烟草提取物对十一种植物病原真菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法研究烟叶95%乙醇提取物和正己烷提取物对苹果腐烂病菌等11种植物病原真菌的抑菌活性,并通过液相色谱及气质联用色谱对烟叶提取物中多酚类、黄酮类、萜烯类等抑菌活性成分进行测定。实验结果表明,0.5 g/m L(工作浓度5 mg/m L)的两种溶剂提取物对11种病原真菌的菌丝生长均有抑制作用,其中对苹果腐烂病菌(V.mali)的抑制作用最强,且同浓度的正己烷提取物的抑菌活性优于95%乙醇提取物。根据不同材料提取物及几种纯物质溶液的抑菌特点,推测西柏三烯二醇可能是烟叶提取物中主要的抑菌活性物质。     

藓类提取物对植物病原真菌的抑菌性研究

以立枯丝核菌(Rhizoctonia)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、苹果轮纹病菌(Macrophoma kawatsukai)、梨黑星病菌(Fusicladium pirina)、草莓灰霉菌(Botrytis cinerea)等七种植物病原真菌为供试菌,通过生长速率法测定了24种藓类的乙醇提取物对病原真菌的抑制作用.结果表明,在提取物浓度为1.2mg干样/mL,大镰刀藓提取物对立枯丝核菌的抑制作用最强,抑菌率为67.8%.藓类提取物不仅对植物病原真菌有抑菌活性,而且还有多种藓类提取物对病原真菌菌丝有促进生长活性,如锐尖匍灯藓对立枯丝核菌菌丝生长的促进率为95.1%.选出大镰刀藓、扁灰藓、紫萼藓、山地水灰藓、疣小金发藓、橙色净口藓、锐尖匍灯藓和羊角藓对立枯丝核菌和灰霉菌的抑菌性或菌丝生长促进性进行了进一步研究,藓类提取物对病原菌的抑菌性或菌丝生长促进性在一定范围内随浓度的增加而增强,并且抑菌性随时间的延长呈下降趋势.     

Acremonium hansfordii,一中国新记录种及其抗植物病原真菌活性的研究

Acremonium hansfordii是中国一新记录种,在PDA平板上对多种植物病原真菌有很强的抑制作用。通过95%乙醇提取、YPR-Ⅱ型大孔吸附树脂吸附、乙酸乙酯萃取、沸点30-60℃石油醚沉淀等方法从Acremonium hansfordii菌丝体分离纯化出具有抗植物病原真菌活性的化合物枝顶孢素(acremonin),并得到结晶。acremonin对多种植物病原真菌都有抑制作用,其中对苹果腐烂病菌Valsa mali的IC50为0.095μg/mL,热稳定,121℃灭菌30min抑菌活性保留91.9%,pH4-9稳定。     

贝莱斯芽孢杆菌对果蔬土传病害的抑菌效果研究

本文以贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis CX-2为研究对象,采用平板对峙法测定其对辣椒疫霉病菌、香蕉枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜枯萎病菌4种果蔬土传病害病原真菌的抑菌效果,利用菌丝生长速率法进一步研究了其无菌发酵液及挥发性气体的抑菌作用,以及该菌的耐盐特性和产吲哚乙酸(IAA)能力。结果表明:CX-2菌株对4种病原真菌均有拮抗作用,对番茄早疫病菌发挥的抑菌作用最大,抑菌率达66.39%;CX-2菌株的无菌滤液和挥发性气体同样具有抑制病原真菌生长的作用,其中无菌滤液对4种病原真菌的抑菌率均在70%以上,挥发性气体对香蕉枯萎病菌抑菌效果最好,抑菌率为82.04%;CX-2菌株可在含盐量高达10%的LB平板上生长,耐盐性强;CX-2菌株的IAA产量为7.85 mg/L,可促进植物生长。     

黄麻链霉菌AUH-1发酵液的抗菌活性及其稳定性研究

旨在研究黄麻链霉菌AUH-1菌株发酵液的抗真菌活性,并明确温度、紫外线及pH等理化因素对活性物质稳定性的影响。以8种植物病原真菌为供试菌,采用抑制菌丝生长速率法测定发酵液的抗真菌活性,并以水稻纹枯病菌为指示菌,测定不同条件下发酵液的抑菌活性。抗真菌活性结果表明:AUH-1菌株发酵液对8种植物病原真菌均具有不同程度的抑制作用,其中对西瓜枯萎病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌以及辣椒疫病菌的抑制效率分别高达81%、78%、68%和67%以上。稳定性实验结果表明:AUH-1菌株所产抗真菌活性物质具有良好的热稳定性和紫外稳定性。可见,黄麻链霉菌AUH-1具有广谱拮抗作用,具备开发生物农药的良好应用前景。     

