拟康氏木霉菌YIM PH30002铁载体活性化学成分北大核心CSCD

通过双层琼脂平板法对拟康氏木霉菌YIM PH30002在三种培养基条件下产铁载体能进行了半定量分析检测,该菌株在PDB培养基中,产铁载体成分的量最多。利用多种色谱技术从菌株YIM PH30002的PDB发酵液的乙酸乙酯提取物中共获得了5个聚酮类代谢产物,经波谱数据分析与文献比对,化合物分别鉴定为：konginginin A（1）、konginginin B（2）、konginginin D（3）、konginginin F（4）、konginginin M（5）。化合物1~4表现有铁载体活性,其中化合物2的铁载体活性相对较强,MTC值约为300μg/m L。但化合物均无显著抗菌生物活性。     

鱼类肠道铁载体高产菌株CB-EH-2的筛选与鉴定

利用2216E限铁培养基从青岛近海海鱼肠道内筛选到1株铁载体高产菌株,命名为CB-EH-2。结合形态、生理生化特性、16S rRNA基因序列同源性和系统发育分析将其初步鉴定为Cobetia amphilecti。铬天青(CAS)法检测其铁载体的产生及对Fe3+的亲和能力。XAD-2大孔径树脂提取铁载体,铁载体类型和拮抗活性分析显示,菌株CB-EH-2所产铁载体为异羟肟酸型,可显著抑制鳗弧菌等4种指示菌的生长。不同浓度2,2'-联吡啶及铁离子对CB-EH-2的菌体量和铁载体产量具有较大的影响。本文首次报道C.amphilecti产生异羟肟酸型铁载体,CB-EH-2作为有益菌值得进一步研究。     

高产铁载体棉田土壤细菌SS05的筛选与鉴定

【目的】研究从棉田土壤中筛选得到的高产铁载体细菌产铁载体能力、分类地位和抑菌活性。【方法】通过改良蔗糖-天冬氨酸培养基选择性筛选产铁载体细菌,通过分光光度计法测定铁载体活性,通过混菌法测定产铁载体细菌上清液对棉花枯萎病致病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑菌效果,采用形态学、生理生化鉴定及16S rDNA序列系统发育分析对高产铁载体菌株进行鉴定。【结果】从棉田土壤中筛选到162株产铁载体细菌,30株产铁载体能力较强的细菌中21株具有较高产铁载体能力,菌株SS05的铁载体活性单位达到98.3%;在低铁条件下,SS05上清液对F.oxysporum具有显著的抑制作用;SS05与莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)最为接近。【结论】SS05是高产铁载体菌株,与莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)最为接近,在低铁培养条件下其上清液对F.oxysporum具有显著的抑制作用。     

镍胁迫下产铁载体细菌对花生的促生性

【目的】挖掘镍耐受性强、产铁载体活性高的植物根际促生细菌,研究镍胁迫下产铁载体细菌对花生的促生作用及其对花生吸收镍的影响。【方法】利用CAS(Chrome azurol S)培养基对花生根际产铁载体细菌定性筛选及定量测试获得产铁载体能力强的菌株,16S r RNA基因相似性及系统进化分析鉴定产铁载体细菌,并用含Ni~(2+)牛肉膏蛋白胨培养基测试细菌对Ni的耐受性;通过花生盆栽实验,测试花生的株高、根长、生物量、氮磷钾含量及镍含量来分析镍胁迫下产铁载体细菌对花生的影响。【结果】从花生根际分离筛选产铁载体芽孢杆菌5株,其中HSGJ1产铁载体能力最强,培养2 d后产156.56 mg/L的铁载体。HSGJ1对Ni~(2+)具有较强的耐受性,最小致死浓度为150 mg/L。在50、100 mg/kg的Ni~(2+)盆栽基质中,HSGJ1能够有效地促进花生的生长、增加花生的生物量及氮磷钾含量,并使花生根部和地上部分的镍含量降低。【结论】产铁载体芽孢杆菌HSGJ1是一株优良的植物根际促生细菌,可应用于镍污染农耕土壤的作物种植中,以提高作物在镍胁迫下的抗逆性,降低作物对镍的富集量,具有较好的应用价值。     

