传统中药补肾固筋方对膝骨性关节炎IL-1、TNF-α的作用机制

目的观察补肾固筋方对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)血清及关节液IL-1、TNF-α的表达影响及调节机制。方法新西兰兔76只,随机分为正常组、模型组、西药组、中药组,除正常组外均用改良Hulth法造,取血清及膝关节前方部分滑膜组织、股骨内髁关节软骨及软骨下骨,ELISA法IL-1、TNF-α含量。结果西药组关节间隙狭窄,介于模型组和中药组之间,关节面粗糙,骨赘明显;中药组关节间隙稍窄,关节面稍粗糙伴轻微骨赘。模型组血清及关节液IL-1、TNF-α含量比正常组升高(P0.01)。两个给药组血清及关节液IL-1、TNF-α含量比模型组降低(P0.01),两给药组之间差异无显著性。结论补肾固筋方通过降低骨关节炎中IL-1、TNF-α的分泌水平促进软骨修复,为临床应用提供科学的实验依据。     

白花丹止痛喷雾剂对兔膝骨关节炎软骨组织病理形态及TNF-α、IL-6、MDA、SOD的影响

本研究旨在用膝骨关节炎新西兰兔模型,观察白花丹止痛喷雾剂对关节软骨组织形态学改变及炎性细胞因子、自由基表达的影响,探讨白花丹及其新式外用方法在骨性关节炎中作用,为其临床应用提供相应的药效基础。采用Muehleman木瓜蛋白酶膝关节腔内注射法造模,随机分为正常组、模型组、扶他林组、白花丹喷雾剂高、中、低剂量组(分别为2、1、0.5 mg/m L),给药6周后,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的含量;关节滑膜组织匀浆作丙二醛(MDA,TBA法)、总超氧化物歧化酶(SOD,羟胺法)检测;取胫骨平台关节软骨制作石蜡切片,并行HE染色及甲苯胺蓝染色观察,以改良Mankin's标准进行评分。结果表明白花丹止痛喷雾剂可有效降低新西兰兔膝关节炎模型血清炎性因子TNF-α、IL-6值(P0.05);并有效降低滑膜MDA值、升高SOD值(P0.05);有效降低新西兰兔膝关节炎模型的平均关节炎指数(P0.05);且高、中剂量组在软骨结构、软骨细胞、甲苯胺蓝基质染色、潮线的完整性等项目评分中均优于扶他林组(P0.01或P0.05)。由此提示,白花丹止痛喷雾剂可有效抑制骨关节炎的发展,改善膝关节软骨组织病理形态,并能抑制炎性因子,同时可抗氧化,进而起到治疗作用。     

柚皮苷对骨关节炎软骨破坏的保护作用研究

目的:考察柚皮苷对骨关节炎软骨破坏的保护作用。方法:将60只7周龄雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和柚皮苷组,每组20只。模型组和柚皮苷组大鼠通过切断右膝关节的前交叉韧带建立骨关节炎模型,建模后,柚皮苷组大鼠每天灌胃200mg/kg的柚皮苷溶液,共灌胃4周。通过番红O/固绿染色和OARSI评分评估大鼠的关节软骨损伤程度。通过免疫组织化学染色检测软骨组织中p-IκBα和NLRP3的表达。通过用IL-1β体外诱导SW1353细胞来模拟骨关节炎软骨细胞的病理微环境,并分别应用NF-κB抑制剂(PDTC)或NLRP3抑制剂(CY-09)处理SW1353细胞。通过RT-PCR和Western blot检测细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-6、IL-10、IL-18、MMP13和ADAMTS-5的表达。通过Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:与模型组相比,柚皮苷组的OARSI评分显著降低(2.63 vs 0.94,P0.05)。柚皮苷组的p-IκBα和NLRP3蛋白表达水平显著低于模型组(P0.05)。与IL-1β组相比,IL-1β+柚皮苷组的SW1353细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-6、IL-18、MMP13和ADAMTS-5的表达水平均显著降低,而IL-10显著升高(P0.05)。PDTC和CY-09对NF-κB和NLRP3信号通路相关分子的调控作用与柚皮苷一致。与IL-1β组相比,IL-1β+柚皮苷组、IL-1β+PDTC组和IL-1β+CY-09组的细胞凋亡率均显著降低(P0.05)。结论:柚皮苷可在体内和体外抑制骨关节炎的进展,柚皮苷对骨关节炎的治疗作用部分依赖于对NF-κB和NLRP3信号通路的抑制。     