Acremonium hansfordii,一中国新记录种及其抗植物病原真菌活性的研究

Acremonium hansfordii是中国一新记录种,在PDA平板上对多种植物病原真菌有很强的抑制作用。通过95%乙醇提取、YPR-Ⅱ型大孔吸附树脂吸附、乙酸乙酯萃取、沸点30-60℃石油醚沉淀等方法从Acremonium hansfordii菌丝体分离纯化出具有抗植物病原真菌活性的化合物枝顶孢素(acremonin),并得到结晶。Acremonin对多种植物病原真菌都有抑制作用,其中对苹果腐烂病菌Valsa mali的IC50为0.095μg/mL,热稳定,121℃灭菌30min抑菌活性保留91.9%,pH4-9稳定。     

枯草芽孢杆菌TF26抗菌蛋白抑菌活性的初步研究

目的:研究枯草芽孢杆菌TF26抗菌蛋白的抑菌活性和生物稳定性,为菌株及抗菌蛋白的应用提供理论依据.方法:采用硫酸铵盐析方法提取抗菌蛋白,采用菌丝生长速率法检测其对13种植物病原真菌的抑菌活性,采用抑菌圈方法对其生物稳定性进行分析.结果:抗菌蛋白粗提物能够抑制13种植物病原真菌的生长,平皿抑制率为74.3％ ～91.3％,对葵花菌核病菌、番茄和黄瓜枯萎病菌、黄瓜菌核病菌和立枯病菌、水稻恶苗病菌和大豆根腐病菌抑制作用较强.抗菌蛋白在100℃以下,pH＜ 10范围内抑菌活性稳定,对紫外线照射不敏感,室温(20℃)和4℃储存150d抑菌活性稳定.结论:抗菌蛋白具有较强的热、酸碱、紫外和储存稳定性以及广谱的抑菌活性.     

毛筒壳科真菌次级代谢产物生物活性的评价

毛筒壳科Tubeufiaceae真菌具有产新结构、新活性次级代谢产物的潜力,目前对该科真菌次级代谢产物的研究较少。为了寻找具有生物活性的新化合物,有必要对毛筒壳科真菌次级代谢产物及其活性进行系统深入的研究。本文采用平板对峙法、生长速率法和MTT法,分别测定已分离得到的19株该科真菌活体菌株抑菌活性、发酵物抑菌活性以及发酵物粗提物对不同人体肿瘤细胞株增殖的抑制作用。通过平板对峙法,试验共筛选获得13株活性菌株,其中,红棕毛筒腔菌菌株Tubeufia rubra PF02-2对7种植物病原真菌有明显的抑菌效果,抑制率均高于60%且抑菌谱广。采用生长速率法,发现红棕毛筒腔菌菌株PF02-2经液体发酵后,发酵液对其中4种植物病原真菌仍有一定的抑制作用,且菌丝体部分的乙酸乙酯提取物对马铃薯早疫病病菌Alternaria solani（ZYB）的抑制效果最好。通过MTT法,发现发酵物粗提物对3种肿瘤细胞均具有不同程度的细胞毒活性,其中在300μg/mL时,剑叶莎毛筒腔菌菌株Tubeufia machaerinae ML03-2发酵液部分的乙酸乙酯提取物对人宫颈癌细胞株HeLa和人前列腺癌细胞株PC-3的抑制率（%）分别达到了98.92±0.15和97.86±0.18,在400μg/mL时,对人肝癌细胞株HEPG2的抑制率（%）达到了98.88±0.04;在500μg/mL时,明孢新旋卷孢菌菌株Neohelicosporium hyalosporum ML05-1菌丝体部分的乙酸乙酯提取物对人宫颈癌细胞株HeLa细胞的抑制率（%）为98.32±0.02,在600μg/mL时,对人肝癌细胞株HEPG2的抑制率（%）达到了97.62±0.20,在300μg/mL时,对人前列腺癌细胞株PC-3的抑制率（%）达到了98.91±0.02。该研究结果为开发利用毛筒壳科真菌提供了科学依据。     

