蛇毒毒理及抗蛇毒制剂的研究提供实验数据。方法将SD大鼠注入2～4 LD50眼镜蛇毒造模,于注毒后不同时段(20～140 min)分别进行凝血功能、肝脏和肾脏病理等检测,处死大鼠后观察注毒部位皮下出血情况。结果大鼠注入4 LD50蛇毒20 min,凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)延长;40 min时,纤维蛋白原(Fbg)明显下降;40 min后凝血功能逐渐回复至0 min水平。肾脏、肝脏组织见血管扩张、充血明显。注毒部位皮下出血范围于20～80min时最明显。2 LD50剂量组凝血功能的变化与4 LD50组相似,但其Fbg下降程度小于4 LD50组,皮下出血面积较4 LD50组小。结论眼镜蛇毒引起凝血功能改变,且其变化程度与剂量及注入时间密切相关。     

抗蛇毒血清滴眼治疗眼镜蛇毒致眼外伤

目的观察单价抗眼镜蛇毒血清溶液滴眼治疗中华眼镜蛇毒(Naja naja atra,Chinese cobra)不慎进人眼睛引起外伤中毒性急性角膜炎的临床效果。方法观察1992～2002年我院急诊救治眼镜蛇喷毒或加工蛇毒时不慎蛇毒进人眼睛引起外伤性急性角膜炎8例男性病人,从受伤到就诊时间最快15min,最慢50min。就诊后立即用生理盐水冲洗受伤眼睛,紧接着给予单价抗眼镜蛇毒血清溶液滴人患眼0．5h后,用氯霉素眼药水、可的松(或地塞米松)眼药水交替滴眼,直至痊愈。结果使用抗蛇毒血清滴眼后局部疼痛、异物感等症状在20min内得到缓解,3天内眼睑红肿、结膜充血等角膜炎症状消失。8例病人均治愈,未留有后遗症。结论：单价抗眼镜蛇毒血清滴眼治疗中华眼镜蛇毒致眼外伤是非常方便有效的方法,可能与其能迅速中和眼睛内残留的蛇毒有关。     

中华眼镜蛇毒致局部组织损伤的动物实验研究

目的对中华眼镜蛇毒致局部组织损伤的6种治疗方法,通过动物实验进行疗效优劣比较,找出最佳治疗方法。方法用中华眼镜蛇毒制作动物家兔局部组织损伤模型,分别采用6种不同的治疗方法进行局部治疗,观察其疗效。结果6种治疗方法从优到劣依次是：抗蛇毒血清局部注射-糜蛋白酶局部注射-蛇伤药酒外敷-坏死组织早期切除-局部烧灼法-局部组织切开冲洗。结论中华眼镜蛇伤致局部组织损伤的治疗方法应首选抗蛇毒血清局部注射和糜蛋白酶局部注射,其次选用蛇伤药酒外敷．     

中华眼镜蛇伤致局部组织损伤治疗的实验研究

目的 探讨中华眼镜蛇伤致局部组织损伤的最佳治疗方法。方法 用中华眼镜蛇毒作家兔局部组织损伤模型,分别采用抗蛇素血清局部注射、糜蛋白酶局部注射、蛇伤药酒外敷、坏死组织早期切除、局部烧灼法、局部组织切开冲洗,共6种处理方法进行局部治疗,观察其疗效。结果 6种治疗方法从优到劣依次是：抗蛇毒血清局部注射、糜蛋白酶局部注射、蛇伤药酒外敷、坏死组织早期切除、局部烧灼法、局部组织切开冲洗。结论 中华眼镜蛇伤致局部组织损伤的治疗方法应首选抗蛇毒血清局部注射和糜蛋白酶局部注射,其次选用蛇伤药酒外敷。     

眼镜蛇毒对大鼠脊髓乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠腰髓乙酰胆碱酯酶（AchE）表达的影响。方法 将蛇毒注射到大鼠左小腿下部,采用亚铁氰化铜法示AchE,观察大鼠腰髓前角AchE阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化。结果 蛇毒组大鼠AchE阳性神经元比对照组表达增强。结论 眼镜蛇毒对腰髓的AchE阳性神经元表达有上调作用。     

抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定

目的探索免疫鸡制备高效价抗眼镜蛇毒抗体的新方法。方法用中华眼镜蛇原毒作抗原免疫22周龄的莱航母鸡,水溶法粗提抗体,DEAE Sepharos FF柱纯化,切向流超滤膜脱盐及浓缩,免疫电泳及双向免疫扩散法进行鉴定及效价测定,采用BCATMProte in Assay K it测定蛋白含量。结果鸡卵黄经水溶法的粗提物与中华眼镜蛇毒即有较明显沉淀反应,其效价随着纯度的提高而增强。将马源性抗血清的蛋白质含量调至与浓缩的IgY相同(2mg/m l),经双向免疫扩散及免疫电泳鉴定,该抗体不但对中华眼镜蛇毒有特异性结合,与孟加拉眼镜蛇毒亦有较强的交叉免疫活性,其效价较马抗眼镜蛇毒血清高4倍以上。结论用中华眼镜蛇原毒制备的IgY抗体,其效价较马抗血清有显著提高,并与孟加拉眼镜蛇毒有高度交叉免疫。本实验为抗眼镜蛇IgY的应用及其它抗蛇毒IgY的制备奠定了基础。     

眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠延髓中的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠延髓外侧网状核c-fos阳性细胞明显多于生理盐水组和正常对照组(P＜0.01).结论 眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达有上调作用.     