液泡分选蛋白4B对骨关节炎软骨细胞凋亡的调控作用

目的:探讨液泡分选蛋白4B(VPS4B)对骨关节炎软骨细胞凋亡的调控作用。方法:通过内侧半月板部分切除加前交叉韧带切断的方法建立骨关节炎SD大鼠模型,通过RT-PCR和免疫组化检测VPS4B在大鼠关节软骨中的表达。番红O/固绿染色方法检测大鼠膝关节软骨组织形态变化。通过用10 ng/mL的IL-1β诱导人软骨肉瘤细胞SW1353 24 h来模拟骨关节炎样软骨细胞损伤,Western blot检测SW1353细胞中VPS4B、凋亡相关因子(cleaved caspase-3和cleaved PARP)和磷酸化p38的表达。转染si-RNA敲低SW1353细胞中VPS4B表达,并评估其对IL-1β诱导的SW1353细胞凋亡标记和p38 MAPK信号通路的影响。膜联蛋白V (Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色用于检测软骨细胞凋亡。结果:VPS4B在模型组大鼠的关节软骨中明显上调(P0.05)。IL-1β诱导24 h后,SW1353细胞中的VPS4B、cleaved caspase-3、cleaved PARP和p-p38蛋白表达水平均明显增加。而转染VPS4B-si RNA敲低VPS4B的表达后,cleaved caspase-3、cleaved PARP和p-p38蛋白表达水平均被抑制,并且抑制了IL-1β诱导细胞的凋亡率。结论:VPS4B在骨关节炎发病过程中明显上调,VPS4B的上调通过激活p38 MAPK信号通路来促进软骨细胞凋亡。     

聚己内酯/柚皮素纳米纤维膜对白介素1β诱导的体外骨关节炎的作用研究

目的探讨聚己内酯(PCL)/柚皮素纳米纤维膜对白介素1β(IL-1β)诱导SD大鼠软骨细胞退行性变修复作用。方法使用静电纺丝技术分别制作PCL纳米纤维膜,PCL/柚皮素纳米纤维膜,使用扫描电子显微镜(SEM)观察纳米纤维膜的表征。提取3～5 d的SD大鼠软骨细胞,分为空白对照组、骨关节炎(OA)组、骨关节炎加PCL(OA+PCL)组、骨关节炎加PCL/柚皮素(OA+PCL/柚皮素)组,分别处理24 h后进行CCK-8实验检测各组SD大鼠软骨细胞的增殖情况,并进行活/死细胞染色,观察各组SD大鼠软骨细胞的毒性。提取各组SD大鼠软骨细胞的总RNA,使用qRT-PCR检测炎症及软骨标志基因的表达。结果与OA组相比,PCL/柚皮素纳米纤维膜组大鼠的细胞活性较高,细胞数量明显增多,炎症标志基因表达明显降低,软骨标志基因表达明显增高(均P0.05)。结论 PCL/柚皮素能降低IL-1β诱导的SD大鼠体外骨关节炎症标志基因的表达,对SD大鼠关节炎有一定治疗作用,且能上调关节炎细胞中软骨标志基因COL2a1的表达。     

