HPLC-ELSD法测定不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量北大核心CSCD

本文建立了雪莲果低聚果糖的HPLC-ELSD测定方法,分析不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量。用不同方法处理新鲜雪莲果,然后超声提取雪莲果粉末中低聚果糖,采用HPLC-ELSD测定,色谱柱：华谱XAmide（4.6×250 mm,5μm）,流动相：乙腈∶水=75∶25,流速：1 m L/min,柱温：30℃,检测器：ELSD,漂移管温度70℃。方法学考察结果表明,蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖在0.406～2.030 mg/m L、0.420～2.100 mg/m L、0.456～2.280 mg/m L范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为101.4%、99.7%、98.6%,RSD分别为1.53%、1.29%、2.81%。该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,不同处理方法所得雪莲果粉末中3种低聚果糖的含量差别较大,其中用清水漂洗0.5 h,然后冷冻干燥所得雪莲果粉末中的低聚果糖含量最高。     

双歧杆菌发酵果蔬汁中低聚果糖的高效液相色谱法分析

目的采用高效液相色谱法（HPLC）对双歧杆菌发酵果蔬汁中的低聚果糖进行分析。方法 HPLC分析条件为：ZORBAX NH2 Analytical色谱柱,乙腈∶水（75∶25）为流动相,柱温35℃,流速为1.0ml/min,示差折光检测器（RID）。结果果蔬汁中的低聚果糖及几种主要糖类均得到有效分离。此分离方法的加标回收率和精密度（RSD）均较高。结论分析结果表明双歧杆菌发酵果蔬汁中含有较丰富的功能性低聚果糖,尤其是蔗果三糖含量很高。     

高效液相色谱法同时测定保健食品中低聚果糖和低聚木糖

目的 建立高效液相色谱法同时测定保健食品中低聚果糖(包括蔗果三糖、蔗果四糖及蔗果五糖)和低聚木糖（包括木二糖、木三糖、木四糖、木五糖、木六糖及木七糖）的含量。方法 采用键合有酰胺官能团杂化填料的色谱柱,以乙腈和水为流动相,利用亲水保留色谱机制（HILIC）实现对低聚果糖和低聚木糖各单体的有效分离,结合示差检测以外标法定量。该方法同时利用木糖对低聚木糖各单体转换系数进行定量。结果 低聚果糖和低聚木糖各单体线性关系良好,相关系数均大于0.998,平均加标回收率为95%以上,具有较高的准确度和良好的重现性。结论 高效液相色谱法由于采用木糖对照品转换定量低聚木糖含量,减少低聚木糖各单体标准品在日常工作中的使用量,进而降低检测成本。该方法经济可靠,测定结果准确,适合于添加有低聚果糖和低聚木糖的功能性产品检测。     

蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的表面展示及酶学性质分析

【目的】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶催化1分子蔗糖上的果糖基转移到另一个蔗糖分子上,形成1-蔗果三糖和葡萄糖。在低聚果糖中,1-蔗果三糖益生素活性最高。本研究将该酶展示在酵母菌细胞表面上,并用于1-蔗果三糖的制备。【方法】将来自莴苣的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶基因克隆到用于酵母细胞表面展示的表达载体上,并在解脂亚罗酵母菌中进行异源表达,表达的酶展示在该细胞表面上,然后以蔗糖为底物,研究表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的性质。【结果】免疫荧光实验结果表明蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶已展示在酵母菌的细胞表面上,高效液相色谱结果表明酵母表面展示的该酶具有转移酶的催化活性。该酶的最适作用温度、最适作用p H分别为45°C和7.5;该酶的催化活性受Zn2+和Cu2+的抑制,受Ca2+激活;该酶重复使用7次后,酶活下降50%。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶和3%蔗糖混合后在40°C条件下孵育30 min后,所产1-蔗果三糖含量最高为20.8 mmol/L。【结论】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶在解脂亚罗酵母菌中得到成功表达,并展示在其细胞表面上,生化研究表明该重组蛋白具有果糖基转移酶活性,且催化蔗果三糖的生成。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶作为一种全细胞催化剂能够用于1-蔗果三糖的制备。     

