天花粉蛋白Lys和Arg残基的化学修饰对其与IgE反应…

用马来酸酐及环己二酮分别对天花粉蛋白上的Ｌｙｓ,Ａｒｇ残基侧链进行修饰,并以竞争性酶免疫测定检查了化学修饰对ＴＣＳ与小鼠抗ＴＣＳ单抗ＴＥ－１（ＩｇＥ）反应活性的影响。两种修饰均使ＴＣＳ与单抗ＴＥ－１反活性下降,推测Ｌｙｓ残基可能直接参了与单抗ＴＥ－１的结合,热变性实验提示ＴＣＳ上单抗ＴＥ－１识别部位需要一定的空间构象。     

小鼠抗天花粉蛋白IgE型单抗的酶解及其Fab的制备

研究了ｐａｐａｉｎ及Ｔｒｙｐｓｉｎ裂解小鼠抗天花粉蛋白ＩｇＥ单抗的条件及Ｆａｂ的制备，Ｐａｐａｉｎ和Ｔｒｙｐｓｉｎ两者都可产生Ｆ（ａｂ’）２分子量在１５０￣１６０ｋＤ左右；经Ｐａｐａｉｎ裂解的主要产物中还有Ｆａｂ，分子量７２ｋＤ，可通过凝胶过滤获得纯的Ｆａｂ，而Ｔｒｙｐｓｉｎ裂解物经ＤＴＴ还原、碘乙酰胺烷化虽然也可得到Ｆａｂ’（ｔ），但不易纯化，可见，要制备Ｆａｂ以采用ｐａｐａｉｎ裂解为好，而制备     

原核表达的天花粉蛋白和另外两种蛋白具有体外抗真菌活性

将天花粉蛋白、烟草几丁质酶和烟草β１,３葡聚糖酶的结构基因分别克隆到原核表达系统中进行表达,对三种基因的原核表达产物的粗提取物分别进行体外抗菌活性检测,发现三种蛋白质均有抗真菌活性。三种蛋白中任意两种蛋白的组合,其抗真菌活性显著高于单一组分的抗真菌活性。三种蛋白共同作用时,获得了更好的抗真菌效果     

生长调节物质对栝楼毛状根生长和天花粉蛋白合成的影响

添加GA3和CCC虽然影响栝楼毛状根的生物量积累 ,但是有利于促进天花粉蛋白 (TCN)的合成 ,当GA3的添加量为 2mg/L时 ,天花粉蛋白含量增加了 18 9% ,添加 1mg/L～ 2mg/LCCC的天花粉蛋白提高了 2 8%。分别添加维生素B1或B5会延长毛状根的生长迟滞期 ,但是 ,后期的生长非常迅速 ,并可以促进天花粉蛋白的合成。同时添加维生素B1和B5可以缩短生长迟滞期 ,并能促进毛状根的生长 ,同时添加1mg/LB1 4mg/LB5有利于促进天花粉蛋白总量的增加。     

泛醌结合蛋白（QPs）羧基的化学修饰与重组活性

研究了羧基修饰剂ＤＣＣＤ对泛醌结合蛋白ＱＰｓ重组活力的影响。用０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００增溶ＱＰｓ,用２５０ｍｏｌ／ｍｏｌＱＰｓ的ＤＣＣＤ于室温处理５ｍｉｎ,处理后的ＱＰｓ丧失约５０％与琥珀酸脱氢酶的重组活力。先将ＱＰｓ与琥珀酸脱氢酸重组再用ＤＣＣＤ处理没有发现重组的琥珀酸泛醌还原酶活性的降低。此结果说明ＱＰｓ中存在重组活性必需的羧基。     