不同频率的振动训练对大鼠早期膝骨关节炎关节软骨的修复作用及其JNK/NF-κB、SOX9机制*

目的: 探讨不同频率的振动训练对大鼠早期膝骨关节炎关节软骨的修复作用及其JNK/NF-κB、SOX9的机制。方法: 成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):模型对照组(MC组),高频振动1组(GP₁组,频率60 Hz),高频振动2组(GP₂组,频率40 Hz)、中频振动组(ZP组,频率20 Hz)和低频振动组(DP组,频率10 Hz),正常对照组(NC组)。除正常组外,各组大鼠经第1、4、7日双后腿膝关节腔注射2%木瓜蛋白酶溶液和L-半胱氨酸混合液6周后建立早期膝骨关节炎模型后,对振动组大鼠双膝进行4周,每天 40 min,振幅2~5 mm,每周振动5 d的训练。4周后,检测双膝关节股骨外侧髁关节软骨HE染色、番红O染色和Mankin评分形态学观察,股骨内侧髁关节软骨RT-qPCR检测JNK、NF-κB p65、SOX9 mRNA,Western blot 检测JNK、NF-κB p65、SOX9蛋白表达。结果: 与NC比较,其余各组Mankin评分均显著增高(P＜0.01),与MC相比,各振动组Mankin评分均显著降低(P＜0.05),其JNK、NF-κB p65mRNA和蛋白质表达显著降低(P＜0.01),SOX9mRNA和蛋白质表达显著升高(P＜0.01);与高频组相比,低频组的Mankin评分,JNK、NF-κB p65mRNA和蛋白质表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),而SOX9mRNA和蛋白质表达则显著升高(P＜0.05,P＜0.01)。结论: 不同频率的振动训练对早期膝骨关节炎关节软骨可表现出不同程度的修复效应,低频振动训练软骨修复优于高频振动。可能通过下调关节软骨JNK/NF-κB表达,提高SOX9活性来调控胶原合成。     

宽筋藤对类风湿性关节炎模型大鼠踝关节组织病理学的影响

为了观察宽筋藤对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠踝关节组织病理改变的影响,除正常组外,其余各组大鼠足跖皮内注射CFA致AA大鼠模型,将模型大鼠随机分成模型组、宽筋藤高剂量组、宽筋藤中剂量组、宽筋藤低剂量组、阳性药物组,灌胃给药20 d,观察各组大鼠继发侧足爪肿胀度及踝关节滑膜、软骨、关节腔、周围软组织炎症反应等组织病理改变情况,进行综合评分。实验结果表明,与模型组比较,宽筋藤能减轻AA大鼠关节肿胀程度,并显著抑制炎症细胞的浸润和滑膜增生以及血管翳的形成,减轻软骨及骨质损伤程度(P0.05或P0.01)。实验证明,宽筋藤可显著改善AA大鼠关节组织病理改变。     

美洛昔康对Aβ诱导Alzheimer’s disease大鼠脑内炎症损伤的影响

目的：研究美洛昔康对β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠脑内炎症损伤的保护作用,并探讨其抑制炎症作用的机制。方法：Aβ1-40海马注射建立AD大鼠模型。免疫组化法观察大鼠海马核因子κBp65（NF-κBp65）和星形胶质细胞（AS）胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达变化;Western-blot法测定大鼠皮层组织GFAP的表达;ELISA法检测大鼠皮层组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平变化;RT-PCR法检测大鼠海马组织白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA的表达情况。结果：美洛昔康能抑制AD大鼠海马NF-κBp65和GFAP的表达;降低大鼠皮层TNF-α的含量;抑制AD大鼠海马IL-1βmRNA的表达。结论：美洛昔康通过减少AD模型大鼠海马、皮层组织GFAP表达,抑制AS的增生,降低NF-κBp65的活性,减少炎症因子TNF-α和IL-1β的水平,减轻脑内炎症反应。     

