高等植物胚胎的发育生物学研究——Ⅸ.稻胚发育过程中呼吸强度及细胞色素氧化酶活力的变化

前文已报道稻胚在分化发育过程中细胞分裂增殖迅速,生物大分子物质的含量亦相应增长(唐锡华等1980;朱治平等1980;覃章铮和唐锡华1982),而且淀粉在胚乳及胚中积累时还可能通过β淀粉酶而降解被发育中的胚所利用(高锦华和唐锡华1982)。为了研究这个过程中的生理变化,本文作者结合稻胚分化器官原基及积累贮藏物质各发育期的进展,研究了胚的呼吸强度与细胞色素氧化酶活力的变化规律;因为呼吸强度标志着胚体总的生理活性变化,而细胞色素氧化酶是呼吸链中末端氧化的一个重要酶,它直接关系到高能键ATP的形成。过去已有作者(1960;夏叔芳等1966)证明;水稻幼苗或籽粒中有末端氧化酶系统存在;而且较幼嫩籽粒中糖的末端氧化主要是通过金属末端氧化酶类,乳熟后磷酸戊糖支路(HMP)及非金属氧化酶类逐渐加强。夏叔芳(1964)还指出水稻种子成熟时,稻胚的呼吸强度并不下降。因此有必要在了解稻胚分化发育过程中胚呼吸作用的变化的同时,研究稻胚中金属末端氧化酶中的细胞色素氧化酶活力变化规律,以便了解稻胚分化发育过程中胚细胞分化发育与物质代谢的能量来源。     

单只轮虫DNA提取及其细胞色素C氧化酶Ⅰ亚基部分序列测定

通过调整试剂剂量及实验条件与步骤 ,利用WizardTM基因组DNA纯化试剂盒可以稳定、快捷地提取单只轮虫的DNA。以提取的DNA为模板 ,利用COⅠ通用引物 ,扩增并测定了萼花臂尾轮虫 (Brachionuscalyci florus)COⅠ部分基因的序列。与褶皱臂尾轮虫 (B plicatilis)COⅠ基因序列比较结果表明 ,此片断确为轮虫COⅠ基因片断 ,从而证明使用本方法所提取单只轮虫痕量DNA的可靠性     

基于细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因的中缅树鼩地理种群遗传分化

中缅树鼩广泛分布于东南亚地区,在我国主要分布于西南地区及海南岛。本研究以中国10个地理种群共112只中缅树鼩为研究对象, PCR扩增得到1398 bp的细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）基因序列,并对其进行分析。 结果显示：112个中缅树鼩COⅠ基因共定义了64个单倍型,其单倍型多样性（Hd）平均值为0.9730,核苷酸多样性（Pi ）平均值为0.04494;AMOVA方差分析显示种群间的变异占总变异的93.09%,说明中缅树鼩地理种群变异主要发生在种群间;整体遗传分化固定指数（F_ST）为0.93091,说明各地理种群中缅树鼩已出现明显的遗传分化;结合中性检验与碱基错配分布图结果表明中缅树鼩在历史进程中未经历过种群扩张现象; 基于单倍型构建的系统进化树与NETWORK网络图显示10个地理种群的中缅树鼩聚为4支：海南种群一支,大新种群一支,片马种群一支,其他种群一支。结果表明：中国不同地理种群的中缅树鼩具有较高的遗传多样性,各地理种群间已经出现了较为明显的遗传分化,地理阻隔作用可能是其分化的主要原因。     

高等植物胚胎的发育生物学研究——Ⅰ.水稻、小麦胚胎发育的生长模式

本文结合稻胚的发育模式描述了水稻开花后1至30天期间胚分化发育过程,并指出了胚分化早期胚柄部分与珠被等组织的密切关系。对水稻开花后6～30天及小麦开花后8～27天期间胚鲜重、干重、体积和细胞数的发育模式进行了测定。在此基础上计算了平均每个细胞鲜重和体积的变化,以及麦胚细胞鲜重、干重和体积的变化。此外还测定了水稻胚长度,胚乳鲜重和体积的变化。结果表明;稻胚体积、鲜重在开花后6～11天,干重在6～13天期间呈指数增长,小麦胚鲜重、干重和体积变化在开花后8～15天期间指数增长趋势亦明显,稻胚每个细胞的平均鲜重和体积在开花后7天以前较小,9天以后明显增大;小麦胚每个细胞的平均鲜重、干重、和体积在开花后10天以前较小,12天以后则明显增大。稻胚在开花后1～30天期间长度变化呈S形曲线。     

杂交水稻及其亲本幼苗的乙醇酸氧化酶与细胞色素氧化酶活性的研究(简报)

