固定含A蛋白的葡萄球菌作为固相免疫吸附剂

<正>序言 金黄色葡萄球菌A蛋白(SpA)在免疫技术中已经成为一种重要的试剂,这是由于它和大多数哺乳类动物的免疫球蛋白(主要是IgG)能相互作用。甲醛固定金葡菌提供了一个有用的SpA固相结果物,能和IgG相互作用,持续数月不受影响。开始,这个试剂借协同凝集试验用于细菌血清学分群,但是目前,它更常被作为一种固相抗IgG的试剂用于放射免疫试验及细胞膜抗原的免疫沉淀反应。根据淋巴细胞表面抗原不同,金葡菌也能用于细胞检测和分离,也可以作为一     

检测SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇蛋白的新方法——海波银染法

介绍一种检测SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇幼虫蛋白的新方法-海波银染法。该方法对传统银染方法中的试剂与步骤加以改进,省略了乙醇固定与洗涤步骤,只需20 min即可完成全部染色过程,且仅在国产分析纯试剂及普通操作条件下,灵敏度可达毫微克级水平。     

用于寡核苷酸芯片制备载体的醛基载玻片的制备方法优化及性质研究

优化了醛基载玻片的制备方法 ,探讨了醛基修饰载玻片固定寡核苷酸探针的性质。研究发现氨基硅烷试剂的浓度是影响载玻片荧光背景的主要因素 ;2 %氨基化试剂处理 16min、戊二醛处理 30min可以得到荧光背景较低、固定效果较好的醛基载玻片。寡核苷酸固定过程中 ,末端氨基修饰没有明显的特异性 ,但是可以提高被固定探针的杂交容量。在较低的浓度 (小于 10 μmol L)时 ,探针的浓度与杂交信号趋近线性关系 ,浓度为 2 0 μmol L时杂交信号达到饱和     

晶体锇酸安瓿瓶的安全破裂法

锇酸是电镜样品制备中主要的固定剂,它是剧毒试剂,并被密封在壁较厚的安瓿瓶中,从晶体锇酸配制固定液时,须将安瓿瓶破裂,常用安瓿瓶的破裂方法是在洁净的安瓿瓶的中部用小砂轮或钻石刀划一痕,然后将安瓿瓶放入洁净的小棕色试剂瓶中,再用一洁净的粗玻璃棒的一端对准安瓿瓶的的中部一敲,使其破裂。此法要求敲击之力适度而准确,破裂不成功,可能安瓿瓶和棕色试剂瓶皆破或棕色试剂瓶破裂而安瓿     

阴离子洗涤剂分析中常见问题及解决方法

本文介绍了用流动分析仪测定阴离子表面活性剂过程中的几点体会,主要包括试剂的配制,分析过程中存在的问题及对策,仪器的保养。     

文摘

30 0 12用于寡核苷酸芯片制备载体的醛基载玻片的制备方法优化及性质研究〔中〕/邹宗亮… //生物工程学报 .- 2 0 0 1,17(5 ) .- 4 98～ 5 0 2优化了醛基载玻片的制备方法 ,探讨了醛基修饰载玻片固定寡核苷酸探针的性质。研究发现氨基硅烷试剂的浓度是影响载玻片荧光背景的主要     

病理石蜡制片中试剂标准化操作的应用体会

近年来,随着经济的发展,蜡块制作由人工操作转向全自动密闭式脱水机的广泛使用,组织的固定、脱水、透明、浸蜡已进入恒温、恒湿化操作,有效地提高和稳定了病理制片的质量,但在各实验室石蜡HE制片中的试剂使用尚未统一实现标准化操作,影响了制作的蜡块质量稳定性。现将石蜡切片试剂标准化使用问题作如下探讨：     

血型单克隆抗体试剂稳定剂的研究

为了进一步提高抗A、抗B血型单克隆抗体试剂的稳定性,实验中分别以不同配比的甘油、蔗糖、明胶和EDTA为稳定剂主要成分加入血型单抗试剂,放置在不同条件下观察试剂的稳定性。结果表明,所筛选出的一种稳定剂对血型单抗试剂具有良好的保护作用,试剂在2~8℃条件下放置12个月,凝集效价保持不变,并且该稳定剂对血型单抗的特异性、亲和力、凝集效价和凝集强度均无影响。     