黑曲霉QU10果糖基转移酶的克隆表达（英文）

微生物果糖基转移酶能够以蔗糖为底物产生低聚果糖。为获得更多新酶资源,通过PCR法成功地克隆出黑曲霉QU10的果糖基转移酶基因(Gen Bank Accession No.KF699529),基因片段长度为1 941 bp,包含一个54 bp的内含子。进一步利用RT-PCR法克隆了果糖基转移酶的c DNA,其编码628个氨基酸。将所得片段定向克隆到p ET-22b、p GAPZA及p GAPZαA载体,并转化至大肠杆菌或毕赤酵母中,通过筛选获得果糖基转移酶表达活力高的转化子。利用α信号肽的毕赤酵母转化子获得最高果糖基转移酶胞外酶活力为431 U/m L,是原始菌株酶活力的35倍。此毕赤酵母重组酶为同源二聚体,半天然PAGE表观分子量约200 k Da。以蔗糖为底物,果糖基转移酶在p H 5.0、45℃下反应4 h,酶解产物中主要是蔗果三糖和四糖,蔗果寡糖最高可占总质量的58%。结果表明,果糖基转移酶酵母工程菌具有很高的转果糖基的能力,而且表达活力高,具有潜在的工业应用价值。     

黑曲霉QU10果糖基转移酶的克隆表达

微生物果糖基转移酶能够以蔗糖为底物产生低聚果糖。为获得更多新酶资源,通过PCR法成功地克隆出黑曲霉QU10的果糖基转移酶基因(Gen Bank Accession No.KF699529),基因片段长度为1 941 bp,包含一个54 bp的内含子。进一步利用RT-PCR法克隆了果糖基转移酶的c DNA,其编码628个氨基酸。将所得片段定向克隆到p ET-22b、p GAPZA及p GAPZαA载体,并转化至大肠杆菌或毕赤酵母中,通过筛选获得果糖基转移酶表达活力高的转化子。利用α信号肽的毕赤酵母转化子获得最高果糖基转移酶胞外酶活力为431 U/m L,是原始菌株酶活力的35倍。此毕赤酵母重组酶为同源二聚体,半天然PAGE表观分子量约200 k Da。以蔗糖为底物,果糖基转移酶在p H 5.0、45℃下反应4 h,酶解产物中主要是蔗果三糖和四糖,蔗果寡糖最高可占总质量的58%。结果表明,果糖基转移酶酵母工程菌具有很高的转果糖基的能力,而且表达活力高,具有潜在的工业应用价值。     

HPLC-ELSD法测定枯草芽孢杆菌发酵液中葡萄糖、果糖和蔗糖含量

本文采用HPLC-ELSD法测定枯草芽孢杆菌(Bucillus subtilis)发酵液中葡萄糖、果糖和蔗糖的含量,结果发酵液中果糖、葡萄糖、蔗糖分别为0.36 mg/m L、0.60 mg/m L、31.36 mg/m L。通过计算,发酵液中蔗糖的转化率约为67.68%,该方法可以准确、灵敏、快速检测枯草芽孢杆菌(Bucillus subtilis)生物转化蔗糖为葡聚糖过程中底物浓度的变化。     

不同品种葡萄干中糖类成分分析

采用衍生化后GC-MS和HPLC-ELSD对新疆产8个品种葡萄干中糖类成分进行定性和定量分析。通过单因素实验考察提取温度、料液比、提取溶剂对糖类成分提取的影响。结果显示:经比对标准品在相同衍生化和GC-MS条件下的保留时间,8种葡萄干中共检出8种糖(果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、肌糖、麦芽糖、半乳糖、D-山梨糖醇)。在乙醇浓度50%,料液质量比1∶8,温度80℃的提取条件下葡萄干中糖的提取率最高。建立了对葡萄干中含量较高的果糖、葡萄糖、蔗糖进行定量检测的HPLC-ELSD方法,方法线性良好(R20.9992),精密度(RSD)2.0%,回收率92%~109%。8种葡萄干中除索索外,总含糖量均大于690 mg/g,果糖和葡萄糖在各品种葡萄干的糖含量中均占主导地位。     

青春双岐杆菌中β-呋喃果糖苷酶的提纯和一些性质

双岐杆菌是革兰氏阳性、不产芽孢的厌氧菌,主要存在于人和一些动物的肠道中,具有阻止有害细菌滋生和感染的作用。双岐杆菌能选择性水解低聚果糖,而哺乳动物的消化酶不能水解低聚果糖。 微生物中的β—呋喃果糖苷酶可分为两类,一类为蔗糖酶,它能水解蔗糖但不水解菊糖;另一类为外菊糖酶(β-果糖苷酶),它不仅水解蔗糖也能水解菊糖,它们对蔗糖和菊糖的活性比相差甚大。有些青春双岐杆菌提取物水解1-蔗果三糖的速度比蔗糖和菊糖快,并能从1-蔗果三糖产生果糖和蔗糖。青春双岐杆菌G-1菌株的提取物对1-蔗果三糖的活性很高,当底物浓度各为5mM时,它对1-蔗果三     

