火棘不可萃取多酚的提取工艺优化及抗氧化研究

采用响应面法优化了火棘不可萃取多酚(non-extractable polyphenol,NEPP)的提取工艺,分析了火棘中可萃取多酚(extractable polyphenol,EPP)和不可萃取多酚分别占总酚(total polyphenol,TEPP)的比例,同时监测了NEPP萃取液的抗氧化能力。以NEPP得率为评价指标,采用Folin-Ciocalteu法测定NEPP含量。考察了乙醇浓度(%,v/v)、乙醇占乙醇-硫酸提取液的比率(%,v/v)、料液比(g/m L)、提取时间(h)及提取温度(℃)对火棘NEPP得率的影响。进一步通过Box-Behnken设计优化提取工艺,同时以ABTS及FRAP法对NEPP提取液的抗氧化能力进行测定。最佳提取工艺为:提取时间2.68 h,乙醇浓度94.44%(V/V),温度83.47℃,NEPP萃取量可达167.328 mg/g,EPP 40.4 mg/g。响应面模型优化火棘NEPP提取工艺结果可靠,NEPP占火棘TEPP比重较高,为80.55%,ABTS及FRAP抗氧化能力均与NEPP含量呈良好正相关性。     

“pH对α-淀粉酶活性的影响”探究活动的实验优化

对"p H对α-淀粉酶活性的影响"探究活动中用碘液或斐林试剂检测酶活性无法获得预期实验现象进行探讨,并提出如下改进方案:1将0.01 mol/L HCl溶液、0.01 mol/L Na OH溶液设置为酸、碱环境条件;2检测试剂为碘液时的反应体系为:3%淀粉溶液与0.1%α-淀粉酶溶液各1 m L,25℃室温反应5 min;3检测试剂为斐林试剂时的反应体系为:6%淀粉溶液2 m L、0.1%α-淀粉酶溶液1 m L,25℃室温反应10 min。     

Folin-Ciocalteu比色法测定铜藻中褐藻多酚含量的研究

以没食子酸为标准品,使用福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂,通过紫外-可见分光光度法,对铜藻中褐藻多酚的含量进行了测定。结果表明,测定波长为760 nm,显色试剂Folin-Ciocalteu的用量为1.25 m L,0.1 g/m L Na2CO3溶液用量为4.0 m L,定容至10 m L,显色温度为30℃,反应时间为60 min,多酚含量在15~50μg/m L范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程为Y=0.0138X+0.0267,R2=0.9993。本测定方法的平均回收率为96.18%,相对标准偏差(RSD)为2.44%。该方法的稳定性、重现性、精密度以及加标回收率的相对标准偏差均符合要求,可用于铜藻中褐藻多酚含量的测定。按照本方法测定铜藻中褐藻多酚的平均含量为17.36 mg/g(RSD=1.25%)。     

蛋白含量检测的抗干扰新方法

为提高蛋白质含量检测方法的抗干扰能力,从福林酚试剂法入手,以牛血清白蛋白为标准样品,重新设计制定实验试剂组成与配比等,获得蛋白质含量检测新方法,然后探讨新方法的适用检测波长范围和稳定性,并利用细胞全蛋白裂解液分析它对多种常见干扰物质的包容性。实验发现,新方法不仅能准确检测蛋白质含量,对蛋白质测定液中表面活性剂的耐受浓度,如十二烷基硫酸钠(SDS)、NP-40和TritonX-100分别达到10%、2%和1%;螯合剂乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)和Ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid(EGTA)则分别达25 mmol/L和1 mmol/L;对还原剂二硫苏糖醇(DTT)和β-ME的包容浓度均为1 mmol/L;而含氮化合物硫酸铵与尿素则分别为0.5 mol/L和4 mol/L。与原方法相比较,对常见干扰物质的耐受性有显著提高,说明新方法适用含多种干扰物质的蛋白质溶液,在生命科学研究领域具有广泛应用前景。     

贵州省野生火棘果营养成分与气候因子相关性分析

野生火棘在贵州省的资源分布广泛，由于省内各地区气候因子的不同，导致野生火棘果实的营养性成分存在差异。为探究贵州省野生火棘果的营养性成分差异，明确影响营养成分积累的气候因子，筛选出适宜生长区域，采用硫酸-苯酚法、全自动凯氏定氮仪、索氏提取法和福林-酚比色法对火棘果粗多糖、总蛋白、总脂肪和总多酚含量进行测定，并进行差异性分析、主成分分析和聚类分析；同时结合气候因子，进行灰色关联度的相关性分析。结果显示，不同产地之间4种营养成分含量存在明显差异，可将10个不同产地火棘分成3大类；灰色关联度分析表明，相对湿度是影响贵州野生火棘果营养成分含量的主要影响因子；降低相对湿度利于火棘果中营养性成分的积累。     

