一种新型的高效液相色谱填料北大核心CSCD

以薯蓣皂苷为原料,1,6-己二异氰酸酯作为间隔臂,采用"一锅法",制备得到一种新型高效液相色谱填料——薯蓣皂苷键合硅胶固定相。通过固体核磁共振技术、红外光谱分析、元素分析、热重分析和电镜扫描等手段对自制的薯蓣皂苷键合硅胶固定相进行结构表征,确证薯蓣皂苷已键合至硅胶表面。采用该固定相,乙腈-水为流动相梯度洗脱,建立三七总皂苷原料药HPLC指纹图谱。以天然产物药用成分制备高效液相色谱填料,为液相色谱固定相制备提供新的思路,也为天然产物中有效成分的分离分析提供了新的途径。     

薯蓣皂苷及两种衍生固定相的制备、表征及性能评价

本研究采用"一锅法",制备薯蓣皂苷键合硅胶固定相(D),苯基异氰酸酯、3,5-二甲基苯基异氰酸酯分别对其衍生,制备苯基异氰酸酯-薯蓣皂苷键合硅胶固定相(Phe-D)和3,5-二甲基苯基异氰酸酯-薯蓣皂苷键合硅胶固定相(DMP-D)。采用元素分析、电镜、热重分析和红外光谱等手段对三种固定相进行结构表征。以苯同系物、多环芳烃等溶质为探针,初步考察了三种新型固定相的色谱性能。结果表明薯蓣皂苷配体已键合至硅胶基质上,根据元素分析结果,按照含碳量计算得到D的表面键合量为152.61μmol/g,Phe-D的表面键合量为140.68μmol/g,DMP-D的表面键合量为151.97μmol/g;薯蓣皂苷及其衍生物固定相的反相色谱性能类似于十八烷基键合硅胶固定相(ODS),分离原理与疏水性作用有关。该衍生化反应简便易行,有望为薯蓣皂苷及其衍生物功能化色谱固定相的大规模制备提供方法学参考。     

人参皂苷Rg_1键合硅胶固定相的制备、表征及应用(二)

采用"一锅法",以1,6-己二异氰酸酯作为间隔臂,制备了一种新型天然中草药药用成分键合固定相——人参皂苷Rg1键合硅胶固定相(250 mm×4.6 mm,5μm),以元素分析、热重分析和电镜扫描对自制的人参皂苷Rg1键合硅胶固定相进行表征。采用该固定相,建立三七总皂苷原料药的HPLC指纹图谱方法,乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温25℃,流速0.8 mL/min,进样量10μL。以人参皂苷Re色谱峰为参照峰,确定20个共有峰。10批三七总皂苷原料药指纹图谱相似度为0.882~0.999。以人参皂苷Rg1键合硅胶固定相分离三七总皂苷中的皂苷成分,为天然产物的分离分析提供新的思路。     

高效亲和色谱

1978年,Ohlson等首先提出了高效亲和色谱(High Performance Affinity Chromatogra-phy,简称HPAC或PHLAC)的概念。他们将6-氨基己基腺苷酸或抗人血清白蛋白的抗体做为亲和配体,连接到一种高效液相色谱填料——二醇基键合相硅胶上,分离乳酸脱氢酶与乙醇脱氢酶、牛血清白蛋白与人血清白蛋白,得到了较好的结果。例如可以在四分钟之内将结构很相似的人血清白蛋白与牛血清白蛋白完全分开。此后高效亲和色谱逐渐发展成一种为生物化学家密切注意的高效液相色谱方     

菌株YM32139转化黄山药生产薯蓣皂苷元的研究

选用菌株YM32139采用固体转化方式对中药材黄山药的根状茎进行微生物转化研究。根据形态、培养特征将菌株YM32139鉴定为微紫青霉(Penicillium janthinellum)。采用硅胶色谱技术对转化产物进行分离纯化,分离到化合物I;通过波谱分析鉴定单体结构,确定化合物I为薯蓣皂苷元(diosgenin)。通过薄层层析和高效液相色谱分析表明微紫青霉(YM32139)将黄山药中原来有效成分主要转化为化合物I(薯蓣皂苷元),测定其在转化产物中的百分含量为20.85%;同时表明转化后化合物种类增多。     

少根根霉原变种发酵生产薯蓣皂苷元

从穿龙薯蓣Dioscorea nipponica中分离得到的一少根根霉原变种Rhizopus arrhizus var. arrhizus菌株,能实现薯蓣皂苷的生物转化。用该菌株发酵穿龙薯蓣D. nipponica生产薯蓣皂苷元,采用高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元的含量,其总得率可达3.00%。运用该菌株发酵制备薯蓣皂苷元,操作简单,环保,且得率高。     

硅胶柱层析法从栀子中分离制备京尼平甙

采用硅胶柱层析法从中药山栀子中分离制备主要药效成分京尼平甙,色谱条件:常规柱(2.5×30cm),固定相:柱层析硅胶;流动相∶乙醇-石油醚(1∶5,1∶3)。样品通过薄层层析以及600~190nm波长扫描定性鉴定后,用高效液相色谱法(HPLC)检测纯度,结果表明纯度为97.6%。     