黑麦草根际铁载体产生菌WN-H3的分离鉴定及其产铁载体培养条件的优化

从黑麦草(Lolium perenne L.)根际土壤中分离得到28份菌株,采用刃天青(chrome azural S,CAS)平板检测法定性、定量筛选出1株产铁载体能力较强的细菌WN-H3,经过菌落形态、生理生化特征、16S r DNA序列同源性和系统发育分析,初步判断为一株弗村假单胞菌(Pseudomonas vranovensis)。在摇瓶水平上采用单因子法分别研究了铁载体合成菌株WN-H3的碳、氮源利用效果及培养温度、摇床转速、培养基初始p H值等因素对菌株生长及铁载体合成能力的影响,最终优化得到铁载体产生菌的最佳发酵条件:蔗糖10 g/L,酵母浸出粉5 g/L,Na Cl 5 g/L,温度28℃,转速180 r/min,p H7.5,该条件下培养48 h后菌株WN-H3产生的铁载体活性su值可达80.4%。实验表明,优化后的培养条件更利于铁载体产生菌的生长和铁载体合成。     

具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的蛇足石杉内生真菌分子鉴定

在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)、沙氏液体培养基(SDB)和查氏液体培养基(CDB)中发酵培养蛇足石杉内生真菌菌株SF88和LF52,乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性检测结果表明,菌株SF88和LF52在PDB、SDB和CDB发酵后菌体总生物碱对AChE活性的抑制率分别为45.6%和56.7%、56.3%和68.5%、40.8%和48.3%。对这两株不产孢内生真菌的DNA ITS、18S rDNA、28S rDNA、TUB和RPB进行了测序,系统发育分析表明,SF88和LF52为Phaeosphaeriaceae科中一未知种,为开发生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)药物提供了新的潜在菌种资源。     

一株产铁载体内生细菌对尖孢镰刀菌的拮抗作用

通过改良蔗糖-天冬氨酸培养基筛选到一株产铁载体的内生细菌HS-4,测定了该菌在不同铁离子浓度下对棉花枯萎病致病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑菌效果,并结合形态、生理生化、16S rDNA序列同源性和系统发育分析对菌株进行鉴定.结果表明:内生细菌HS-4在MSA培养基中产生荧光型铁载体,其铁载体相对含量为80%.该铁载体在低铁条件下对F.oxysporum具有抑制作用.内生细菌HS-4初步鉴定为萎缩芽孢杆菌(Ba-cillus atrophaeus).     

具抗肿瘤活性放线菌菌株YIM 90022的分离和系统发育分析

从青海盐碱土壤样品中分离到一株兼性嗜碱放线菌YIM 90022,该菌株的发酵产物具有很强的体外抗胃癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、肾癌和子宫癌肿瘤细胞株活性。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,菌株YIM90022属于拟诺卡氏属(Nocardiopsis)的成员,与该属的4个有效发表种N.exhalansDSM 44407T,N.prasinaDSM43845T,N.metallicusDSM 44598T和N.listeriDSM 40297T系统发育关系最密切,与其分别以98.8%,98.5%,98.4%和97.8%的16S rRNA基因核苷酸序列相似性聚为一簇。但菌株YIM 90022不与这4个有效种中任何一个单独相聚,形成了一个独立亚分枝。结合形态特征、生理生化特性、细胞化学分类特征,以及rep-PCR基因指纹分析等方面的研究结果,菌株YIM 90022可能为拟诺卡氏菌属的一个潜在新种。菌株YIM 90022在大多数培养基上生长良好,气生菌丝和基内菌丝丰富,在酵母膏麦芽膏琼脂、燕麦片琼脂等培养基中产生可溶性色素。生长pH范围6.0~12.0,最适pH 8.5;能在含0~15%NaCl(W/V)的培养基上生长。     

防烟叶霉变菌株培养条件的研究

为有效防治烟叶霉变．对防烟叶霉变最好的3个菌株B112、B329、JMB142的发酵条件进行了初步探讨,通过测定吸光度值计算孢子浓度,确定了3个菌株生长的最适pH值与最适培养基。结果表明菌株JMB142在pH为7．2到8．4时,生长较好,菌株B112和329在PH6.3到PH7.9之间生长较好;当PH小于4.2时,三个菌株均不能正常生长,PH大于9.0时,三个菌株的生长都呈下降趋势。通过方差分析,比较了7种培养基对3株防烟叶霉变菌株产菌量的影响,结果表明,B112、JMB142菌株最佳培养基分别为6^#、5^#培养基,而5^#、7^#培养基更适合B329生长。     