羊耳菊抗菌物质及其抑菌特性分析

通过硅胶柱层析法,结合活性追踪,从羊耳菊中分离到1种对水稻纹枯病菌具有较强抑菌活性的化合物,经菌丝生长速率法测定,其抑菌中浓度为47 mg/L。通过分析氢谱和碳谱数据,该化合物被鉴定为百里香酚,具有耐热、耐酸碱、抗紫外光和荧光的特性。百里香酚对15种植物病原真菌和4种植物病原细菌具有抑制作用,其中对水稻纹枯病菌、茉莉枝枯病菌、烟草黑胫病菌、香蕉弯孢霉叶斑病菌、白菜软腐病菌和木薯细菌性枯萎病菌的抑菌活性较强。     

解淀粉芽孢杆菌BA-26抗菌物质分离及对灰葡萄孢抑菌作用研究

分析解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA-26发酵液中抑菌物质存在情况,明确活性物质的抑菌效果,初步探索其抗植物病原真菌的作用机制。通过硫酸铵沉淀、大孔树脂吸附及反相高效液相色谱法(RP-HPLC),从菌株BA-26的发酵液中分离纯化抗菌物质;采用平板对峙法检测抗菌物质抑菌活性;用二倍稀释法测定各活性组分的最小抑菌浓度(MIC),并研究其对菌丝和孢子萌发的影响。从菌株BA-26发酵液中获得抗菌粗提物抑菌谱广,对立枯丝核菌等多种植物病原真菌有强抑制作用;分离纯化得到11个具有抑制真菌作用的活性组分;其中A6-19和A6-20组分对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌活性最强,最小抑菌浓度为7.81μg/mL;菌株BA-26产生的抗真菌活性物质能使灰葡萄孢菌丝生长受阻、膨大变粗、细胞膜破坏并能抑制其孢子萌发。明确了解淀粉芽孢杆菌BA-26菌株产抗菌物质情况,初步探究其抑菌作用机制,为抗菌物质在防治病原真菌等方面的应用奠定基础。     

拮抗植物病原真菌链霉菌菌株ZH-356的鉴定及其生防评价

[目的]对实验室分离到的菌株ZH-356进行鉴定并评价其对植物病原真菌的生物防治效果,为研发针对植物真菌病害的生防菌剂提供理论指导。[方法]通过平板对峙法确定菌株ZH-356抗菌谱,并通过16S rRNA基因序列分析确定其种属,利用离体枝条的苹果树腐烂病菌感染预防试验和患腐烂病苹果树的防治试验评价其生防效果。[结果]菌株ZH-356鉴定为链霉菌属,与直丝紫链霉菌(Streptomyces rectiviolaceus)相似性最高,为99.71%。抗菌谱试验表明,菌株ZH-356对苹果树腐烂病菌、小麦赤霉病菌、小麦根腐病菌和番茄早疫病菌等多种植物病原真菌均具有较强的抑制作用,这种抑制作用可导致苹果树腐烂病菌菌丝变粗、交叉扭曲、分支变少且容易断裂。此外,ZH-356产生的抑菌活性物质对温度和酸碱度具有高度稳定性,并且该活性物质只存在于其胞内,只有当ZH-356遇到植物病原真菌时才会被分泌出来以抑制它们的生长。在离体枝条的苹果树腐烂病菌感染预防试验中,ZH-356对苹果树腐烂病防效可达94%以上,而在患腐烂病苹果树的防治试验中,ZH-356菌制剂对苹果树腐烂病的防效高达100%。[结论]链霉菌ZH-356抑菌谱广,对多种植物病原真菌均具有良好的拮抗活性,可作为防治植物真菌病害的生防菌株,为基于ZH-356菌株的生防菌剂的开发和防治苹果树腐烂病等植物真菌病害奠定了基础。     