FCLA-PPIX光触发式静态化学发光体系检测人血清白蛋白

本文对基于FCLA-PPIX触发式化学发光的人血清白蛋白检测体系进行了研究。该触发式化学发光体系利用光敏剂和活性氧探针FCLA组成了一个基本的光触发式化学发光检测体系,将待检测样品和体系充分混合后,通过脉冲光触发和延迟发光检测技术测定人血清白蛋白含量。脉冲触发式静态检测体系克服了其他化学发光体系操作复杂、试剂和样品消耗量大以及信号不稳定的缺点,灵敏度高,检测稳定。本文考察了该体系激发光强度、试剂浓度及温度等对人血清白蛋白检测结果的影响。在优化的实验条件下,测定人血清白蛋白的线性范围为2.5×10-9~6.4×10-7mol/L;方法的检出限为1.6×10-10mol/L;本法对5×10-8mol/L的标准样品平行重复测定11次相对标准偏差为4%。     

火棘多糖铁(Ⅲ)复合物中铁含量检测方法的建立

为了优化建立火棘多糖铁(Ⅲ)复合物(PPC)中铁含量检测的方法。考察了邻菲啰啉溶液浓度(w/w,%)及用量(mL)、抗坏血酸溶液浓度(w/w,%)及用量(mL)、反应时间(h)及温度(℃)等因素对PPC中铁含量测定的影响。在单因素实验的基础上,运用响应面软件进一步优化PPC的检测条件。结果表明,PPC中铁含量的最佳检测条件为:向1.0 mL适宜浓度的PPC溶液中,依次加入1.5 mL 10%的抗坏血酸溶液及3.0 mL 0.1%的邻菲啰啉溶液,于45℃水浴2.0 h后,冰水快速冷却,在室温下于510 nm波长处测其吸光度。该方法具有良好的重复性及重现性,回收率达99.93%。此方法也适合推广于其他植物多糖铁复合物中铁含量的测定。     

李氏块菌提取物抗氧化活性的研究

对李氏块菌Tuber liyuanum子实体的不同提取物,包括甲醇提取物(ME)、乙醇提取物(EE)、丙酮提取物(AE)、正丁醇提取物(BAE)和乙酸乙酯提取物(EAE),进行清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基、铁离子螯合能力、还原力以及总酚含量的测定和研究,发现ME对DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除及还原力活性最高,EC50值分别为23.37mg/m L、11.65mg/m L和24.47mg/m L;EE对羟基自由基清除和铁离子螯合能力活性最高,EC50值分别为7.24mg/m L和小于0.5mg/m L;ME的总酚含量最高(3.08mg GAE/g提取物),其次是EE(1.34mg GAE/g提取物),提取物总酚含量与抗氧化活性呈现出一定的正相关性。     

基于尼罗红染色分析金藻总脂动态积累

通过尼罗红荧光染色对一株富油微藻金藻Isochrysis sp. CCMM5001建立和完善了一种方便快捷且能准确定量金藻油脂含量的方法,利用该方法探索了不同培养条件对金藻生长和总脂积累的影响。结果表明:经尼罗红染色后,金藻的单细胞荧光强度与其总脂含量呈良好的线性关系;金藻最适生长的氮浓度、光照强度和温度分别为1323 mol/L、148.0 mol/（m2s）、25℃;最适总脂积累的氮浓度、光照强度和温度分别为441 mol/L、92.5 mol/（m2s）、15℃;优化培养条件并采用两阶段培养法后总脂含量和油脂产率都有大幅提高,可分别高达63.3%和22 mg/（Ld）。       

Kurthia huakuii LAM0618~T重组酚氧化酶LaclK对乙基紫脱色的研究

以三苯甲烷类染料乙基紫为研究对象,研究了Kurthia huakuii LAM0618~T重组酚氧化酶LaclK对乙基紫的脱色性能,探讨了给酶量、脱色时间、染料浓度、反应p H、卤离子、有机试剂以及NO~-_3、SO~(2-)_4和腐殖酸对脱色效果的影响。在pH 7.0,60℃条件下反应1 h,200 U/L的LaclK对10μmol/L和20μmol/L的乙基紫显示出较好的脱色效果,脱色率分别达到91%和84%。此外,LaclK能够耐受卤离子和有机试剂,具有一定的生物修复应用潜力。     