一株内生真菌Talaromyces sp.次级代谢产物及其活性

为了研究红树杨叶肖槿来源内生真菌Talaromyces sp. YX-001的次级代谢产物及其乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)抑制活性,该文运用硅胶柱层析和HPLC等手段从菌株YX-001的PDB培养基发酵提取物中分离得到单体化合物,而后结合1/2D NMR和MS等现代波谱技术并与文献数据对比鉴定其结构,最后通过比色法测定各单体化合物的AChE抑制活性。结果表明:(1)共分离得到9个单体化合物,分别为asterrelenin(1),aszonalenin(2),cladosporisteroid C(3),sitosterol(4),ergosterol(5),cyclo-Ile-Pro-diketopiperazine(6),cyclo(-Pro-Val)(7),4-methoxy-2-methylisoquinolin-1-one(8)和allantoin(9)。(2)其中化合物1和2显示出一定的AChE抑制活性,IC₅₀值分别为81.5、105.8 μmol·L^-1。该文首次对杨叶肖槿来源内生真菌次级代谢产物及其AChE抑制活性进行了研究,为后续红树植物杨叶肖槿来源内生真菌资源的开发与再利用奠定了基础。     

古尔班通古特沙漠苔藓结皮土壤中促生菌的分离筛选及促生特性研究

从古尔班通古特沙漠南缘苔藓结皮土壤中分离筛选植物促生菌并阐明其促生特性，对于发掘和应用功能性微生物制剂，促进植被恢复和提升荒漠固沙能力等具有积极意义。采用富集方法从苔藓生物结皮下0～20 cm土壤中分离可培养微生物。利用选择性培养基筛选具溶磷、产铁载体、分泌吲哚乙酸（IAA）特性的菌株。采用钼锑抗比色法、CAS检测法、Salkowski比色法分别测定菌株溶磷量、产生铁载体的浓度、分泌IAA的含量，并对性能优良的菌株进行分类鉴定。共筛选出促生菌31株，其中溶磷菌31株，产铁载体菌13株，分泌IAA菌28株。菌株LB5WH溶解无机磷能力最强，溶磷量为302.24 mg/L；菌株LB15产铁载体能力最强，产生铁载体的浓度 Su值（铁载体活性单位）为85.7%；菌株GA20分泌IAA活性最强，分泌量为15.46 mg/L。菌株LB5WH、LB15同时具有溶磷、产铁载体和分泌IAA活性，菌株GA20具有溶解有机磷、分泌IAA活性。菌株溶解无机磷能力要强于溶解有机磷能力，溶解无机磷菌株的溶磷量与培养液pH值之间呈显著负相关。经鉴定，菌株LB5WH属于芽胞杆菌属（Bacillus），菌株GA20属于寡养单胞菌属（Stenotrophomonas），菌株LB15属于赖氨酸芽胞杆菌属（Lysinibacillus）。这三株细菌的促生功能较多，具有进一步开发为微生物肥料的潜能。本研究为丰富荒漠区促生菌资源，进一步深入研究苔藓结皮下土壤-微生物-植物互作的生态调控机制及荒漠植物促生菌的促生机理提供菌种资源。     

三株杀粘虫放线菌的分类鉴定

菌株YIM31331、YIM31333、YIM31355是从云南省丽江、中甸采集的土壤样品中分离得到的具有产杀粘虫活性物质菌株。根据其形态学特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析结果,认为菌株YIM 31331属于链霉菌属的Streptomyces subrutilus,YIM31333属于指孢囊菌属Dactylosporangium aurantiacum,YIM31355属于链孢囊菌属Streptosporangium vulgare。     