撕裂蜡孔菌(Emmia lacerata)SR5抑菌特性及生防潜力评价

【背景】撕裂蜡孔菌(Emmia lacerata)是一种在世界范围内广泛分布的白腐真菌,对植物病原真菌有较好的抑制作用,可作为生防真菌进行开发和利用。【目的】对撕裂蜡孔菌SR5的抑菌能力和胞外产铁载体能力进行测定,挖掘其生防潜力。【方法】采用平板对峙法检测SR5对9种植物病原真菌的抑菌能力,并通过不同浓度的发酵原液测定真菌胞外代谢物的抑菌效果;结合铬天青S(chrome azurol S, CAS)检测法测定真菌产铁载体能力,明确SR5抑菌特性。【结果】SR5以过度生长的方式快速竞争营养和生存空间,拮抗9种植物病原真菌,抑菌率为23.7%–62.7%,对可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)的拮抗等级为Ⅳ级,而对其余8种病原真菌的拮抗等级为Ⅲ级,其中对香港丽赤壳(Calonectria hongkongensis)和间座壳(Diaporthe sp.)抑菌效果最佳;CAS检测法表明SR5能产生分泌型铁载体,产铁载体能力中等,最高铁载体活性单位(siderophore unit, SU)为44.1%。【结论】SR5以过度生长方式快速竞争营养和生存空间,而且以分泌...     

天然海鱼共附生放线菌抑菌和抗病毒活性筛选研究

从台湾海峡天然海鱼共附生微生物群落分离得到29株放线菌,通过抗病毒和抑菌活性筛选,分别得到6株对烟草花叶病毒和植物病原真菌具有较强抑制作用的天然菌株.其中,菌株030603对供试植物病原真菌拮抗作用尤为显著,其发酵产物具有广谱抑菌活性,可以作为广谱性植物病原真菌拮抗菌株进行生防菌产业化开发及发酵产物活性成分的化学研究.该菌株形态特征、培养特性、生理生化特性与微白黄链霉菌基本一致,16 S rDNA序列同源性达99.5 %.实验结果表明,利用天然海洋鱼类共附生微生物群落获取植物病原菌拮抗菌株具有取样便捷和活性菌株检出率高的特点.     

黄花倒水莲内生真菌生物活性评价及HNLF-44菌株鉴定

为充分开发黄花倒水莲(Polygala fallax)的内生真菌资源，获得具有抗植物病原真菌、抗氧化活性的内生真菌，该文以黄花倒水莲内生真菌为研究对象，使用平板对峙法检测内生真菌对6种植物病原真菌的抑菌活性，测定内生真菌发酵液的DPPH清除自由基能力和总还原能力，评价内生真菌的抗氧化活性，并对具有强抑菌活性和抗氧化活性的菌株进行形态和ITS鉴定。结果表明：(1)黄花倒水莲内生真菌中有2株内生真菌对香蕉专化尖孢镰刀菌、柑橘树脂病菌、叶点霉菌、香蕉具条叶斑病菌、茄病镰刀菌、三七根腐病菌具有明显的抑菌活性，抑菌率在50.3%～91.4%之间，其中HNLF-5对柑橘树脂病菌的抑菌率为73.2%,HNLF-44对香蕉专化尖孢镰刀菌抑菌率为91.4%。(2)内生真菌发酵液具有良好的抗氧化活性，DPPH清除率均在80%以上，总还原能力吸光值范围为0.279 2～0.748 8。(3)HNLF-44菌株为链格孢属真菌。该研究表明，药用植物黄花倒水莲内生真菌具有较好的生物活性，为后续从黄花倒水莲内生真菌中挖掘潜在新型抑菌活性和抗氧化活性物质奠定了基础。     

10种药用植物乙醇提取物的抑真菌活性研究

真菌病害是降低农作物产量和品质的最重要因素之一,严重威胁粮食安全.化学农药是防治真菌的有效手段,但长期不合理的使用,其弊端凸显;而采用植物代谢产物防治真菌病害是化学杀菌剂的理想替代品.因此,本研究采用菌丝生长速率法,检测了10种药用植物的乙醇提取物对9种植物病原真菌的抑制效果.结果表明姜黄、川芎、苦参乙醇提取物在1 000 g/mL浓度下对超过5种真菌(马铃薯晚疫菌、西瓜枯萎菌、小麦赤霉菌、水稻纹枯菌和苹果轮纹菌)的抑制率高于50%,显示出较高的抑菌活性.本研究发现姜黄、川芎、苦参具有广谱抑菌活性,抑菌活性成分值得进一步分离鉴定,为寻找天然产物抑真菌活性物质提供了参考依据.     