帕瑞昔布对骨关节炎大鼠软骨细胞的影响*

目的:探究帕瑞昔布对骨关节炎大鼠软骨细胞形态、数量及TNF-α/NF-κB信号通路在其中的作用。方法:将所选取的大鼠随机分组,第一组,模型组(MO组):该组大鼠制作骨关节炎大鼠模型;第二组,假手术组(SS组):该组大鼠在骨关节做切口后不做任何处理;第三组,治疗组(TR组):该组大鼠制作骨关节炎模型后给予帕瑞昔布进行治疗,每组5只。通过cck-8法、Western blot法、qRT-PCR法、HE染色法、OARSI评分分别检测三组大鼠软骨细胞增殖情况、TNF-α/NF-κB的蛋白表达、TNF-α/NF-κB mRNA的表达水平、软骨组织病变程度。结果:与SS组大鼠比较,MO组和TR组关节软组织细胞增殖虽然均显著减少(P＜0.05),但TR组的增殖显著高于MO组。同样TR组的软骨组织结构好于MO组,OARSI评分显著低于MO组(P＜0.05);与SS组大鼠比较, MO组和TR组大鼠TNF-α和NF-κB的蛋白与基因表达水平虽然均显著高于SS组,但TR组的相应蛋白与基因表达水平显著低于MO组(P＜0.05)。结论:帕瑞昔布可能通过抑制TNF-α/NF-κB信号通路的表达对骨关节炎大鼠起到治疗作用。     

抑制Notch信号通路减少大鼠膝骨关节炎关节软骨内MMP-13的上调和Col Ⅱ的降低

目的研究抑制Notch信号通路对大鼠膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)进展的影响。方法以前交叉韧带切断术建立大鼠膝骨关节炎模型,膝关节腔注射Notch信号通路抑制剂(2S)-N-[N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-2-苯基甘氨酸叔丁酯{(2S)-N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-2-phenylglycine tert-butyl ester,DAPT}进行干预,用HE染色法检测膝骨关节炎组织病理学变化,以免疫组织化学染色分析膝关节软骨内基质金属蛋白-13(matrix metalloproteinases-13,MMP-13)以及Ⅱ型胶原蛋白(type II collagen,Col II)表达情况。结果膝骨关节炎关节软骨出现明显组织学损害,MMP-13免疫反应性明显增强,Ⅱ型胶原蛋白免疫反应性明显降低;膝关节腔注射Notch信号通路抑制剂DAPT明显抑制膝骨关节炎关节软骨的组织学损害、MMP-13免疫反应性的增强和Ⅱ型胶原蛋白免疫反应性的降低。结论抑制Notch信号通路可通过抑制骨关节炎关节软骨内MMP-13水平的上调、减少Ⅱ型胶原蛋白的破坏而减轻骨关节炎。     

冠盖藤水提物对大鼠膝骨性关节炎COX_2、NO、iONS表达及关节组织形态学的影响

研究冠盖藤水提物对膝骨性关节炎大鼠血液及关节液COX2、NO、iONS含量的影响。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性组(硫酸氨基葡萄糖组)、冠盖藤中、高剂量组,制备4%木瓜蛋白酶溶液与0.3 mol/L半胱氨酸溶液(1∶1)的混合液,分别于第1、3、7 d注入SD大鼠右膝关节造模,每次20μL。冠盖藤中、高剂量组以4.62 g生药/kg、9.24 g生药/kg,阳性组以0.133 mg/kg硫酸氨基葡萄糖分别灌胃,正常对照组和模型组分别予以等量蒸馏水;连续给药4周后,进行指标测定。与模型组比较,冠盖藤中、高剂量组血液及关节液中COX2、iONS、NO含量明显降低,能有效抑制关节软骨组织形态的改变,间接保护软骨细胞和促进受损软骨细胞恢复的作用。冠盖藤能有效抑制关节液中COX2、NO、iONS表达,保护软骨细胞和促进受损软骨细胞恢复的作用,是延缓关节软骨退变的机制之一。     

