β-淀粉样蛋白对BV2小胶质细胞促炎作用的研究

目的探讨β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)促进BV2小胶质细胞产生炎性因子IL-1β和TNFα的作用机制。方法体外培养BV2小胶质细胞,应用Aβ1-42作用于BV2小胶质细胞,或用吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)预孵育再给予Aβ1-42刺激,实时荧光定量反转录聚合酶链反应法(RT–PCR)检测IL-1β和TNFαmRNA表达;免疫印迹法(Western blot)检测胞核中NF-κB p65及其抑制蛋白胞浆中IkBα的表达。结果 Aβ1-42作用于BV2小胶质细胞后,Westernblot显示胞浆内IkBα表达下降,胞核内NF-κB p65表达明显增加,RT-PCR测定IL-1β和TNFαmRNA的表达增加;给予NF-κB信号通路特异阻断剂PDTC后,胞浆IkBα的下降和胞核内NF-κB p65的增加均被抑制,同时IL-1β和TNFαmRNA的表达亦受到抑制,PDTC的抑制效果呈剂量依赖性。结论 Aβ可通过激活小胶质细胞NF-κB信号通路促进IL-1β和TNFα的表达。     

儿茶酚胺调节免疫功能的细胞和分子机制

目前认为儿茶酚胺(cateeholamines,CAs)不只是引起普遍的免疫抑制,而是抑制细胞免疫但促进体液免疫。CAs可抑制1型辅助T(T helper 1,Th1)细胞、细胞毒性T(T cytotoxie,Tc)细胞、自然杀伤(natural kiHer,NK)细胞和单核细胞的作用,并增强Th2和B细胞的作用。CAs通过免疫细胞上的β2-肾上腺素受体(β2-adrenoreceptors,β2-ARs)引起细胞内cAMP增加,cAMP激活蛋白激酶A(protein kinase A,PKA),后者调节核转录因子的活性,从而影响细胞因子的基因表达,即抑制白介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-12的基因转录;增强IL-6、IL-10和IL-4的基因表达。     

ZnCl_2阻断电压门控质子通道对缺氧后小胶质细胞产生活性氧及促炎因子的影响

为明确电压门控质子通道(voltage-gated proton channel,Hv1)对小胶质细胞的影响,研究了Hv1在正常、激活及抑制后对小胶质细胞活性氧、促炎因子产生的影响及机制,该研究使用原代培养的小胶质细胞,利用免疫荧光染色明确Hv1表达。用Hv1非特异性抑制剂Zn Cl2阻断该通道,用DCFH-DA染色、Real-time PCR观察糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)处理后小胶质细胞产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平的变化。采用Western blot检测Hv1和Nox2蛋白质水平。实验结果显示,小鼠脑部小胶质细胞可检测到Hv1通道的表达;单纯ODG组缺氧后小胶质细胞ROS、TNF-α、IL-1β的产生明显增加;而OGD加Zn Cl2干预组,小胶质细胞ROS、TNF-α、IL-1β的产生较单纯OGD组显著降低;Western blot显示,OGD导致小胶质细胞中Hv1和Nox2蛋白质水平显著增加。以上结果表明,小鼠脑部小胶质细胞存在Hv1通道蛋白质,Zn Cl2阻断该通道可降低OGD诱导的小胶质细胞ROS和TNF-α、IL-1β的产生,该抑制作用可能与其抑制NADPH氧化酶的作用相关。     