ATP生物发光测定试剂研究进展

萤火虫荧光素酶是ATP生物发光试剂的关键组成部分,可通过萤火虫尾提取纯化或基因工程技术制备,酶的活力和纯度决定了ATP生物发光试剂的性能。迄今许多先进技术在ATP生物发光试剂的制备中均有应用,包括酶基因工程改造技术、ATP循环的酶法放大技术、荧光素酶蛋白的活力及发光稳定技术,特异的细胞ATP提取技术等。ATP生物发光试剂的研究焦点主要集中在提高发光试剂的检测灵敏度和性能、增加产品的适应性等方面。     

去氧核醣核酸,多醣类,蛋白质的三色染色

甲)材料及固定:哺乳类、两栖组织,包括甲状腺、肾、小肠、胃、睾丸;昆虫的精巢,肌组织;及数种植物组知,固定于 Carnoy 氏液,福尔马林液,Helly 氏液,或 Smith 氏液皆可。乙)试剂试剂 T:天青 A-schiff 液——溶0.5克天青 A(azureA)于100毫升漂白液内(见下)可保持数周,用前加100%偏亚硫酸氢钾(K-me(?)abisulfite)数滴。试剂Ⅱ:漂白液——1N盐酸5毫升;10%偏亚硫酸氢钾或钠5毫升;蒸馏水90毫升;新鲜制备。试剂Ⅲ:高碘酸液(periodic acid solu)——高碘酸0.8克;蒸馏水90毫升;0.2M醋酸钠10毫升;新鲜配制。试剂Ⅳ:硷性复红 schiff 液——根据 Stowell 氏法(1945)配制,溶液置冰箱内可保持数月。     

介绍一种防滑脱双气囊胃管的设计

目前经鼻胃肠减压术中鼻胃管主要依靠胶布黏贴来实现固定,此法在实际应用中存在很多缺点,诸如:部分患者对胶布过敏;鼻翼及脸颊部油脂分泌旺盛导致黏贴效果不牢靠;面部烧伤的患者无法固定;儿童、烦躁患者、对胃管刺激耐受性差的患者、部分患者在活动中对胃管的无意牵拉等常导致非计划性拔管,这样再次置管不仅增加患者痛苦,而且加大了医护人员工作量,在某些情况下还会延误诊疗。为解决现有传统胃管易脱出难题及特殊患者胃管难以固定的问题,笔者设计了一种防滑脱双气囊胃管。该新型胃管在结构设计上通过增加两个气囊来实现防滑脱和体外免胶布固定的目的。当双气囊充入适量气体后,胃内气囊受贲门制约、鼻腔内气囊受鼻前庭制约,不仅可以有效防止胃管意外脱出,并且无需用胶布固定胃管的体外段。该胃管尤其适用于传统胃管固定困难的患者。文中将详细介绍防滑脱双气囊胃管的结构设计、使用方法、工作原理及临床应用优势。     

免疫组织化学染色质控及常见问题分析

免疫组织化学是应用免疫学和组织化学原理,对组织切片中抗原成分进行原位的定位、定性、定量研究的一种技术,在病理科工作中对疑难病例的诊断和分型有重要作用,并对指导临床治疗,了解肿瘤预后发挥重要作用,已成为病理科不可缺少的技术支持,因此免疫组化的质量控制显得尤为重要。本室经过长期实践对其流程进行了严格规范,制定了严格的标准化流程,现介绍本室流程如下并对常见问题作逐一分析。材料和方法1.材料常规送检病理标本,全自动脱水机,Leica切片机,包埋机等。2.主要试剂ER、PR、CK、CEA、CD20、CD30、CD15、Ki67、S100、NF-κB、P27、P53等一抗及免疫组化染色S-P试剂盒、浓缩型DAB试剂盒、抗体稀释液等,均购自上海长嘉生物技术有限公司。3.组织材料处理1)固定:组织取材新鲜,固定及时,形态保存完整,抗原物质的抗原性不丢失、不扩散、不破坏是获得良好免疫组织化学结果的前提。根据组织类型不同其固定时间一般应在6至48h,固定时间不足,会造成抗原丢失,可产生组织表面抗原为阳性表达,中央为阴性表达,固定时间超过72h会使抗原不可逆性破坏,无法修复,而产生阴性表达。本室固定液采用低酒精浓度(75%的酒精)...     