马克斯克鲁维酵母菌菊粉酶的异源表达及低聚果糖制备工艺优化

【目的】低聚果糖是新型的食品和保健品原料,具有广阔的市场需求。以菊粉酶水解菊粉制备低聚果糖的酶法工艺是先进的绿色制造。本研究旨在获得高产的菊粉酶菌株及以菊粉为原料酶法制备低聚果糖的优化工艺。【方法】采用基因工程手段克隆马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)的菊粉酶基因,实现其在毕赤酵母中的高效表达;测定菊粉酶在不同p H、温度、金属离子和底物浓度等条件下的酶活变化趋势,获得最佳的反应参数;通过高效液相色谱法检测水解产物,获得不同酶量水解产物各组分分布。【结果】菊粉酶工程菌株在10 L发酵罐中的产菊粉酶活达1 570 U/m L、蛋白质含量为2.75 g/L发酵液;菊粉酶最适反应参数为:在体积为1 L的反应体系中,p H 5.0、反应温度50°C、含0.2 mmol/L Mg2+以及菊粉浓度为8%。在该条件下,酶量为10 U时菊粉被完全水解。水解产物中单糖和二糖含量仅为9.25%,而低聚果糖(C3-C8)含量为90.75%,且C3-C5低聚果糖含量高达72.92%。【结论】克隆了K.marxianus菊粉酶基因并实现了高效表达,获得了水解菊粉制备低聚果糖的最佳工艺条件。为菊粉酶的大量生产及低聚果糖的酶法制备奠定了良好的基础。     

蔗果三糖及低聚果糖对T细胞分泌干扰素γ的调节作用CSCD

目的研究蔗果三糖及低聚果糖(fructooligosaccharides,FOS)对T细胞分泌干扰素(interferon-,IFN-γ^(+))的调节作用。方法从外周血单个核细胞分离培养T细胞。在培养基中添加5mg/mL的蔗果三糖或FOS并检测T细胞的诱导分化。平行设置空白对照。经过3d的原代培养或6d的原代及传代培养,采用流式细胞术检测IFN-γ^(+)T细胞的比例,酶联免疫吸附法测定细胞培养液的IFN-γ^(+)浓度。结果经过3d的原代培养,蔗果三糖组IFN-γ^(+)T细胞比例(47.8100%±4.8800%)显著高于FOS组(36.9600%±4.5800%,P=0.0002)或空白对照组(31.4000%±3.8900%,P=0.0001),蔗果三糖组细胞培养液的IFN-γ^(+)浓度(848.5100 ng/mL±269.0000ng/mL)也显著高于FOS组(357.8700ng/mL±87.3000ng/mL,P=0.0040)或空白对照组(283.5100ng/mL±76.0300ng/mL,P=0.0001);而且,经过6d的原代及传代培养,无论传代之后是否添加蔗果三糖与FOS,蔗果三糖组IFN-γ^(+)T细胞比例(32.0600%±5.2600%;31.7900%±4.8600%)始终显著高于FOS组(22.1300%±4.5400%,P=0.0078;21.8900%±4.4800%,P=0.0086)或空白对照组(18.6500%±2.6900%,P=0.0071;17.8300%±3.1300%,P=0.0074)。结论蔗果三糖有助于T细胞分化并促进T细胞分泌IFN-γ^(+)。     

响应面法对青稞红曲中两种Monacolin K的提取工艺优化

优化青稞红曲中两种Monacolin K的提取工艺,并建立其含量测定方法。在单因素试验基础上,利用Box-Benhnken中心组合试验及响应面分析法确定优化提取工艺,结合HPLC法以ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水(60∶40,v/v)为流动相,1.0 m L/min为流速,在238 nm处测定两种Monacolin K含量。所建立测定两种Monacolin K含量方法,线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率试验结果良好,最佳工艺条件为:提取溶剂纯甲醇,提取温度60℃,液固比20∶1 m L/g,超声提取1 h,酸型与内酯型Monacolin K得率分别为2.51 mg/g和1.65 mg/g,经验证所得模型方程能较好地预测实验结果。     