陕北野生甘草内生菌的分离及抑菌活性筛选

采用组织块分离法从陕北野生甘草根中分离出21株内生菌,其中细菌12株,真菌6株,放线菌3株.为明确内生菌代谢产物的抑菌活性,采用抑制菌丝生长速率法和组织测定法系统测定了其发酵液对植物病原真菌的抑制作用.结果表明,在离体条件下,甘草内生菌发酵液对供试的7种植物病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中Z4和F1菌株的发酵液对供试病原菌菌丝生长的抑制作用较强,特别是对苹果干腐病菌和烟草赤星病菌的抑制作用最强,抑制率分别可达92.36%、90.16%和91.20%、90.43%,EC50分别仅为54.38、90.31和57.50、89.58 mg·L-1;组织法测定中,发酵液稀释10倍后,Z4和F1菌株对苹果干腐病的保护作用分别为75.39%和73.13%,治疗效果分别为67.61%和60.75%.     

茅苍术挥发油对三种内生真菌及七种外源真菌的抑菌活性

为了研究宿主植物次级代谢产物对内生真菌生长的抑制作用,以药用植物茅苍术及其内生真菌为材料,采用有机溶剂萃取法提取茅苍术挥发油,应用滤纸片扩散法和平板涂布法研究茅苍术挥发油对茅苍术内生真菌及其他外源真菌的抑菌作用.结果表明: 挥发油对3种内生真菌生长具有抑制作用;对酵母、水霉有很强的抑菌活性;对根霉、犁头霉抑菌作用不明显;对绿色木霉、黑曲霉的产孢具有抑制作用;对疫霉生长无抑制作用.在高浓度挥发油胁迫下,内生真菌菌丝分支增多,分支间距离变短,气生菌丝生长受到抑制.两种内生真菌对挥发油具有代谢转化能力,降低了其主要成分的含量.表明茅苍术挥发油对内生真菌生长具有限制作用,但内生真菌能够通过自身分解代谢适应茅苍术挥发油.     

元江仙人掌植物内生真菌的抑菌活性筛选研究

从云南元江野生仙人掌的肉质茎中分离出28株内生真菌,经形态学分类鉴定归于3个目,3个科,10个属。同时选择30种病原微生物作为指示菌进行抑菌试验,研究其抑菌活性。结果表明,3株元江仙人掌内生真菌分别对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌多种病原微生物有较为明显的抑制生长作用。     

20种植物提取物抑制植物病原菌活性研究

以小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)、番茄灰霉病菌(Alternaria solani)这两种植物病原真菌为供试菌,对采自江西省吉安市的20种植物提取物的抑制菌丝生长活性及孢子萌发进行测定.结果表明,在供试质量浓度为1 mg/mL时,黄花草木樨乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分抑菌效果最好,对小麦纹枯病菌和番茄灰霉病菌两种菌的抑制率均达100%;窃衣、小白酒草、羊蹄和车前草的抑制作用次之,对两种菌的抑制率均大于80%;单从对一种病原菌的抑制作用看,还有黄荆对小麦纹枯病菌率为100%,空心莲子草、窃衣、小白酒草和鬼针草对番茄灰霉病菌的抑制率为100%,但是,这20种供试植物的石油醚相和水相萃取物对两种病原真菌的抑制效果均不强.抑制病原菌孢子萌发亦得到类似结果.以上结果提示植物抑菌活性成分主要存在于乙酸乙酯萃取部分,黄花草木樨、窃衣、小白酒草等的提取物作为植物源杀菌剂值得进一步研究.     

侧柏乙醇提取物对21种植物病原真菌的抑菌活性

采用菌丝生长速率法测定了侧柏(Platycladus orientalis)叶、小枝、球果和种子4个不同部位乙醇提取物对21种植物病原真菌的抑菌活性。结果显示:(1)在供试浓度为50g/L(相当于干样)时,侧柏各部位乙醇提取物对4种供试植物病原真菌均具有较好抑制作用,其中侧柏叶提取物的抑菌效果最好,对供试葡萄白腐病菌(Conio-thyrium diplodiella)、葡萄黑痘病菌(Elsinoe ampelina)、番茄绵腐病菌(Phytophthora melongenae)和青霉病菌(Penicilliu mexpansum)的EC50分别为:5.424、3.186、8.913和19.000g/L。(2)侧柏叶乙醇提取物的石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物抑菌活性均较好,在供试浓度为0.5g/L时,石油醚萃取物对苹果腐烂病菌(Valsa mali)和葡萄黑痘病菌(E.ampelina)的抑菌率分别为80.35%和60.23%;乙酸乙酯萃取物对以上2种植物病原菌的抑菌率分别为81.88%和64.06%。结果表明:侧柏叶、小枝、球果和种子乙醇提取物均具有一定抑菌活性,叶乙醇提取物的活性最好,活性成分主要集中在石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物中。