天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究

在体外培养条件下,天花粉蛋白胶体金以受体介导的内吞方式进入滋养层细胞和绒癌细胞,最终进入胞质溶胶附着在核糖体上。经相同处理的肝癌细胞,绿猴肾细胞和正常鼠胚肝细胞,金颗粒既不与这些细胞表面结合,也没有被专一内吞的现象。分别用BSA,转铁蛋白活化的胶体金处理滋养层细胞和绒癌细胞的比较观察,也证明滋养层细胞和绒癌细胞对天花粉蛋白的专一亲和性。更有趣的是:天花粉蛋白肝癌单抗胶体金结合物进入绒癌细胞的方式与天花粉蛋白的结果相同;先以旰癌单抗处理也不影响天花粉蛋白肝癌单抗结合物进入绒癌细胞。然而,对于旰癌细胞,天花粉蛋白肝癌单抗胶体金颗粒则专一地结合在细胞的微绒毛表面,这种结合因先以肝癌单抗处理而明显地被竞争抑制。这些实验结果相互印证地提供天花粉蛋白对滋养层细胞和绒癌细胞高度专一的亲和性,并证明天花粉蛋白对靶细胞的原初损伤部位是核糖体。进一步探讨天花粉蛋白在靶细胞表面结合位点的化学性质以及这种蛋白在靶细胞内的转运机制将是重要的问题。     

天花粉蛋白与底物类似物GAGA相互作用的计算机图象模拟

以天花粉蛋白（ＴＣＳ）晶体结构模型作为ＲＩＰｓ的代表,ＲＮＡ四核苷酸ＧＡＧＡ作为底物类似物,用计算机图象模拟建立了ＴＣＳ和ＧＡＧＡ相互作用的模型。利用这一模型解释了ＲＩＰｓ的Ｎ－糖苷酶活性的作用机制。这一模型对专一性识别也能解释,且与一些生化实验结果相符;对某些实变体的活性改变也能有相应的解释．     

天花粉蛋白与FMP复合物的晶体结构

用浸泡法得到了天花粉蛋白（ＴＣＳ）与ＦＭＰ复合物的晶体,在ＳＩＭＥＮＮＳＸ－２００Ｂ面探测器系统上收集了一套２．０分辨率的Ｘ射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了复合物的结构,经Ｘ—ＰＬＯＲ程序修正得到了ＴＣＳ—ＦＭＰ复合物的分子结构并找出了１９７个水分子,最后的Ｒ因子为０．１７２,键长和键角的ＲＭＳ偏差分别为０．０１５和２．９２２度。ＴＣＳ—ＦＭＰ复合物中,ＦＭＰ与天花粉蛋白分子有较好的结合,其结合位置正处于根据三维结构和突变体信息推测的Ｎ一糖苷酶活性口袋之中。它的类嘌呤环夹在Ｙ７０和Ｙ１１１两个侧链环之间,与Ｙ７０环近乎平行,其Ｎ７和Ｎ６分别与ＴＣＳ分子的Ｇ１０９４羰基氧和Ｉ７１的Ｎ成氢键,Ｎ３靠近Ｒ１６３的侧链,其磷酸根则伸向活性口袋的底部,与Ｅ１８９、Ｅ１６０和Ｒ１６３等残基作用。     

菌紫质的Ser和Lys残基修饰对BR结构和功能的影响

用化学修饰研究了菌紫质（ＢＲ）的结构和功能的变化。用氮氧自由基分别对赖氨酸和丝氨酸进行修饰,研究结果表明在圆二色谱上（ＣＤ谱）,与天然紫膜样品比较,两种自由基分别修饰赖氨酸（Ｌｙｓ）和丝氨酸（Ｓｅｒ）残基２４小时后的ＣＤ谱中均只有负峰,分别在５９６ｎｍ和６０２ｎｍ,５３５ｎｍ的正峰已消失,７２小时后５３５ｎｍ的正峰部分地恢复,但１２０小时后均未见进一步恢复。与未修饰的紫膜相比,两种自由基修饰的紫膜在Ｒａｍａｎ光谱上观察到中间体Ｍ４１２的相对量要明显增加。本文对这二种化学修饰引起的ＢＲ结构和功能变化进行了初步讨论。     