膝骨关节炎患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF的表达及与病情进展的关系

目的:研究膝骨关节炎(KOA)患者关节液和滑膜中白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及与病情进展的关系。方法:选择自2017年1月到2017年6月在我院就诊的KOA患者30例进行研究,其中维吾尔族和汉族各15例,分别记为维吾尔族组和汉族组。另选同期在我院接受骨折修复和截肢等手术治疗的10例无骨关节炎的患者作为对照组。对比各组IL-6、MMP-13及VEGF水平以及关节软骨中水通道蛋白3(AQP3)阳性表达率,对比维吾尔族组和汉族组软骨不同区域内AQP3阳性表达,分析KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF及关节软骨中AQP3的阳性表达与病情进展的相关性。结果:维吾尔族组和汉族组关节液和滑膜中IL-6、MMP-13及VEGF水平均分别高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。维吾尔族组和汉族组关节软骨中AQP3阳性表达率均分别明显高于对照组,且维吾尔族组明显高于汉族组,差异均有统计学意义(均P0.05)。维吾尔族组和汉族组浅层软骨磨损严重区的AQP3阳性表达率明显高于软骨深层区和软骨下骨区,差异均有统计学意义(均P0.05)。Spearman相关性分析显示,KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF及关节软骨中AQP3的阳性表达与病情进展均呈正相关(均P0.05)。结论:KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF水平及关节软骨中AQP3阳性表达均异常升高,以上指标参与了病情的进展,且AQP3阳性表达高低还与民族有关,临床上可考虑将这些指标作为监测KOA患者病情的靶点。     

二烯丙基二硫对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞的影响,除空白对照组外,其余各组加入IL-1β(10 ng/m L)诱导24 h后换DADS处理,通过CCK8实验、平板克隆实验检测增殖能力,Western blot实验检测MMP13、TIMP1和CollagenⅡ蛋白表达水平。结果发现:12.5和25μmol/L DADS对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞有增殖作用(P0.05),50和100μmol/L DADS对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞有抑制作用(P0.05);12.5和25μmol/L DADS显著增加IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞克隆集落形成能力(P0.05),50μmol/L DADS显著抑制IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞克隆集落形成能力(P0.05);DADS能显著抑制MMP13的表达,增加TIMP1和CollagenⅡ的表达。以上结果提示DADS对IL-1β诱导SD大鼠关节软骨细胞具有双向调节作用,25μmol/L DADS保护关节软骨细胞的分子机制可能与DADS显著抑制MMP13的表达,增加TIMP1和CollagenⅡ的表达相关。     

关节腔注射强力霉素对兔膝骨关节炎模型的影响

目的:研究关节腔内注射强力霉素对兔制动性骨关节炎模型的影响.方法:30只新西兰大白兔随机分成正常组6只及实验组24只,试验组左膝关节伸直位石膏固定4周随机选取6只处死左膝关节取材证实造模成功后剩余18只为左膝骨关节炎模型,随机分为治疗组、阴性对照组和模型对照组,治疗组每日给予1.33%的强力霉素0.3毫升左膝关节腔内注射,阴性对照组每日给予生理盐水0.3毫升左膝关节腔注射,模型对照组不做处理,于8周处死取材.观察指标包括关节软骨大体形态,软骨Mankin's评分,软骨细胞基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达及滑膜细胞白介素-1(IL-1)表达.结果:强力霉素治疗组软骨面退变明显轻于模型组及生理盐水对照组,软骨大体评分,Mankin评分,MMP-3表达及滑膜IL-1表达亦显著降低.结论:强力霉素关节腔内注射对兔制动性骨关节炎模型软骨退变有明显的缓解作用.     

右归丸对大鼠膝骨关节炎的干预作用及其机制*

目的: 探讨右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠关节软骨组织骨诱导因子(OGN)、骨黏连蛋白(ON)和纤维蛋白原2(FBN2)的影响。方法: 将大鼠随机分为假手术组,模型组,硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖),右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别灌胃给予右归丸4.8,2.4,1.2 g/kg,硫酸氨基葡萄糖组灌胃给予硫酸氨基葡萄糖 0.17 g/kg,连续给药8周。干预结束24 h后取鼠膝关节软骨,采用HE染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中OGN、ON和FBN2的表达;Western blot法检测各组关节软骨组中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达。结果: 与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin 评分显著升高,软骨组织FBN2蛋白表达水平上显著增加,OGN、ON和GSK-3β蛋白表达水平上的显著降低(P＜0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin 评分和FBN2蛋白表达水平显著降低,GSK-3β蛋白表达水平上显著增加,且右归丸中、高剂量组OGN、ON蛋白表达水平均显著增加(P＜0.05或P＜0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论: 右归丸能够延缓关节软骨退变,其可能机制是通过提高骨诱导因子和骨粘连蛋白的表达水平来促进关节软骨的骨化和重构。     