籼型杂交水稻不育系的乙醇酸氧化酶和细胞色素氧化酶比活差异较小,而恢复系之间则较明显,杂种优势越强的杂交种(F_1),其乙醇酸氧化酶的比活性越低,细胞色素氧化酶d值(杂种与父母本平均值之差)与乙醇酸氧化酶活性的d值总的变化趋势一致。F_1代的盐溶性蛋白质含量高于亲本。     

绿豆幼苗中细胞色素氧化酶与酯酶同工酶的调控研究

以转录抑制剂放线菌素Ｄ和转译抑制剂环己亚胺为工具的实验表明,４－氯苯氧乙酸（ＣＰＡ）与２,４－Ｄ促进绿豆幼苗中的细胞色素氧化酶同工酶的活性,是由于刺激了种子中预存ｍＲＮＡ转译的结果。此外,发现环己亚胺对酯酶同工酶的活性有非常明显的刺激作用,其原因尚待进一步研究。     

基于线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ基因序列的细胞种属鉴别及细胞交叉污染分析

目的建立一种快速、简便、敏感和特异的基于线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,CoI)基因序列的细胞基质检测方法,用于细胞种属鉴别和不同种属间的细胞交叉污染分析。方法①提取非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、狗肾细胞(MDCK细胞)和牛肾细胞(MDBK细胞)基因组DNA,以PCR扩增相应细胞的线粒体CoI基因保守区的基因条码序列,将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测其基因片段的大小,并与文献报道的来源于ATCC相应细胞系线粒体CoI基因保守区的基因条码序列片段大小进行对比,以确定细胞的种属类别;②用Vero细胞、MDCK细胞和MDBK细胞的线粒体CoI基因保守区的基因的特异性引物分别与相应细胞和其他不同种属的细胞的基因组DNA进行PCR扩增,检测方法的特异性;用不同浓度的细胞基因组DNA与相应细胞的线粒体CoI基因保守区的基因的特异性引物进行PCR扩增,检测方法的灵敏度;③以不同种属细胞的线粒体CoI基因保守区的基因的特异性引物分别与多种细胞混合液提取的细胞基因组DNA进行PCR扩增,检测细胞间的交叉污染。结果 Vero细胞、MDCK细胞及MDBK细胞线粒体CoI基因保守序列中的基因条码序列片段大小,与来源于ATCC相应细胞系线粒体CoI基因保守序列中的基因条码序列片段大小相符。该方法具备较好的特异性,检测灵敏度为1.0 ng/μL,不同种属间细胞的交叉污染可被检出。结论该方法可有效地判断细胞的种属来源,亦可用于不同种属间细胞交叉污染的分析。     

细胞色素C与细胞色素氧化酶之间相互作用的共振RAMAN光谱研究

分别于５１４．５ｎｍ及６０４ｕｍ波长激发下,对游离的细胞色素Ｃ,细胞色素氧化酶以及细胞色素Ｃ和细胞色素氧化酶的复合体的共振拉曼光谱进行了分析比较,在形成复合体时,双方蛋白的共振拉曼谱均有所变化,一个共同的特征性变化是Ａ２ｇｖ２２１１３０ｃｍ－１,ｖ２１１３１２ｃｍ－１,ｖ２０１４００ｃｍ－２,和ｖ１９１５８４ｃｍ－１强度都有增强,其中变化最明显的是Ａ２ｇｖ１９１５８４ｃｍ－１峰,在游离态中,Ｉ１５４０／ｉ１５８２＞１,在结合态中Ｉ１５５０／Ｉ１５８２＜１。     

角倍蚜细胞色素氧化酶(CO Ⅰ)基因的多样性分析

角倍蚜是五倍子蚜的重要种类之一,其干雌寄生于盐肤木上,在完全封闭的虫瘿内生活,瘿内为高单宁、高湿度和高CO2的特殊小生境,而越冬若蚜寄生于提灯藓类上.本文对角倍蚜2个虫态的线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(CO Ⅰ)基因序列进行分析,发现这两个虫态具有不同程度的遗传分化,其中干雌的单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.308和0.101,而越冬若蚜为0.176和0.047.角倍蚜CO Ⅰ基因序列共有5个单突变变异位点,包含6种单倍型,其中Hap_1、Hap_4为广布单倍型,Hap_2、Hap_3和Hap_5为干雌的私有单倍型,Hap_6为越冬若蚜的私有单倍型.Network分析单倍型间的遗传距离得知单倍型Hap_1与Hap_2、Hap_3、Hap_4、Hap_5、Hap_6的距离分别为472、495、286、520和194.Hap_5距Hap_1最远,是最晚分化出的单倍型,其次为Hap_3和Hap_2;Hap_6离Hap_1最近,是最早从Hap_1分化出来的单倍型.故推测越冬若蚜分化时间早于干雌.     