响应面法对青稞红曲中两种Monacolin K的提取工艺优化北大核心CSCD

优化青稞红曲中两种Monacolin K的提取工艺,并建立其含量测定方法。在单因素试验基础上,利用Box-Benhnken中心组合试验及响应面分析法确定优化提取工艺,结合HPLC法以ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水(60∶40,v/v)为流动相,1.0 m L/min为流速,在238 nm处测定两种Monacolin K含量。所建立测定两种Monacolin K含量方法,线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率试验结果良好,最佳工艺条件为:提取溶剂纯甲醇,提取温度60℃,液固比20∶1 m L/g,超声提取1 h,酸型与内酯型Monacolin K得率分别为2.51 mg/g和1.65 mg/g,经验证所得模型方程能较好地预测实验结果。     

玉米种子中4种可溶性糖含量UPLC-ELSD测定方法的优化及其应用

对比了HPLC-RID法和UPLC-ELSD法对果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖4种可溶性糖的检测。结果表明:UPLC-ELSD法的分离效果、重复性、灵敏度等比HPLC-RID法好,确定了UPLC-ELSD法测定4种糖含量的技术参数,即流动相为0.2%(w/v)三乙胺溶于75%(v/v)乙腈,流速为0.2 m L/min,柱温为35℃,上样量为2μL,在6 min内可以灵敏、快速地检测出果糖等4种可溶性糖。利用UPLC-ELSD法测定玉米种子吸胀过程中蔗糖、麦芽糖、葡萄糖和果糖4种可溶性糖的含量,结果表明:胚乳在吸胀之前,仅检出蔗糖、葡萄糖和果糖,其中蔗糖含量最高,随着种子吸胀,蔗糖含量先下降后上升,而葡萄糖和果糖逐渐增加,吸胀48 h时检出麦芽糖。胚在吸胀之前,4种可溶性糖均可以检测到,且含量均显著高于胚乳,在吸胀过程中4种糖的变化规律与胚乳相似。因此,在玉米种子吸胀过程中,可能先动员蔗糖分解成葡萄糖和果糖,再动员贮藏物质合成蔗糖、麦芽糖、葡萄糖和果糖,为种子萌发生长提供能量和中间物质。     

外源一氧化氮对盐胁迫下菊苣生长及渗透调节物质的影响

利用室内砂培实验,研究了外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP,0.2 mmol·L-1)对不同浓度NaC1(140和280 mmol·L-1)胁迫下菊苣(Cichorium intybus L.cv.Commander)幼苗生长及渗透调节物质的影响.结果表明:与空白对照相比,随着盐胁迫时间的延长(6 ～ 15 d),菊苣叶面积、叶长、叶宽以及叶相对含水量(RWC)明显降低,而脯氨酸含量则显著升高(P＜0.05).HPLC分析表明,根中果糖、葡萄糖和蔗糖含量表现为先升高后下降;1-蔗果三糖和蔗果四糖的含量在低盐胁迫下明显下降,而在高浓度盐胁迫下则有所升高.SNP预处理不仅缓解了盐胁迫对菊苣叶的生长和RWC的抑制,而且使脯氨酸含量和蔗果四糖含量急剧增加(P＜0.05),同时降低了果糖、葡萄糖和蔗糖的含量.这说明外源NO能通过增强菊苣幼苗的保水能力,促进渗透调节物质脯氨酸和果聚糖特别是蔗果四糖的生成而增强抵御盐胁迫的能力.     

配位体交换色谱法测定槐米废渣水解液单糖成分

利用生物质转化成糖研究近年来备受关注,为给工业化高效利用槐米废渣提供检测技术,本文建立了槐米废渣水解转化糖液中4种主要单糖的铅(Pb~(2+))配位体交换高效液相色谱分析方法并采用离子色谱法验证了方法的可行性;实验比较了Pb~(2+)和Ca~(2+)两种不同柱内抗衡离子对组分分离的影响,最终利用铅配体方法对实际样品进行了测试。方法分离柱采用Sepax Carbomix Pb-NP 5(300×7.8 mm ID,5μm,8%交联度)色谱柱,柱温75℃;流动相采用超纯水,流速0.50 m L/min;检测器采用示差折光检测器,检测器温度为30℃;样品采用活性炭固相萃取小柱脱除色素。结果表明,组分葡萄糖、木糖、半乳糖和阿拉伯糖在25 min内完成分离,在0.2~20.0 mg/m L浓度范围内呈现良好的线性关系,方法检测限在1.94~1.98μg/m L之间;槐米废渣水解液中阿拉伯糖平均含量大于67%,具有较高回收价值。方法样品前处理简便,重现性好,结果准确,测试成本低。     