三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析

研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA .     

化学发光检测试剂鲁米诺的安全使用策略

鲁米诺是一种对于不可见血迹进行增强显示的试剂,是法医科学中最敏感的显色试剂之一,同时也可作为发光试剂应用于各种生物检测体系中。出于对安全与健康的担心,该试剂在英国和其他一些欧洲国家的使用一直受到限制。本文综述了有关鲁米诺试剂对于健康的影响的研究进展,分析显示只要采取适当的防护措施,在犯罪现场或在实验室使用鲁米诺试剂的安全风险可控。     

激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA

采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因.     

国产HBVDNAPCR试剂的质量研究

首次利用中国药品生物制品检定所建立的一套国家参考品对国内几个厂家的ＰＣＲ试剂进行检测,检测过程中发现这几家国产ＰＣＲ试剂都是利用原血清直接扩增ＨＢＶＤＮＡ,比较快速,且灵敏度较高,但也存在一些问题需要更深入的研究。同时对这几家ＰＣＲ试剂的临床应用价值做了讨论,并讨论了应注意的几个问题     

啤酒酵母——分子生物学研究的热门材料

酵母菌是酿造业、面包发酵业的主要菌种,也是许多生化试剂,如酶制剂等的主要生产菌。目前,在遗传工程上酵母菌又作为高等生物名贵基因产物的加工厂,生产蛋白激素、蛋白酶及其它的蛋白质制品。而石油酵母又是环境污染的清道夫。为了改善食品工业,提取昂贵的生化试剂,自古以来人们就对酵母进行了大量的研究,积累了丰富的资料,为现代酵母分子生物学研究打下了厚实的基础。酵母菌作为一种简单的真核微生物,在分子生物学领域中具有得天独厚的优点。其研究的深度,系统性和全面性仅次于原核生物中的     

微量蛋白质的定性检测

微量蛋白质的检测,是医学及生物学实验室经常遇到又最棘手的问题之一。我们在应用铜试剂(二乙基二硫代氨基甲酸)间接测定微量蛋白质时,曾利用三氯甲烷来抽提有色的铜试剂-铜络合物,以加深色度。实验过程中,样品中蛋白浓度越高,三氯甲烷相颜色越深,同时还观察到三氯甲烷相被分     

植物石蜡制片中透明和脱蜡技术的改良

石蜡切片是植物科学研究领域中一项重要的实验技术,为组织学的发展做出了卓越贡献。制片过程中采用不同试剂和处理程序对切片质量有较大的影响。该文针对常规石蜡切片方法在操作步骤上存在的繁琐及试剂安全性等问题,摸索出改进方法。实验结果表明,采用histolene(C1OH16)、环保透明剂van-clear、正丁醇(n-butanol)和松节油(oil of turpentine)代替二甲苯(xylene),可避免二甲苯的毒性危害;同时精简了传统石蜡切片的操作程序,缩短了实验周期并提高了制片质量。     

氨基酸的离子交换色谱(续)(理论基础和实践)

<正> 十、分析试剂为借助离子交换树脂成功地进行氨基酸色谱,试剂要特别纯化和对它进行必要的预处理。特别要注意去掉纯试剂中的重金属离子和带颜色的化合物,因为两者都牢固地保留在柱内离子交换树脂上,这不可避免地导致在氨基酸的分离过程中树脂交换容量的损失。对氨基酸离子交换色谱用主要试剂的必