达乌里胡枝子产铁载体根瘤内生细菌的鉴定及其促生抗逆效应

【背景】根瘤是植物-微生物共生的特殊结构,蕴含丰富的微生物资源。产铁载体根瘤内生细菌对促进结瘤固氮具有重要作用,但目前关于其是否对植物具有促生作用尚不明确。【目的】筛选鉴定达乌里胡枝子(Lespedeza daurica)根瘤产铁载体内生细菌,明确其促生作用,为丰富植物促生菌资源提供新的途径。【方法】利用铬天青(chrome azurol S, CAS)培养基初筛产铁载体根瘤内生细菌,对目的菌株进行鉴定;通过液体发酵试验确定其产铁载体能力;利用促生功能培养基测定其他促生特性;利用不同盐浓度(0.01%-9.00%)、不同pH值(3.0-12.0)的酵母甘露醇(yeast mannitol,YMA)液体培养基和不同培养温度(4-60℃)确定其抗逆特性;通过盆栽试验初步验证其对植物的促生作用。【结果】48株根瘤内生细菌可产铁载体,其中9株为高产铁载体细菌,分别为TG4、TG9、TG13、TG15、TG28、TG32、TG38、TG76和TG78,铁载体相对表达量为26%-93%;经鉴定,除了TG28为巨大普里斯特氏菌(Priestiamegaterium),其余8株菌均为耐寒短杆菌(Bre...     

盐地碱蓬内生菌Neocamarosporium sp. ZLM-26次级代谢产物

本研究对盐地碱蓬内生菌Neocamarosporium sp. ZLM-26的活性次级代谢产物进行了挖掘。采用薄层色谱、硅胶柱色谱、高效液相色谱等分离方法,从该菌株大米培养基发酵产物的乙酸乙酯萃取物中分离得到6个单体化合物,经波谱学解析和文献数据对比,鉴定6个化合物分别为：5-butyl-6-(hydroxymethyl)-2H-pyran-2-one(1)、(7S)-xylariolide E(2)、(6S)-xylariolide D(3)、diaporpyrone A(4)、4-hydroxybenzaldehyde(5)和2-(2-hydroxyethyl) phenol(6)。分别采用CCK-8法和96孔板法评估了6个化合物的抗肿瘤和抗菌活性。结果显示,6个化合物(50 μmol/L)对胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1的增殖无明显抑制作用;而化合物4对大肠杆菌有较好的增殖抑制活性,化合物5、6对铜绿假单胞菌有较好的增殖抑制活性。化合物1为1个新的天然产物,本研究首次报道了其核磁数据和抗菌活性。此外,化合物1–4均为首次从新凸轮孢菌属真菌中分离得到。     

四株碱性环境真菌铁载体活性筛选

【目的】铁载体(Siderophore)是由微生物产生的一类低分子量金属离子螯合物。在生物医药、环境修复、健康食品等领域均具有广泛应用前景。文献调查显示,针对碱性环境真核微生物铁载体研究尚无相关报道。从中筛选高活性铁载体真菌具有重要意义。【方法】采用铬天青S显色法对分离于云南省碱性湖泊-程海和个旧大屯碱性尾矿土壤的99株真菌进行筛选;利用"分光光度法"对菌株产铁载体能力和铁载体类型进行考察;采用固相萃取(SPE)手段对菌株铁载体富集效果进行考察;根据菌体形态电镜观察和ITS基因系统发育树构建,对菌株进行生物学鉴定。【结果】通过初筛和复筛,确定菌株FEDT-866、FEDT-145、FECH-998和FECH-595均为铁载体高产菌株;所产铁载体类型主要为异羟肟酸型和羧酸型。除菌株FEDT-866外,铁载体活性产物适合采用固相萃取(SPE)方法进行富集。经生物学鉴定,菌株FEDT-866和FECH-998属于曲霉属,分别与Aspergillus tubigensis和A.nomius相似性较高;菌株FECH-595和FEDT-145属于青霉属,分别与Penicillium svalbardense和P.chrysogenum相似性较高。【结论】P.chrysogenum是1种常见的产铁载体真菌。而A.tubigensis、A.nomius及P.svalbardense菌株尚无产铁载体相关报道,可作为铁载体研究良好材料。     