乙醇对中华眼镜蛇毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对眼镜蛇毒毒性的影响。方法将眼镜蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,分别于小白鼠皮下注射、口服,将致死量蛇毒皮下注射后的小白鼠立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果小白鼠经皮下注射致死量眼镜蛇毒后,在局部注射50％（或异蛇米酒）、75％乙醇0．1～0．2ml有一定的保护作用;口服100倍皮下注射致死量眼镜蛇毒未发现有毒性表现,口服经50％乙醇处理后的眼镜蛇毒（100倍皮下注射致死量）未增加小鼠死亡率。结论眼镜蛇毒体外经过乙醇处理后毒性有所下降。口服少量的眼镜蛇毒是安全的。眼镜蛇毒与乙醇混合后口服未见蛇毒毒性增加。     

中华眼镜蛇毒组份的抗肿瘤研究进展

药物治疗是肿瘤治疗的一个重要组成部分,对抗肿瘤药物疗效的筛选评价是肿瘤基础和临床研究的重点之一。中华眼镜蛇毒（Naja Naia Actra Venom,N．N．A．V）一直是国内外抗肿瘤药物研究中的重点生物源毒素之一。本文作者就中华眼镜蛇毒组份抗肿瘤的研究,作一综述。     

Comparative Study of Structure and Activity of Cytotoxins from Venom of the Cobras Naja oxiana, Naja kaouthia, and Naja haje

Cytotoxins are positively charged polypeptides that constitute about 60% of all proteins in cobra venom; they have a wide spectrum of biological activities. By CD spectroscopy, cytotoxins CT1 and CT2 Naja oxiana, CT3 Naja kaouthia, and CT1 and CT2 Naja haje were shown to have similar secondary structure in an aqueous environment, with dominating beta-sheet structure, and to vary in the twisting angle of the beta-sheet and the conformation of disulfide groups. Using dodecylphosphocholine micelles and liposomes, CT1 and CT2 Naja oxiana were shown to incorporate into lipid structures without changes in the secondary structure of the peptides. The binding of CT1 and CT2 Naja oxiana with liposomes was associated with an increase in the beta-sheet twisting and a sign change of the dihedral angle of one disulfide group. The cytotoxins were considerably different in cytotoxicity and cooperativity of the effect on human promyelocytic leukemia cells HL60, mouse myelomonocytic cells WEHI-3, and human erythroleukemic cells K562. The most toxic CT2 Naja oxiana and CT3 Naja kaouthia possessed low cooperativity of interaction (Hill coefficient h = 0.6-0.8), unlike 10-20-fold less toxic CT1 and CT2 Naja haje (h = 1.2-1.7). CT1 Naja oxiana has an intermediate position on the cytotoxicity scale and is characterized by h = 0.5-0.8. The cytotoxins under study induced necrosis of HL60 cells and failed to activate apoptosis. The differences in cytotoxicity are supposed to be related not with features of the secondary structure of the peptides, but with interactions of side chains of variable amino acid residues with lipids and/or membrane proteins.     

眼镜蛇咬伤生化特点分析

目的探讨眼镜蛇咬伤病例的生化特点,提高眼镜蛇咬伤的诊治水平。方法总结111例眼镜蛇咬伤的临床资料,对实验室检查的各生化指标进行统计分析。结果轻型102例,重型7例,危重型2例。血常规中白细胞升高,血小板计数正常,心肌酶学各指标升高,APTT,PT,BUN,Cr正常。RBC、Hb,PLT,FIB,PT、APTT,CK、CKMB、LDH在轻型组和重危型组中比较有显著变化。结论我国南方眼镜蛇咬伤以细胞毒表现最为突出,肾损害轻微、少见,凝血功能障碍不明显。心肌酶学变化显著,可作为诊断和观察病情的敏感指标。缩短就诊时间,及早处理,是改善预后的重要因素。     

Protective Effects of Hypothalamic Proline-Rich Peptide and Cobra Venom Naja Naja Oxiana on Dynamics of Vestibular Compensation Following Unilateral Labyrinthectomy

We tested the action of proline-rich peptide (PRP-1) and cobra venom Naja Naja Oxiana (NOX) on Deiters’ nucleus neurons at 3rd, 15th and 35th days after unilateral labyrinthectomy (UL). Early and late tetanic, post-tetanic potentiation and depression of Deiters’neurons to bilateral high frequency stimulation of hypothalamic supraoptic and paraventricualar nuclei was studied. The analysis of spike activity was carried out by mean of on-line selection and special program. The complex averaged peri-event time and frequency histograms shows the increase of inhibitory and excitatory reactions of Deiters’ neurons at early stage of vestibular compensation following PRP-1 and NOX injection, reaching the norm at the end of tests. In histochemical study the changes in Ca²⁺-dependent acidic phosphatase (AP) activity in neurons was discovered. It was shown that in UL animals the total disappearance or delay of decolorizing of Deiters’ neurons lead to neurodegenerative pattern as cellular “shade”. AP activity after UL and PRP-1 injection exerts more effective recovery of neurons in comparison with events, observed after the administration of NOX. The data of this study indicate that PRP-1 and NOX are protectors, which may successfully recover the disturbed vestibular functions.