多糖的化学修饰对其生物活性影响研究进展

多糖是重要的药用活性成分,将其结构进行化学修饰,得到的修饰后多糖有可能具有较修饰前更高的活性或者产生新的活性。本文对这一方面进行研究,阐述了硫酸化、磷酸化、羧甲基化、烷基化、乙酰化等化学修饰方法对多糖生物活性的影响,并对多糖化学修饰应用前景加以展望。     

The influence of Trichosanthin on the induction of IgE responses to ovalbumin under adjuvant—free condition

Trichosanthin(TCS) is a potent allergen in mice.It can reproducibly induce specific IgE responses in C57BL/6J mice without the help of adjuvant alum.TCS can bring out the IgE responses to ovalbumin(OVA),while OVA itself could not induce IgE responses to it .However,TCS only works when OVA immunization is given one day after TCS immunization.Either time lag in OVA immunization,or immunization of both antigens at the same time,or OVA immunization given first,all has no effect on the induction of IgE responses to OVA.Through analysis of the antibody specificity of hybridoma clones,it indicated that specific antibodies to TCS or OVA were secreted by independent B cell clones.The IgE antibldies showed no polyreactivity to different antigens.     

天花粉蛋白与CibacronBlueF_3GA结合特性的研究

 天花粉蛋白与ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ_３ＧＡ结合特性的研究何贤辉,柯一保,孙汛,聂慧玲（中国科学院上海细胞生物学研究所,上海２０００３１）天花粉蛋白（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ,简称ＴＣ８）是从葫芦科植物栝楼（Ｔｂｅｈｏｓａｎｔｈｅｓｋｉｒｉｌｏｗ?..     

Anti-Human IgE Monoclonal Antibodies Recognizing Epitopes Related to the Binding Sites of High and Low Affinity IgE Receptors

Anti-human IgE monoclonal antibodies (mAbs) were produced and eight clones recognizing epitopes on native IgE were selected. Epitopes were mapped by a competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay, Western blotting and a multi-pin peptide technology. Four sites (one each in the Cε1, Cε2, Cε2/Cε3 junction and Cε3) were recognized by the mAbs. The relationship between the four epitopes and the binding sites of high and low affinity IgE receptors (FcεRI and FcεRII, respectively) was studied using a monovalent Fab fragment of each mAb as a binding inhibitor. The IgE-FcεRII binding was clearly inhibited by the mAb recognizing the Cε2/Cε3 junction, suggesting that FcεRII binds to a rather limited area around the Cε2/Cε3 junction. The IgE-FcεRI binding, on the other hand, was scarcely inhibited by any single mAb. However, the binding was inhibited when the epitope in Cε2 was blocked simultaneously with that at the Cε2/Cε3 junction or with that in Cε3, indicating that these three distinct epitopes are related to the FcεRI binding sites. When these three epitopes were shown in the stereograph of human IgE, the FcεRI binding area was spread largely on the groove side between Cε2 and Cε3 domains. These results suggest that FcεRI acquires the high affinity through multiple bindings.     

化学修饰对胰激肽释放酶稳定性及其性质的影响

以自制高活性ＰＰＫ为材料,在氰基硼氢化钠存在下经水溶性乙醛酸修饰其表面氨基,使其抗不可逆热失活稳定性有显著提高。结果表明,修饰ＰＰＫ在等电点等基本性质方面都有变化。修饰ＰＰＫ的ＢＡＥＥ活性为天然酶的８２％,氨基修饰度为５８％,抗蛋白酶水解,贮藏和冻干稳定性都有加强。     