高产铁载体根际菌的筛选鉴定及硒活化特性评价

通过对高产铁载体根际菌的分离鉴定及其活化土壤硒的性能研究,揭示根际菌产铁载体与活化硒素性能的相关性。利用铬天青(chrome azural S,CAS)平板法从贵州开阳地区玉米根际土壤中筛选出产铁载体菌株,而后定量检测其产铁载体能力,采用Salkowski比色法检测其产吲哚乙酸能力,通过16S rRNA序列对其进行分析鉴定;另外,通过浸提剂提取的水溶态硒、有效硒含量高低反应菌株对土壤硒的活化能力。研究结果显示:5株菌株具有较强的铁载体分泌能力,其中菌株WD06铁载体活性单位高达73%,达到产铁载体能力较高级;各菌株均具有一定的产吲哚乙酸的能力;各菌株可对土壤中的硒起到较强的活化作用,将水溶态硒含量提高2.50~7.85倍、有效硒含量提高0.46~4.72倍;3株硒活化效果较好的菌株中,WD01经鉴定为Klebsiella michiganensis,WD06为Serratia marcescens,WD07为Enterobacter xiangfangensis。该研究结果为土壤硒微生物强化策略提供了一定的参考。     

蚁巢膝束霉次级代谢产物及生物活性

菌株L342分离自中国四川省的废弃白蚁巢,rDNA序列分析表明L342为蚁巢膝束霉Geniculisynnema termiticola。抗氧化活性评价结果显示其PDB发酵产物的乙酸乙酯提取物具有很强的还原能力和中等强度的DPPH清除能力。采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、HPLC等分离方法,从G. termiticola的PDB发酵粗提物中分离鉴定了6个化合物：3,4-Dihydro-6,8-dihydroxy-3-methylisocoumarin (1), regiolone (2), (3S, 4S)-3,4,6,8-tetradydroxy-3,4-Dihydronaphthalen-1(2H)-one (3), ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one (4), cerebroside A (5), and cerebroside C (6)。其中化合物4-6具有中等强度的铁离子还原能力,化合物4还具有一定的HeLa细胞毒活性（IC50=98.3μmol/L）。G. termiticola发酵产物具有产生有生物活性次级代谢产物的潜力,有望开发成为一种新型的功能性食品。     

假单胞菌荧光与非荧光铁载体对铁离子的应答差异

假单胞菌既能产荧光铁载体也能产非荧光铁载体.通过对假单胞菌在不同铁离子浓度下,在通用CAS(Chrome azroul S)检测平板、改进的蔗糖-天冬氨酸(SA)平板(MSA)上以及通用液体CAS培养基和MSA培养基内的铁载体产生情况的比较,发现在通用CAS的液体培养基上产生的主要为非荧光铁载体(pyochelin),而在改进的MSA培养基上产生的主要为荧光铁载体(pyoverdine);在铁离子的应答方面,pyoverdine较pyochelin灵敏,较低的铁离子浓度即可抑制荧光铁载体的产生,但是不能抑制非荧光铁载体.     

艾纳香内生真菌Diaporthe sp.次生代谢产物

【目的】从艾纳香内生菌J1中获得活性次生代谢产物。【方法】对菌株J1进行ITS序列分子鉴定,综合运用多种色谱技术对其发酵产物进行分离纯化,结合波谱学技术对其进行结构表征。【结果】经构建系统进化树,鉴定菌株J1为Diaporthe sp.,从该菌株大米培养基中分离得到7个单体化合物,经鉴定分别为Dicerandrol A (1)、Dicerandrol B (2)、4,6-dihydroxy-1H-isoindole1,3(2H)-dione (3)、Cytochalasin H (4)、Cytochalasin J (5)、4,6-dihydroxy-2,3-dihydro-1H-isoindol-1-one (6)、Cerebroside C (7)。所有化合物均为首次从该菌中分得,化合物1对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KCTC 1021具有非常强的抑制活性,MIC值为0.125μg/mL。【结论】Diaporthe sp.富含抑菌活性化合物,具有开发成微生物源农药潜力。     

链霉菌YIM 245次生代谢产物的研究

利用多种柱色谱层析方法从来自非洲特有动物之一长颈鹿(Giraffa camelopardalisc)的粪便链霉菌YIM245的发酵产物中分离得到7个化合物,通过理化性质及波谱数据分析,分别鉴定为2'-脱氧胞嘧啶核苷(1)、2’-脱氧胸苷(2)、2’-脱氧尿苷(3)、2’-脱氧腺苷(4)、菜油甾醇(5)、大豆素(6)和邻氨基苯甲酸(7)。应用96孔板法测定了化合物对5种病原指示菌的最低抑制浓度(MIC),结果表明该7个化合物均显示较弱的抗菌活性。