菊芋粕菊粉的酶法提取、组成及抗氧化活性研究

本研究拟应用酶法提取技术解决菊芋菊粉工业化生产中的废弃物——菊芋粕再利用程度低的问题,并评价菊芋粕菊粉的抗氧化活性功效。对菊芋粕菊粉的果胶酶酶法提取的最佳条件通过响应面法进行了优化,并对菊芋初次水提菊粉(primary water-extracted inulin,PWI)和二次酶提菊粉(secondary enzymatic-extracted inulin,SEI)的组成成分和抗氧化活性进行了比较分析。响应面法优化确定的菊芋粕菊粉最佳酶法提取条件为:pH4.5、提取温度50 ℃、酶底比7.5 U/g、提取时间2 h,该提取方法所得菊芋粕菊粉的得率为35.30%±0.85%,与传统热水浸提法相比菊粉得率提高38.16%。组成分析结果显示,SEI的总糖和菊粉含量均显著高于PWI( P <0.05)。在菊粉聚合度方面,PWI中蔗果三糖和蔗果四糖含量较高,而SEI中蔗果五糖、蔗果六糖及其以上聚合度菊粉的含量较高。此外,SEI的抗氧化活性优于PWI。因此,果胶酶辅助提取方法有望为菊芋粕菊粉的再利用难题提供新的解决思路。     

粗柄羊肚菌菌丝体多糖及胞外多糖的提取工艺

为了研究粗柄羊肚菌菌丝体多糖及胞外多糖的最佳提取工艺条件,采用超声波提取菌丝体多糖、菌丝体发酵液浓缩提取胞外多糖的方法。通过单因素试验和L9(34)正交试验设计,探讨二者的最佳提取工艺条件。研究结果表明菌丝体多糖的最佳提取工艺条件:料液比1∶20(g∶m L),超声波处理温度70℃,超声时间20 min,超声提取次数2次;胞外多糖的最佳提取工艺条件:浓缩倍数1∶5,浓缩温度50℃,醇沉浓度95%,p H为6。该项工艺研究得到菌丝体粗多糖平均含量56.761 2 mg/g,胞外多糖平均含量1.275 4 mg/m L,多糖产量稳定,且此试验方法稳定可行。     

不同产地玛咖中酰胺含量分析

建立玛咖酰胺测定方法,测定不同产地玛咖切片中玛咖酰胺含量。采用HPLC法,色谱条件为Sepax Sapphire C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)流动相:乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B),梯度洗脱:0~15 min,90%~95%A;15~50 min,95%A。检测波长208 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温30℃。酰胺1、酰胺2、酰胺3分别在0.88~132μg/m L、0.85~128μg/m L、0.96~144μg/m L线性关系良好。酰胺1、酰胺2平均回收率分别为99.21%(RSD=1.64%)、98.59%(RSD=1.75%)。不同产地玛咖中玛咖酰胺含量差别较大,建立可靠、准确、重复性好的检测方法,有利于评价不同产地玛咖的质量。     

对叶百部药材中四种主要生物碱的分布规律

目的:了解百部药材中主要生物碱的含量和分布规律,为百部药材的质量控制提供依据。方法:采用反向HPLC-ELSD方法对百部药材中4种主要生物碱金刚大碱、百部新碱、新对叶百部碱和对叶百部碱的含量就行了测定,以0.1%三乙胺-甲醇(43∶57)为流动相,Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃,流速1m L/min;ELSD漂移管温度为80℃,氮气流速为2.1 m L/min,增益为8。结果:83批百部药材含金刚大碱、百部新碱、新对叶百部碱和对叶百部碱的药材分别有27、48、22和48批,其平均含量分别为1.98、4.75、3.73和5.34 mg/g;含有1~4种生物碱的药材分别有38、28、17和0批次,其中对叶百部碱与其余三种生物碱中任意一种同时出现的概率较高;购于安徽亳州和广州清平药市的药材不含新对叶百部碱。结论:本文建立的含量测定方法简便、准确、可靠;含量测定结果说明4种生物碱在药材中的分布具有趋单性,仅含一种生物碱的药材占45.8%,含2种及以上生物碱的药材占54.2%。本文研究结果对于对照品短缺情况下,对购买百部药材化学成分的预测具有一定的指导意义。