RP-HPLC分离制备桔梗皂苷

在对桔梗总皂苷粗分的基础上,利用制备高效液相色谱分离制备桔梗单体皂苷,共分离得到四个化合物,经波谱法分别鉴定为platycodinD（1）,platycoside E（2）,deapio-platycoside E（3）,未知化合物（4,鉴定中）,经HPLC分析,纯度均大于98％．对比以前的分离手段,该方法分离制备桔梗单体皂苷工艺简单,效率高,为在桔梗中寻找新的天然活性物质提供了新方法。     

莪术油中吉马酮的分离、纯化及结构鉴定

以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂,从莪术油中分离天然活性成分吉马酮,采用硅胶色谱柱进行粗分,然后以甲醇-水为流动相,通过半制备液相制备得到高纯度吉马酮,13C NMR、1H NMR进行结构确认;可以成功制备得到吉马酮,纯度约为99.0%。结果表明该法可从莪术油中分离得到高纯度的吉马酮,得率高,有一定的应用价值。     

基于UPLC-Q-TOF-MS法分析百合珠芽化学成分及其薯蓣皂苷元抗肿瘤活性研究

为建立超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)快速鉴定百合珠芽中10种化学成分的分析方法,并对薯蓣皂苷元进行抗肿瘤研究。实验采用Thermo Hypersil Gold C₁₈柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);乙腈(A)-0.5%乙酸(B)为流动相,梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI),正负离子同步监测。采用CCK8法进行薯蓣皂苷元抗肺肿瘤A549细胞、胃肿瘤HGC-27细胞的药效筛选。结果表明,通过二级高分辨质谱分析结合相关文献,共鉴定对香豆酸、薯蓣皂苷、槲皮素等10个化合物。药理研究显示,薯蓣皂苷元对肺癌A549细胞增殖只有微弱的抑制活性,而对胃癌HGC-27细胞增殖表现出较强的抑制作用。本试验证实UPLC-Q-TOF-MS/MS可从保留时间、紫外吸收光谱、精确相对分子质量、分子式和二级结构碎片等方面对百合珠芽的主要成分进行定性分析,为寻找百合珠芽中活性物质提供一种快速准确的分析方法,且揭示百合珠芽中鉴定得到的单体成分可能具有较强的抗肿瘤活性。     

柱色谱硅胶的应用

色谱硅胶通常分为薄层色谱、柱色谱和液相色谱（含高效液相色谱）固定相用硅胶,它们在对物质分离、分析的机理方面基本一致。近几年由于生物技术和生物制药技术的发展,柱色谱硅胶的应用普及迅速,本文针对柱色谱硅胶的应用进行讨论与分析。     

一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料结合质谱在蛋白质组学中的应用

为了提高蛋白质组的覆盖率,色谱分离将发挥重要作用,而色谱固定相更是关键.为此,本文采用"硫醇-烯"点击化学的方法制备了一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料,期望通过其对多肽混合物的高效分离提高蛋白质质谱鉴定的覆盖率.为了对制备的混合物模式色谱填料的性能进行评价和应用,首先采用小分子混合物对制备的混合模式色谱填料进行表征,结果表明,这种填料具有反相和弱阳离子交换两种分离机制;再用这种混合模式色谱填料分离6条疏水性和理论等电点不同的标准肽段混合物,可将这6条肽段完全分离,而经典的C18反相色谱柱则不能将它们完全分离,说明对于疏水性质相似的肽段,可以根据其等电点的差异得到更好的分离,且由于在反相基团与基质间嵌合了具有亲水性质的基团,减弱了固定相的疏水性质,从而减弱了强疏水性肽段的不可逆吸附的作用.最后将这种固定相用于全蛋白酶切物的混合模式色谱离线分离结合反相色谱-串联质谱分析,对100μg Hep-G2细胞全蛋白酶切物进行分析,共鉴定到5924个蛋白,表明这种混合模式的色谱填料可用于蛋白质组的分离分析中.     

超声波辅助薯蓣总皂苷苷键裂解工艺研究

研究了超声波辅助穿山龙薯蓣总皂苷苷键裂解的工艺条件。以薯蓣总皂苷的降解率和皂苷元的收率为考察指标,探讨了超声波影响薯蓣总皂苷苷键裂解的因素,并与常规的酸解法进行比较。得出超声波辅助薯蓣总皂苷苷键裂解的单因素优化条件:当薯蓣总皂苷的浓度固定时(1×10-2g/mL),乙醇溶液作为溶剂优于水,其最佳浓度为75%,用功率为800W超声波处理总皂苷的乙醇溶液120min效果较好。实验结果表明,与常规的酸解法相比,超声波辅助降解法具有时间短、能耗低、无污染等优点。     

黄山药的黑曲霉转化产物化学成分研究

研究黑曲霉YM33182(Aspergillus niger)对黄山药转化后,其转化产物的化学成分.采用固体发酵法对黄山药进行生物转化;通过高效液相分析(HPLC)转化前后的化合物种类和含量变化;利用反复硅胶色谱进行化合物分离纯化;通过光谱数据分析鉴定化合物结构.分离得到4个转化产物,分别鉴定为β-胡萝卜苷(dau-costerol,1),薯蓣皂甙元-α-L鼠李糖(1→4)-β-D葡萄糖甙(prosapogenin B,2),薯蓣皂甙元[-α-L鼠李糖(1→2)]-α-L鼠李糖(1→4)-β-D葡萄糖甙(Dioscin,3),薯蓣皂甙元[-α-L鼠李糖(1→2)]-β-D葡萄糖(1→3)-β-D葡萄糖甙(gracillin,4).HPLC分析表明,Prosapogenin B是原提取物不含有的成分,占转化产物的10.77%.     