应用原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系建立体外骨关节炎模型的效果评价

目的通过比较白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理对原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系增殖活力、炎症因子与炎症通路表达水平变化的影响,为骨关节炎体外研究用细胞提供多重选择。方法免疫细胞化学法与甲苯胺蓝染色分别检测细胞中Ⅱ型胶原与蛋白多糖,鉴定所培养的原代细胞是否为软骨细胞。CCK-8法检测IL-1β(10ng/ml)处理24h、48h、72h对原代软骨细胞增殖活力的影响,IL-1β(1、10、20、40ng/ml)处理24h对SW1353软骨肉瘤细胞系增殖活力的影响。IL-1β(10ng/ml)分别处理原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系细胞24h后,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)与基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达水平。Real-time PCR法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA表达水平。结果所培养的原代细胞为原代软骨细胞。IL-1β(10ng/ml)处理可显著抑制原代软骨细胞增殖活力,但IL-1β(1、10、20、40 ng/ml)处理对SW1353软骨肉瘤细胞系增殖活力无明显影响。IL-1β(10ng/ml)处理可使IL-6、MMP-13表达水平及NF-κB mRNA的表达量均显著增加。结论IL-1β作用下原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系均可表现出骨关节炎样炎症反应,二者均可用于骨关节炎的体外实验研究。     

绿茶多酚对小鼠皮肤伤口愈合时白介素-1β表达的影响

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎症和杀菌等多种生物学效应。本文通过组织学、ELISA和RT—PCR技术研究了EGCG对皮肤伤口愈合期间损伤部位白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）基因表达及IL-1β分泌水平的影响效应。结果表明EGCG（50mg／L）处理72h后损伤部位的IL-1β基因表达受到抑制、IL—1β含量下降,而早期（24h内）EGCG（50mg／L）处理对IL-1β基因表达以及IL-1β的含量没有显著性影响。     

齐墩果酸抑制肿瘤坏死因子-α诱导的成纤维细胞样滑膜细胞炎症因子表达及其机制研究

探讨齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成纤维细胞样滑膜细胞的炎症因子表达的影响及其机制。首先复苏培养人成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),通过RT-PCR检测细胞IL-6及IL-1βmRNA表达,采用Western blot方法检测p38MAPK及NF-κB蛋白表达变化,通过ELISA法检测细胞上清液中IL-6及IL-1β浓度。与对照组比较,TNF-α明显诱导FLS细胞IL-6及IL-1βmRNA的表达及上清液中IL-6及IL-1β的分泌(P0.05),同时磷酸化p38蛋白和核NF-κB明显增加(P0.05),且p38MAPK阻断剂SB203580能抑制TNF-α诱导的核NF-κB增加。OA呈浓度依赖性抑制TNF-α诱导的FLS细胞p38蛋白磷酸化和核NF-κB增加(P0.05)。且OA、p38MAPK通路抑制剂SB203580或NF-κB阻断剂BAY 11-7082均能抑制TNF-α诱导的IL-6及IL-1β分泌增加(P0.05)。综上所述,OA能抑制TNF-α诱导的FLS细胞炎症因子IL-6及IL-1β的产生,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。     

尿酸性肾病中IL-1β、IRAK-4的表达及意义

目的:通过研究尿酸性肾病动物模型中白介素-1(IL-1)β和白介素-1受体相关激酶4(IRAK-4)表达的意义,了解IL-1β信号通路在尿酸性肾病中的作用。方法:Wistar大鼠54只随机分为高尿酸血症组30只、正常组24只,制备尿酸性肾病大鼠模型,检测尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)及肌酐清除率(Ccr)、24 h尿微量白蛋白(m A1b);取肾脏组织行HE染色,观察形态学变化;免疫组化测定IL-1β的表达;荧光定量PCR检测IRAK-4 m RNA的水平。结果:高尿酸组2、4、6周时IL-1β的表达均增加,免疫组化评分(IHS)均明显升高(P0.01);高尿酸血症组较正常组IRAK-4 m RNA在2、4、6周时均出现表达上调,4~6周IRAK-4 m RNA表达明显增加,与正常组比较有显著性差异(P0.01)。结论:IL-1β、IRAK-4参与了尿酸性肾病炎症反应的过程,可能为尿酸性肾病治疗提供新的可能。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制TNF-α和IL-β在小鼠皮肤烫伤修复期间的表达

