用甲基化的寡聚核苷酸作反义制剂

在含甲基磷酸根的寡核苷酸中,核苷酸之间含有非离子键,能抵抗细胞核酸酶的降解。一这种寡聚物能被培养的哺乳动物细胞完全吸收,它们能与细胞或病毒mRNA的启始密码或编码区或前体RNA的拼接位点有效的结合,特异性地抑制mRNA在细胞中表达。在甲基磷酸根寡核苷酸上衍生与靶mRNA共价交联的功能团,可以增强这种反义寡聚物的效率。这种寡聚核苷酸类似物是研究和控制基因表达的有用工具,并有希望开发成为治疗制剂。     

判断基因中点突变使用的寡聚核苷酸探针

本文简明扼要地介绍了人工合成寡聚核苷酸探针的设计原则,以及用 ³²P标记等方法。同时还从理论上阐述了19聚体探针在生物实验使用中的合理性,并强调在检测基因的点突变时,设计人工合成的寡聚核苷酸探针应将点突变位点置于探针序列的中间为宜。在选择序列时,要注意避免发生G-T错配,这样有利于鉴别基因的点突变。     

用寡聚核苷酸片段筛选白色念珠菌MAPK的基因家族

促分裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ,ＭＡＰＫ）是一类与哺乳动物ｐ３４＾ＣＤＣ２同源性很高的Ｓｅｒ／Ｔｈｒ蛋白激酶,在多个不同的信号转导途径中起作用。现有的实验语气表明,ＭＡＰＫ很可能在白色念珠菌形态发生中起作用。我们根据白色念念菌的已知的两个ＭＡＰＫ基因;ＣＥＫ１与ＭＫＣ１第Ⅶ亚结构域的核苷酸序列合成卫段２７ｎｔ的寡核苷酸,作为探针来筛选白色念穆     

反义寡聚核苷酸：生理学研究中的新工具

反义寡聚核苷酸（antisenseoligonucleotide,AS-ON）通常是指与体内某RNA或DNA序列具有互补顺序,并能通过碱基配对与互补链杂交,从而影响其转录或翻译过程的核酸片段。AS-ONs技术的近来应用为生理学研究开辟了一条新路,对将来了解基因的功能提供了一种新手段。本文综述了AS-ONs的设计策略、作用机理、修饰和导入方式等基本问题,旨在对AS-ONs的应用提供参考。     

TGFα反义寡聚核苷酸对膀胱癌BIU 87细胞株的作用

报道了23碱基组成的TGFα反义寡聚核苷酸和对照寡聚核苷酸对人膀胱移行细胞癌BIU87细胞增殖及其TGFα mRNA表达的作用,结果表明:TGFα反义寡聚核苷酸抑制体外培养的BIU87细胞的增殖、DNA合成和TGFα mRNA的表达,进一步证明了TGFα在BIU87细胞恶性增殖中的重要作用.     

寡聚核苷酸诱导突变法改造φ×174噬菌体A基因蛋白的DNA识别序列

 为了进一步研究φX174噬菌体A基因蛋白的复制功能与其所识别的30核苷酸保守序列的关系,我们采用寡聚核苷酸诱导的定点突变法成功地改造了这30核苷酸保守序列。将此保守序列重组到M_(13)mp9噬菌体后,以其单链为模板,在14或16寡聚核苷酸的诱导下,合成共价闭环DNA。经转化到E.coli JM103菌株,用点印迹(Dot blot)杂交法筛选,得到两种重组突变株。一种突变株其30核苷酸保守序列正链的第22碱基由A改为G。另一突变株为其第10碱基A改为C,第11碱基T改为A。突变效率约为5％。制备了此突变株单链及双链DNA,分别做了双脱氧末端终止法及Maxam和Gilbert法序列分析鉴定。     

TGFa反义寡聚核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的作用

报道了２３碱基组成的ＴＧＦａ反义寡聚核苷酸和对照寡聚核苷酸对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ８７细胞增殖及其ＴＧＦａｍＲＮＡ表达的表用,结果表明：ＴＧＦａ反义寡聚核苷酸抑制抑体外培养的ＢＩＵ８７细胞的增殖,ＤＮＡ合成和ＴＧＦａｍＲＮＡ的表达,进一步证明了ＴＧＦａ在ＢＩＵ８７细胞恶性增殖中的重要作用。     

硫化寡聚核苷酸作为基因表达抑制剂的研究进展

1983年Light等人在原核生物中发现了一种新的基因表达调控系统——反义RNA参与调控。经过近九年来的发展,反义RNA概念的覆盖面变得更广了,即能通过互补到靶基因链上并干扰或抑制靶基因表达RNA片段通称反义RNA。这样就提供了用人工方法来干扰或抑制基因表达的新机会,使反义RNA作为基因表达的抑制剂得到蓬勃发展。由于反义RNA在医学临床上有着重要的应用前景,因此国外许多生物工程公司、许多大制药公司和研究所都纷纷投入大量人力物力来开发这些新一代的药物。     