基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的小蜡螟系统进化分析

【目的】小蜡螟Achroia Grisella Fabricius作为蜂业生产中的主要虫害,为确认它在鳞翅目昆虫中的遗传地位,本研究克隆了小蜡螟细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因COⅠ,并对其序列进行相关生物信息学分析。【方法】根据NCBI已登录鳞翅目昆虫线粒体基因组mtDNA中COⅠ基因保守序列设计简并引物,以小蜡螟基因组为模板进行PCR,克隆并测序得到小蜡螟mtDNA CO Ⅰ基因序列(GenBank登录号:MF509586)。【结果】对CO Ⅰ基因编码区进行序列分析发现,其翻译的起始码子为TTG,以碱基T作为不完全终止;通过CO Ⅰ基因同源性和遗传距离分析发现,小蜡螟与大蜡螟Galleria mellonella同源性最高且遗传距离最近,分别为88.3%、0.117。系统进化分析发现,小蜡螟与其它鳞翅目昆虫聚为一支,其中螟蛾科昆虫大蜡螟、小蜡螟、米蛾Corcyra cephalonica和梢斑螟Corcyra cephalonica聚在一个小的分支。【结论】小蜡螟与大蜡螟的进化地位最为相近,也说明了利用CO Ⅰ基因可以区分同属不同种的蜡螟,研究结果为了解小蜡螟的遗传背景提供理论基础。     

玉米组织同工酶和蛋白质谱带的遗传研究——Ⅰ.过氧化物酶和细胞色素氧化酶同工酶酶谱

本研究共采用110份玉米材料,应用垂直或卧式平板聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和双波长色谱扫描仪扫描方法,对28种组织的过氧化物酶和细胞色素氧化酶同工酶作了组织特异性的鉴定和遗传分析。结果表明,两种酶的第4、5酶带是检验美、亚洲(中国)两大起源地区玉米亲缘关系的标记酶带,这两条酶带又主要是玉米绿色组织(包括绿色叶片、叶鞘、苞叶和幼芽等)所特有的酶带;两种酶的第4、5酶带都是受1对共显性等位基因所控制。试验结果有助于进一步研究标记酶带,为标记酶带结构基因的定位打下基础。     

缺氧对大鼠大脑皮质细胞色素氧化酶亚基Ⅰ、Ⅳ表达协同性的影响

本文探讨缺氧对细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase,COX,即complexⅣ）的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅰ,Ⅳ表达及其协同性的影响。实验用成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组,缺氧2,5,15和30d组,缺氧大鼠于低压舱内模拟海拔5000m连续减压,对照组大鼠于舱外同时喂养（舱外海拔高度为300m)。用半定量逆转录-PCR法测定大脑皮质COXⅠ,ⅣmRNA量,用Western blot分析大脑皮质线粒体COXⅠ,Ⅳ蛋白量,以两个亚基的蛋白量,mRNA量的比值反映亚基表达的协同性,结果显示,缺氧2,5d,COXⅠmRNA增加,缺氧15,30d时下降至对照水平,缺氧2,5和15d时,COXⅣmRNA显著增加,缺氧30d时降低,与对照组差异非常显著。COXⅣ,ⅠmRNA比值在缺氧15d时最高,其它各缺氧组与对照组的差异无显著意义。各组COXⅠ,Ⅳ蛋白量及其比值均无显著差异。上述结果表明,缺氧可影响COXⅠ,ⅣmRNA的表达及其协同性,但对蛋白的表达及其协同性没有显著影响,提示转录后调节是缺氧过程中线粒体内COXⅠ,Ⅳ蛋白表达协同的主要机制。     