冬小麦光合作用对开放式空气CO2 浓度增高(FACE)的非气孔适应

在同样CO2浓度下测定时,开放式空气CO2浓度增高(FACE,580 μmol CO2 /mol)条件下生长的冬小麦叶片的净光合速率、气孔导度和羧化效率都显著低于普通空气(380 μmol CO2 /mol)中生长的对照叶片.与此相一致,FACE叶片的可溶性蛋白、二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)和Rubisco活化酶含量也都显著低于对照叶片.这些结果表明,在根系生长不受限制的田间条件下,冬小麦叶片的光合作用对高浓度CO2产生了适应现象,其主要原因可能是碳同化的关键酶Rubisco等含量的降低.     

丹皮酚对PM2.5诱导的支气管上皮细胞IL-8表达的影响

目的:观察丹皮酚对PM2.5诱导支气管上皮细胞(BEAS-2B)分泌IL-8的影响。方法:BEAS-2B细胞传代培养,分别加入丹皮酚(15μmol/L、30μmol/L)预处理1 h,ELISA法检测不同浓度的PM2.5悬液(25μg/m L、50μg/m L、100μg/m L)对BEAS-2B细胞分泌IL-8蛋白的影响。结果:随着PM2.5悬液浓度的升高,BEAS-2B细胞上清液中IL-8水平逐渐增高;丹皮酚干预后能够显著降低BEAS-2B细胞上清液中IL-8水平(P0.05),并呈浓度依赖性。结论:丹皮酚具有抑制PM2.5诱导的BEAS-2B细胞分泌IL-8蛋白表达的作用,并呈浓度依赖性。     

高效液相色谱-荧光检测法分析酱油中的氨基甲酸乙酯

建立了高效液相色谱-荧光法检测酱油中氨基甲酸乙酯的分析方法.首先用乙酸乙酯萃取酱油中的氨基甲酸乙酯,再经减压旋转蒸发浓缩得待测样品.其次确定了衍生化反应条件:取1.0 mL待测样品,加入200 μL 0.02 mol/L占吨醇,再加入100 μL 1.5 mol/L盐酸于暗处反应30min.实验结果表明:该方法标准曲线良好,线性范围为10～200 μg/L,相关系数为R2=0.988,氨基甲酸乙酯的出峰时间为14.882 min,平均回收率为100.12％.最低检测限为5μg/L,比已经发表的最低检测限(20 μg/L)要低.最后对市售酱油S1～S6样品中的氨基甲酸乙酯含量进行了检测,表明市售酱油S1～S6中氨基甲酸乙酯的含量为31.25～114.78μg/L.本文所建立的方法具有简便快捷、灵敏度高的特点,可满足对酱油中氨基甲酸乙酯含量检测的需要.     

黄绿蜜环菌菌丝体多糖分离纯化与含量测定

分离纯化黄绿蜜环菌菌丝体粗多糖,提高多糖含量,以进一步应用于工业化生产。采用DEAE-52纤维素层析柱分离纯化黄绿蜜环菌菌丝体多糖,依次用水、0.1 mol/L Na Cl、0.2 mol/L Na Cl、0.4 mol/L Na Cl、0.8 mol/L Na Cl进行洗脱;苯酚-硫酸法测定纯化后多糖含量,测定波长490nm,葡萄糖浓度与吸光度的回归方程为A=6.3137X+0.2156R2=0.9909。黄绿蜜环菌菌丝体水体粗多糖经DEAE-52纤维素层析柱分离纯化后,多糖含量达到99%以上。经过中试试验验证提取及分离纯化工艺适用于工业化生产。     

两步串联层析法纯化抗TNF-α单克隆抗体北大核心CSCD

旨在建立从重组CHO细胞发酵培养液中纯化抗TNF-α单克隆抗体的两步串联层析法。将含有抗TNF-α单克隆抗体的料液经两次离心、一步过滤的预处理后,用protein A填料捕获,阳离子填料Sourec30精细纯化。精细纯化过程中利用Do E的方法,采用CCF(Central composite face)设计,探讨了洗脱p H值及盐浓度对纯化的影响。纯化后的抗TNF-α单克隆抗体经HPLC以及毛细管电泳,检测其浓度、纯度以及多聚体含量。结果显示,亲和层析的最佳洗脱条件为p H4.0。通过DOE优化,为达到质量目标(回收率90%以上,纯度97%以上,多聚体0.3%),筛选出最佳洗脱范围为0.05-0.13 mol/L Na Cl以及p H5.7-6.0,选定p H6.0与0.10mol/L Na Cl作为Source洗脱条件,此时回收率94.3%,纯度97.3%,多聚体0.3%,其质量与参比制剂接近。     