关节软骨与软骨下骨改变在不同骨关节炎动物模型中的特点

目的 探讨不同骨关节炎(osteoarthritis,OA)动物模型中软骨下骨和关节软骨的病理改变特征。方法 采用三种SD大鼠骨关节炎模型,将24只6月龄雌性大鼠随机分为4组:假手术对照组(Sham,n=6),前交叉韧带切除手术组(ACLT,n=6),木瓜蛋白酶关节腔注射组(Papain,n=6),以及卵巢切除术组(OVX,n=6)。造模后8周取膝关节,胫骨平台行Micro-CT扫描分析,关节软骨行甲苯胺蓝染色、Mankin评分,比较软骨下骨和关节软骨改变情况。结果 造模操作后8周,不同OA模型的软骨破坏程度有所不同。ACLT和Papain组软骨破坏比较严重,OVX组软骨变化较轻。所有OA模型中的软骨下松质骨均发生改变,OVX组相对于Sham对照组,软骨下骨微结构显著疏松,而ACLT组与Papain组相对于Sham对照组,软骨下骨微结构没有显著改变,但相对于OVX组,有显著性差异。三种OA模型的软骨下骨板厚度都较Sham组减少。结论 三种动物模型软骨下骨和关节软骨都发生明显病理改变,并且改变有所不同。不同OA模型代表不同病理,预示着软骨下骨所发挥的作用有所不同,这为进一步研究不同类型OA发生发展的机制,以及将软骨下骨作为OA治疗的可能靶点提供了更多的依据。     

白介素-1β诱导关节软骨细胞凋亡的分子机理

骨关节炎(OA)是一种退行性病变,表现为局限性、进行性关节软骨破坏及关节边缘骨赘形成,并伴有不同程度的滑膜炎症。软骨细胞是成熟关节软骨中唯一的细胞类型,它负责细胞外基质的合成和更新,并维持基质的完整。目前OA的发病机制尚不明确,但越来越多的研究发现致炎细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)起着重要的作用。IL-1β能诱导软骨细胞凋亡,其机制有一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)和丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)等途径。IL-1β也是OA病变进展中破坏软骨细胞代谢平衡的主要细胞因子之一。对IL-1β诱导关节软骨细胞凋亡的分子机理的深入研究,将有助于新药的研发和骨关节病的治疗。     

低强度激光联合照射犊鼻穴和口咽部对膝骨关节炎兔细胞因子IL-1β及TNF-α的影响

目的：探讨携带针灸补泻信息的激光联合多部位照射对膝骨关节炎兔血清和关节液中细胞因子的影响。方法：40只新西兰兔随机分成对照组、模型组、穴位照射组和联合照射组。兔左侧膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成关节炎的病理模型,穴位照射组和联合照射组分别以低能量激光（输出功率10—20mW）连续照射犊鼻穴和携带针灸补泻信息的脉冲激光联合照射口咽部及犊鼻穴,10min／d,5d为1个疗程,连续3个疗程。采用放射免疫的方法测定血清及关节液中相关细胞因子含量的变化,常规病理学切片观察膝关节软骨组织形态学变化。结果：与对照组比较,模型组血清和关节液中IL-1B及TNF—α含量均显著升高（P〈0．01）;与模型组比较,穴位照射组和联合照射组血清和关节液中IL-1β及TNF—α含量均下降,但以联合照射组效果显著（P〈0．05）;穴位照射组和联合照射组之间的IL-1B及TNF-饯含量未表现出显著性差异（P〉0．05）。结论：激光联合照射口咽部和犊鼻穴和激光照射犊鼻穴都能减少细胞因子IL-1β及TNF-α的生成,减轻关节软骨细胞的结构损伤,起到保护关节软骨、防治骨性关节炎的作用,但联合多部位照射效果优于单独穴位照射。     