甘露聚糖酶Man23的化学修饰及活性必需基团测定

用化学修饰剂NEM、二甲基溴化锍、EDC、DEPC、TNM、对硝基苯乙二醛、PMSF、TNBS对芽孢杆菌B23产生的甘露聚糖酶M an23进行化学修饰,并测定修饰反应的动力学参数关系。结果显示半胱氨酸、色氨酸(1个)和谷氨酸(或天冬氨酸)残基(2个)是酶活性的必需基团;组氨酸、酪氨酸、精氨酸、丝氨酸和赖氨酸残基均为非必需基团。双向电泳结果显示酶蛋白分子具有一个链内二硫键(Cys90-Cys110)。荧光光谱测定结果显示该酶最大吸收峰为336 nm。底物作用导致酶的发射光谱发生蓝移,说明色氨酸残基位于酶蛋白分子内部的疏水区。     

Kinetics of Chemical Modification of Arginine Residues in Mitochondrial Creatine Kinase from Bovine Heart: Evidence for Negative Cooperativity

The kinetics of chemical modification of arginine residues in mitochondrial creatine kinase (mit-CK) from beef heart by 4-hydroxy-3-nitrophenylglyoxal (HNPG) have been studied with simultaneous registration of enzyme inactivation. Experiments showed that complete inactivation of mit-CK corresponded to modification of two arginine residues per mit-CK monomer. The data on the modification kinetics can be described by the sum of two exponential terms and suggest strong negative cooperativity in the binding of HNPG to arginine residues. The rate constants for the fast and slow phases of modification differ by a factor of about 50. The corresponding rate constants for inactivation differ by a factor of about 30. The rate constant for the slow stage of inactivation is twice as large as that for the rate constant for the slow stage of modification, i.e., the inactivation process is ahead of the modification process.     

丝孢酵母脂肪酶的酶学性质和化学修饰

实验室筛选到的一株丝孢酵母Trichosporon sp.脂肪酶经过硫酸铵沉淀和一系列的层析步骤分离纯化到电泳纯。对纯酶的酶学性质研究表明,此酶的分子量为28kD,pI为pH8.7,最适作用温度40℃,最适作用pH为8.0。随后利用不同的化学修饰剂对酶蛋白进行修饰,通过酶催化活力的改变对位于酶活性位的氨基酸残基进行分析,结果表明酶活性位可能含有组氨酸、丝氨酸和谷氨酸(或天冬氨酸)。最后,对此酶的氨基酸成分进行了分析,结果表明,此酶分子中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸含量高,两种碱性氨基酸精氨酸、赖氨酸及组氨酸的含量也比较高,而脯氨酸、色氨酸的含量相对较低。     

右旋糖酐对Savinase蛋白酶的化学修饰及酶学性质研究

采用经高碘酸钠活化的右旋糖酐修饰Savinase蛋白酶,通过凝胶过滤层析(GPC)和圆二色性光谱(CD)表征了修饰后蛋白酶分子量和结构的变化,测试了修饰酶的反应动力学参数,并考察了温度及pH对修饰酶活力的影响。凝胶过滤层析结果证明修饰后蛋白酶分子量明显提高,圆二色光谱分析表明修饰后蛋白酶的结构有所改变,进一步验证了右旋糖酐和蛋白酶发生了反应。与原酶相比,修饰酶对底物的亲和力增加。原酶和修饰酶的最适温度均为40℃,在30℃~50℃之间修饰酶表现出优于原酶的热稳定性。在pH8.5~9.5之间,修饰酶的稳定性高于原酶。     

化学修饰对青霉素G酰化酶活性的影响

为进一步阐明大肠杆菌AE 109青霉素G酰化酶(PA,E.C.3.5.1.11)的结构与功能关系,研究了数种修饰剂对酶活性的影响;同时测定了四种作用物存在下对各修饰剂修饰酶的影响。结果表明Ser残基处于酶的活性部位,Met残基可能处于与底物结合的部位,His和Cys残基与酶的活性无关。     

壳聚糖的化学改性及其在生物医药领域的应用进展

本文综述了近年来壳聚糖的酰化、羧甲基化、接枝、烷基化和交联等化学改性方法及其在生物医用高分子方面的应用进展,总结了壳聚糖改性及其应用过程中存在的问题并对其发展趋势作了预测。