免疫测定光敏核不育水稻中光敏色素Ⅰ含量

光敏核不育水稻（农垦５８Ｓ）是中国水稻研究中的一个重要发现,在水稻杂交育种上有巨大潜力。研究表明：农垦５８Ｓ的雄性不育性受光周期调控,光敏色素是育性转变过程中光周期反应的光受体,然而,鉴于高等植物中存在至少两种不同的光敏色素分子,并且它们同时存在于水稻中,人们对调节农垦５８Ｓ雄性不育过程的光敏色素分子种类及作用方式仍然不清楚。本文采用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）,比较了不同光周期下农垦５８Ｓ和对照品种农垦５８叶片（光周期感受器官）中光敏色素Ｉ（ｐｈｙＡ）的含量。从农垦５８Ｓ的二次枝梗原基分化期开始,进行１０天的光周期处理。一组为短日照（ＳＤ）,另一组为长日照（ＬＤ）。在第１０个暗期结束前,于暗绿光下收获每株水稻的最上部两片新展叶,立即保存在液氮中。样品在研钵中磨成液氮粉,然后加入提取液（含５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣＩ和０．２ｍｏｌ／Ｌ巯基乙醇,ｐＨ８．５）匀浆。粗提液经０．５％聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）沉淀后,上清液供ＥＬＩＳＡ分析。以燕麦ｐｈｙＡ的多克隆抗体、单克隆抗体分别作ＥＬＩＳＡ的一抗和检测抗体。采用ＥＬＩＳＡ可以专一性地检测水稻ｐｈｙＡ（Ｔａｂｌｅ１）。几次独立的实验说明,光周期处理对ｐｈｙＡ含     

肺细胞色素氧化酶体视学测量法在高压氧研究中的应用

采用超微结构细胞化学方法,用计算机图象分析仪测量计算了小鼠肺毛细血管和Ⅱ型肺泡线粒体、线粒体膜和嵴上细胞色素氧化酶活性变化的二维形态学、三维立体学定量参数。结果表明,毛细血管线粒体面积较Ⅱ型肺泡细胞小,但体密度却大;毛细血管线粒体细胞色素氧化酶阳性反应面积比正型肺泡细胞小,但酶反应体密度却大、暴露于高压氧（０．５ＭＰａ）后小鼠Ⅱ型肺泡细胞线粒体细胞色素氧化酶活性降低。     

单只轮虫DNA提取及其细胞色素C氧化酶I亚基部分序列测定

通过调整试剂剂量及实验条件与步骤,利用Wizard^TM基因组DNA纯化试剂盒可以稳定、快捷地提取单只轮虫的DNA。以提取的DNA为模板,利用CO I通用引物,扩增并测定了萼花臂尾轮虫（Brachionus calyciflorus）CO I部分基因的序列。与褶皱臂尾轮虫（B.plicatilis）CO I基因序列比较结果表明,此片断确为轮虫CO I基因片段,从而证明使用本方法所提取单只轮虫痕量DNA的可靠性。     

鼻硬结克雷白氏杆菌细胞色素b-563的研究 Ⅰ.细胞色素b-563的分离、纯化和鉴定

兼性厌气菌鼻硬结克雷白氏杆菌(klebsiella rhinoscleromatis)具有不完整呼吸链,主要含细胞色素b-563,还可能含细胞色素d。可以用冻化法直接从鼻硬结克雷白氏杆菌丙酮干粉中分离及抽提细胞色素b-563。应用硫酸铵分部沉淀、Zerolit 226阳离子树脂柱层析及DEAE纤维素柱层析可将细胞色素b-563从粗抽出液中纯化800倍以上。纯化的细胞色素b-563在琼脂糖凝胶电泳中均一。氧化型细胞色素b—563的吸收峰为420、535毫微米,还原型为430、583、563毫微米。吡啶血色素原的吸收峰为419、527、557毫微米。根据光谱特性可以说明上述细胞色素属于b 型细胞色素。     

高等植物突变细胞系的研究

一、引言植物组织培养研究与应用的进展,吸引多种学科工作者的参与;它在生产上的作用也日益明显。Carlson等人开拓性的研究展示出有可能用分子生物学的知识,以高等植物细胞为实验系统,来扩充对高等植物的认识与改良植物的性状。可以像对微生物材料那样设计各种实验,用单倍体、二倍体以至多倍体植物细胞,在比田间试验小得多的空间和较短的时     

鼻硬结克雷白氏杆菌细胞色素b-563的研究——Ⅰ.细胞色素b-563的分离、纯化和鉴定

兼性厌气菌鼻硬结克雷白氏杆菌(Klebsiella rhinoscleromatis)具有不完整呼吸链,主要含细胞色素b-563,还可能含细胞色素d。可以用冻化法直接从鼻硬结克雷白氏杆菌丙酮干粉中分离及抽提细胞色素b-563。应用硫酸铵分部沉淀、Zerolit 226阳离子树脂柱层析及DEAE纤维素柱层析可将细胞色素b-563从粗抽出液中纯化800倍以上。纯化的细胞色素b-563在琼脂糖凝胶电泳中均一。氧化型细胞色素b-563的吸收峰为420、535毫微米,还原型为430、533、563毫微米。吡啶血色素原的吸收峰为419、527、557毫微米。根据光谱特性可以说明上述细胞色素属于b型细胞色素。