2型糖尿病模型大鼠胰岛β细胞损伤和益气养阴化痰祛瘀方的保护作用及机制

为探查2型糖尿病中医证候模型大鼠(Rattus norvegicus)胰岛细胞损伤机制和中医因证治方的保护作用,采用雄性SD大鼠给予高脂高糖联合小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)注射的方法复制2型糖尿病气阴二虚痰瘀证模型.将成模后4周的大鼠分为模型组、西药组(盐酸吡格列酮)和中药组(益气养阴化痰祛瘀方),给药组连续灌胃干预2周,正常组和模型组均给予等量生理盐水.检测空腹血糖(FPG)、血清胰岛素(Fins)、血清胰岛素原(PI)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白(LDL-c),测定胰腺组织一氧化氮合酶(i NOS)、核因子(NF-?B)、超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、非受体酪氨酸激酶2(JAK-2)、蛋白激酶B(PKB)、胰淀素(amylin),观测胰脏胰岛病理及细胞面积.结果发现,模型组大鼠的FPG,血清Fins,PI,TG,FFA,LDL-c以及胰腺i NOS,NF-?B和Amylin含量升高(P0.01或P0.05),血清HDL-c和胰腺SOD,VEGF,HGF,JAK-2,PKB含量明显降低(P0.01或P0.05),胰腺的胰岛明显萎缩,结构紊乱,胰岛内可见空泡样变,细胞比积下降;益气养阴化痰祛瘀方组大鼠的FPG,血清Fins,PI,TG,LDL-c以及胰腺组织i NOS和Amylin的含量下降(P0.01或P0.05),胰腺SOD,VEGF,HGF,JAK-2,PKB的含量升高(P0.01或P0.05),胰岛结构基本正常,边界较清晰,空泡样变细胞明显减少,细胞所占面积增加.研究表明,该模型大鼠出现2型糖尿病及脂质代谢异常并伴有明显的胰岛损伤;益气养阴化痰祛瘀方在改善模型糖脂代谢的同时,有改善胰岛病理损伤及促进胰岛再生的作用,其胰岛保护性作用机制可能涉及抗氧化应激损伤、促进胰腺内皮保护性因子生成及调节JAK-2/STAT-5和PI3K/PKB信号通路.     

宣肺方对内毒素诱导大鼠急性肺损伤mTOR/S6K1信号通路的影响

目的观察宣肺方对内毒素诱导大鼠急性肺损伤mTOR/S6K1信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法选取Wistar雄性大鼠30只,动物随机分为正常组、模型组、地塞米松组和宣肺方组(高、低剂量组),尾静脉注射LPS制备ALI模型。采用ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量,免疫组化测mTOR蛋白表达,Western blot测肺组织p-mTOR蛋白表达,RT-PCR测肺泡灌洗液巨噬细胞RPS6KB1基因表达,并观察大鼠肺组织病理变化。结果与正常组比较,模型组TNF-α、IL-1β、IL-6、RPS6KB1均显著升高(P0.05),mTOR蛋白阳性面积率、p-mTOR蛋白表达显著降低(P0.01,P0.05);与模型组比较,地塞米松组TNF-α、IL-1β、IL-6均明显降低(P0.05);宣肺方高剂量组TNF-α、IL-6、RPS6KB1基因表达明显降低(P0.01,P0.05),mTOR蛋白阳性面积率、p-mTOR蛋白表达显著升高(P0.01,P0.05),宣肺方低剂量组TNF-α含量明显降低(P0.01)。HE染色示模型组肺组织内可见局部肺出血、坏死,肺小静脉扩张、血管内白细胞数显著增多,肺间质水肿、炎细胞浸润;与模型组比较,各治疗组呈轻度间质性肺炎。结论宣肺方对内毒素诱导大鼠急性肺损伤有保护作用,其机制可能与其能够下调TNF-α、IL-6含量、RPS6KB1基因表达和上调mTOR、p-mTOR蛋白表达有关。