利用嵌合RNA：DNA寡聚核苷酸进行核酸序列突变

动物中内源基因的单核苷酸突变可以引起多种单基因疾病。传统的基因疗法大多利用外源基因的导入 ,由于转基因的效率和外源基因表达上存在问题 ,这种基因疗法有一定的局限性。本文介绍的利用嵌合ＲＮＡ :ＤＮＡ寡聚核苷酸 (ＲＤＯ)在ＤＮＡ水平上对突变基因进行修复是一种新的基因疗法。这种基因疗法同样适用于植物 ,并且在植物功能基因组的理论研究中有重要作用。1　嵌合ＲＮＡ :ＤＮＡ寡聚核苷酸 (ＲＤＯ)的分子结构ＲＤＯ有一段五碱基长的ＤＮＡ序列 ,除了突变的位点以外 ,与靶基因互补。五碱基的ＤＮＡ序列两旁各有 1 0个 2’ -Ｏ -甲基…     

特异寡聚核苷酸对猪瘟病毒在细胞中增殖抑制作用的研究

本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性。实验结果表明针对CSFV5'um端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核酸对CSFV复制均有显著的抑制作用,而针对CSFV3' 端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用,5'端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSF复制的抑制作用。这些初步结果也提示,CSFV5'端和3'端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同。     

阳性脂质体介导反义寡聚核苷酸转染HeLa细胞的效果研究

采用FITC标记的未经修饰的和经过修饰的两种19-mer反义寡聚核苷酸序列(ODN19和S-ODN19)作为转染物质,用流式细胞技术(FCM)研究比较几种常用阳性脂质体介导的寡聚核苷酸转染HeLa细胞的效果及适宜的转染时间。未经化学修饰的ODN19转染结果显示,LipofectAmine和DM-RIE-C增强转染的作用相对较强,而其他两种脂质体的作用并不明显。对于经过修饰的S-ODN19转染而言,四种阳性脂质体均具有增强S-ODN19转染作用,但以LipofectAmine的效果最为明显,其转染效果(FITC均值为5203.11)为无脂质体介导对照的数十倍。四种阳性脂质体的增强转染作用排序为:LipofectAmine>FuGENE6>Lipofectin>DM-RIR-C。另外,在用FuGENE6介导寡聚核苷酸转染时,采用4小时转染时间可获较好转染效果。     

寡聚脱氧核苷酸的结构与抗降解特性的研究

合成了４段具有不同高级结构或不同修饰的寡聚脱氧核苷酸,检查它们在２０％血清中的稳定性．发现：（１）寡核苷酸主要被血清中的３′外切核酸酶降解,未经修饰的线性寡核苷酸降解严重;（２）末端部分硫代修饰的寡核苷酸稳定性明显提高;（３）自身互补形成的配对结构可有效保护３′末端．具有４个以上（含４个）ＧＣ对的３′端发夹结构寡核苷酸,其抗核酸酶的能力几乎与硫代修饰的寡核苷酸相当．     

寡聚核苷酸芯片表达谱系统偏移的校正算法

多芯片对比实验中,由于多方面的变异因素,使得芯片间存在明显的系统偏移.因此,芯片表达谱数据的校正处理是关键的数据预处理步骤.当前,已经提出了很多校正算法,比如:比例常数校正、非线性校正、分位数校正等.提出了一种新的校正算法.在选择的最小秩差异探针集上,进行非线性M-A校正.并采用迭代策略减弱基准芯片方法对基准芯片选择的敏感性.在标准测试集上,同几种已知的方法进行了对比分析.     

特异寡聚核苷酸对猪瘟病毒在细胞中增殖抑制作用的研究

本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性.实验结果表明针对CSFV5'端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核苷酸对CSFV复制均有显著的抑制作用,而针对CSFV3'端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用,5′端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSFV复制的抑制作用.这些初步结果也提示,CSFV5'端和3'端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同.     

反义寡聚脱氧核苷酸（ODN）衍生物抑制乙肝病毒抗原表达的研究

为比较针对中不同基因的ＯＤＮ硫代衍生物阻断乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的抗原表达,合成了与核心蛋白编码基因起始码上游序列,多聚酶蛋白编码基因起码上游及内部序列３．５ｋｂＲＮＡ３＇端起始负链ＤＮＡ合成序列互补的寡聚脱氧核苷酸硫代衍生物,分别在ＨＢＶ短暂表达和稳定表达细胞培养系统中观察其抑制ＨＢＶ抗原表达的作用。结果发现,当培养液中ＯＤＮ浓度为２０μｍｏｌ／ＬＪＦ ,四种ＯＤＮ均能抑ＨｅｐＧ２．２．１５细胞