两步串联层析法纯化抗TNF-α单克隆抗体

旨在建立从重组CHO细胞发酵培养液中纯化抗TNF-α单克隆抗体的两步串联层析法。将含有抗TNF-α单克隆抗体的料液经两次离心、一步过滤的预处理后,用protein A填料捕获,阳离子填料Sourec30精细纯化。精细纯化过程中利用Do E的方法,采用CCF(Central composite face)设计,探讨了洗脱p H值及盐浓度对纯化的影响。纯化后的抗TNF-α单克隆抗体经HPLC以及毛细管电泳,检测其浓度、纯度以及多聚体含量。结果显示,亲和层析的最佳洗脱条件为p H4.0。通过DOE优化,为达到质量目标(回收率90%以上,纯度97%以上,多聚体0.3%),筛选出最佳洗脱范围为0.05-0.13 mol/L Na Cl以及p H5.7-6.0,选定p H6.0与0.10mol/L Na Cl作为Source洗脱条件,此时回收率94.3%,纯度97.3%,多聚体0.3%,其质量与参比制剂接近。     

黑加仑果酒花青素测定方法的确定及营养成分分析

利用p H示差法对黑加仑浆果及其果酒花青素的含量进行测定,结果表明花青素的最佳检测条件为:检测波长541 nm,p H 1.0和p H 4.5,平衡时间50 min,样品p H 3.0,此方法精密度和回收率的RSD值分别为1.34%和3.01%,测得果实和果酒中花青素含量分别为2.01 g/L和0.64g/L。通过高效液相色谱和原子吸光光度法对黑加仑果酒的营养成分进行分析,结果表明酒体中共含有17种氨基酸,总量达1 173.45 mg/L,其中7种必需氨基酸,含量占29.2%;并含有人体所必需的矿质元素,其中K、Ca的含量较高,分别为1 865 mg/L和510.5 mg/L,此外,黑加仑果酒的总酚含量为3.87 g/L。     

枯草芽胞杆菌PnbA酯酶选择性拆分制备l-薄荷醇

利用重组大肠杆菌表达来源于枯草芽胞杆菌CICC 20034中的PnbA酯酶,不对称催化水解dl-薄荷醇丙酸酯制备l-薄荷醇。考察助溶剂种类、助溶剂添加浓度、温度、催化剂用量、底物浓度以及p H等对反应的影响。结果表明:添加25%(体积分数)助溶剂乙醇可显著提升该酯酶对l-薄荷醇的立体选择性,对映选择率(E)由2.4提高到99.43,为不加乙醇条件下的40倍。酶催化最佳条件:25%乙醇作为助溶剂,反应温度37℃,缓冲液为0.1 mol/L Tris-HCl(p H 8.0)并保持p H 8.0反应条件,底物量50 mmol/L,反应体系中酶的添加量750 U/m L,在此条件下,酶促反应30 min后,l-薄荷醇转化率可达34%,产物光学纯度对映体过量值(e.e._p)达95%。     

氯化三辛基甲胺/氯仿/正丁醇反胶束萃取地木耳多糖

采用阳离子表面活性剂氯化三辛基甲胺(TOMAC)/氯仿/正丁醇反胶束体系萃取地木耳中的多糖。分析有机溶剂氯仿与助表面活性剂正丁醇比例、TOMAC浓度、多糖粗提液浓度、促溶剂盐酸胍浓度、盐离子种类和浓度对前萃取率的影响。结果表明:向0.5 mg/m L多糖粗提液中加入10 mmol/L盐酸胍(Gu HCl)和0.06 mol/L Na Cl,与等体积25 mmol/L TOMAC/氯仿-正丁醇(V∶V=3∶1)的反胶束体系混合,地木耳多糖前萃取率为53.21%;反萃时水相中Na Cl浓度为0.14 mol/L,盐酸胍浓度浓度为0.6 mol/L,在此条件下地木耳多糖反萃取率为93.2%。     

美洲大蠊肠道耐热碱性蛋白酶产生菌筛选及其酶特性

昆虫肠道菌是重要的微生物资源.为拓展微生物酶资源菌种来源,本研究以含Na2 CO3和脱脂奶粉的培养基从美洲大蠊Periplaneta americana(L.)肠道中筛选产碱性蛋白酶的嗜碱细菌,进行形态学和16S rDNA序列鉴定,并分析温度、pH和Na2 CO3对菌株生长的影响;采用福林-酚法和SDS-PAGE酶谱法...