内生真菌X1-2次级代谢产物研究

在从神农架地区特有植物内生真菌中寻找各种活性次级代谢产物的过程中,从濒危植物珙桐叶片中分离得到一株内生真菌X1-2。经过高效液相色谱(HPLC)和薄板色谱(TLC)分析其固体发酵产物多样性,通过正相硅胶柱层析、重结晶、高效液相色谱制备等手段纯化次级代谢产物,从该真菌中分离获得四个次级代谢产物。经核磁共振波谱(NMR),质谱(MS)等波谱学方法鉴定其结构,四个化合物分别为icosalide A1(1),militarinone A(2),(+)-N-deoxymilitarinone A(3),β-hydroxytetradecanoyl-β-hydroxyl tetraecanoyl-Rha-Rha-C_(14)-C_(14)(4),其中icosalide A1(1),militarinone A(2),(+)-N-deoxymilitarinone A(3)为三个复杂的生物碱类化合物,而化合物4是首次从真菌中获得。     

海洋链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1672及其代谢产物水杨酸的分离鉴定

从南海海洋沉积物中分离得到1株海洋放线菌,鉴定为链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1672。通过优化发酵条件,采用海虾生物致死活性和高效液相色谱追踪,利用有机溶剂萃取、正相硅胶、反相硅胶等各种色谱层析方法分离出活性化合物,通过波谱数据解析出海洋放线菌SCSIO 1672次级代谢产物中的该活性化合物为水杨酸。     

单棕榈酰莽草酸的高效液相色谱-蒸发光散射检测法定量测定

本文建立一种采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法定量测定单棕榈酰莽草酸的方法。色谱条件:色谱柱:反相Symmetry C18柱4.6×250 mm i.d.(填料粒度5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水-甲酸(80∶20∶0.2);流速0.8 mL/min;ELSD漂移管温度:80℃,载气流速:2 L/min。3-,4-和5-棕榈酰莽草酸纯品采用酶法合成,合成产物经柱层析和高效液相色谱制备纯化得到纯品。在该色谱条件下,3-,4-和5-棕榈酰莽草酸在0.21~4.12μg的范围内,其质量与其峰面积线性关系良好(r=0.9991,0.9998,0.9997),回收率分别为95.2~98.7%,96.1%~98.2%,96.3%~98.5%;RSD分别为1.6%,1.8%,1.9%。实验结果表明该方法具有简便、快速、准确、重现性较好的特点,可以用于定量分析单棕榈酰莽草酸,尤其适用于非水相酶促反应合成体系中的产物检测。     

穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量的动态分析

目的：对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的含量进行动态分析。方法：超临界CO2萃取技术提取,高效液相色谱法测定含量。结果：穿龙薯蓣根茎中花期薯蓣皂苷元含量最高为1．35％,枯萎期含量最低为1．03％。穿龙薯蓣地上部分不同生长时期均不合薯蓣皂苷元。结论：穿龙薯蓣根茎中花期薯蓣皂苷元含量最高,枯萎期含量最低。穿龙薯蓣地上部分不同生长时期均不合薯蓣皂苷元。     

线虫共生菌Xenorhabdus budapestensis SN19次生代谢产物的分离纯化与结构鉴定

采用硅胶柱层析、凝胶柱层析和半制备高效液相色谱技术对线虫共生菌Xenorhabdus budapestensis SN19的次生代谢产物进行分离纯化,得到2个单体化合物。通过波谱综合解析和文献数据对照分别鉴定为xenematides C(1)和xenematides E(2),其中化合物2为新化合物,化合物1对番茄灰霉病菌具有较强的抑制作用(EC50=22.71μg/m L)。     

糖的高效液相色谱分析研究——Ⅱ.木糖及若干β1→4低聚木糖的快速分离和测定

本文报告木糖和若干β-1→4低聚木糖的高效液相色谱,固定相分别采用国产氨基结合键固定相YWG-NH_2和进口氨基结合键固定相AMINO-SIL-X-1,流动相为乙腈-水(70:30),以示差折射检定器,在10分钟之内能快速和定量测定低聚木糖,它们是木二糖(X_2)、木三糖(X_3)、木四糖(X_4)、木五糖(X_5)、木六糖(X_6)和木七糖(X_7)。最小检测量为4nmol。其容量因子K'的对数值logK'与低聚糖的聚合度DP 呈良好的线性关系。