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)在创伤修复中起着至关重要的作用.本研究利用小鼠皮肤深II度烫伤模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测烫伤部位组织Tnf-αmRNA和Il-1βmRNA的表达水平以及TNF-α和IL-1β的含量,探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对小鼠皮肤烫伤修复期间TNF-α和IL-1β表达的影响.结果显示,用0.2 mg/g EGCG膏剂涂敷烫伤皮肤,处理12 h可致组织Tnf-αmRNA表达水平和TNF-α含量下降,处理24 h可致组织Il-1βmRNA表达水平和IL-1β含量下降.上述结果提示,0.2 mg/g EGCG处理能抑制烫伤组织TNF-α和IL-1β的表达,减弱创伤组织的炎症反应,有助于创伤组织的修复.     

人mda-7／IL-24的抗肿瘤作用机制

mda-7／IL-24是20世纪90年代中期发现的一个新基因。由于mda-7／IL-24与人IL-10家族具有相当的同源性,后来HUGO基因命名委员会将之重新命名为IL-24,并将其归类到IL-10家族。近年研究表明,采用复制缺陷的腺病毒表达载体Ad．mda-7使其在肿瘤细胞异位表达,引起多种肿瘤细胞的生长抑制。尽管mda．7／IL-24肿瘤靶向性的作用机制还不是很清楚,但大量的实验结果表明该基因作为一个有效的肿瘤治疗基因,能够区分正常细胞和肿瘤细胞、诱导各种不同肿瘤细胞凋亡、启动抗肿瘤“旁观者效应”、增强肿瘤细胞对射线敏感性、抑制动物模型体内移植瘤的生长和血管新生以及具有调节免疫应答能力。     

基于TGF-β1-Smad2信号通路探讨布地奈德对高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠的保护作用及机制研究

摘要 目的：基于转化生长因子-β1(TGF-β1)-母亲DPP同源物2(Smad2)信号通路探讨布地奈德对高氧诱导支气管肺发育不良(BPD)新生小鼠的保护作用及机制研究。方法：将60只SD小鼠随机分为对照组、模型组以及布地奈德低/中/高等剂量组,每组12只。对照组暴露于空气中,模型组和布地奈德低、中、高剂量组暴露于高氧环境中,建立BPD模型。布地奈德低/中/高等剂量组建模24 h后每日雾化吸入1 mL/2 mL/4 mL布地奈德混悬液,12 h/次,持续雾化至处死,对照组和模型组建模24 h后每日雾化吸入生理盐水,12 h/次。建模7 d、14 d,HE染色观察各组肺组织形态学变化,Image-Pro Plus 6.0 软件测定放射状肺泡计数(RAC)、肺泡平均截距(MLI),免疫印迹法检测肺组织TGF-β1、Smad2、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白水平,酶联免疫吸附法检测血清白介素(IL)-1β、IL-18水平。结果：建模7 d、14 d后,模型组肺组织结构破坏严重,肺泡结构简单,体积增大,形成肺大疱,组织变形随着建模时间延长而加重。布地奈德低、中、高剂量组肺组织结构破坏程度随着布地奈德浓度增加而好转,肺泡结构逐渐完整。与对照组比较,模型组建模7 d、14 d后RAC明显降低,MLI和肺组织TGF-β1、Smad2、NLRP3、Caspase-1蛋白水平及血清IL-1β、IL-18水平明显升高(P＜0.05)。与模型组比较,布地奈德低、中、高剂量组建模7 d、14 d后RAC逐渐增加,MLI和肺组织TGF-β1、Smad2、NLRP3、Caspase-1蛋白水平及血清IL-1β、IL-18水平逐渐降低(P＜0.05)。结论：布地奈德可能通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路抑制炎症反应,调控TGF-β1/Smad2信号通路抑制肺纤维化进程,在BPD新生小鼠中发挥保护作用。