β-联蛋白促进大鼠外周血间充质干细胞存活及扩增

本研究旨在探讨β-联蛋白在促进外周血间充质干细胞（PBMSCs）的存活和扩增中的作用。采取SD大鼠外周血,分离培养得到PBMSCs,随机将细胞分3组：未处理组（CON）、β-联蛋白激动剂组（WAY-262611,WAY)和β-联蛋白抑制剂组（XAV-939,XAV）。体外培养90 d,观察各组细胞增生和凋亡情况。应用Western 印迹和ELISA方法观察细胞衰老标记性蛋白质p16和p21表达情况,以及β-联蛋白信号通路分子表达情况。外周血经过3代培养,可获得纯度较高的PBMSCs,体外培养40 d即发生衰老和凋亡,但WAY-262611可延长细胞存活时间至90 d以上,增加其体外增殖率1.08倍（P<0.05）,明显提高细胞增殖能力（P<0.05）;使WAY组p21和p16蛋白含量较CON组减少72.1%和68.4%（两者均P<0.05）,较XAV组减低92.9%和93.3%（两者均P<0.05）。与CON组比较,WAY组衰老细胞数减少61.4%（P<0.05）,而XAV组则增加53.3%（P<0.05）;WAY组细胞凋亡率减少50.2%（P<0.05）,而XAV组细胞凋亡率增加35.7%（P<0.05）;WAY组β-联蛋白表达水平增加2.2倍（P<0.05）,而XAV组则降低77.7%（P<0.05）。WAY-262611可升高WAY组β-联蛋白磷酸化水平（包括p-Ser552 和p-Ser675）97%和79%（两者均P<0.05）,升高抗凋亡蛋白质Bcl2表达水平1.39倍（P<0.05）,降低凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3表达67.6%和83.3%（两者均P<0.05）;而XAV-939则降低Bcl2蛋白表达水平69.1%（P<0.05）,升高Bax和胱天蛋白酶3表达水平1.27倍和1.02倍（两者均P<0.05）。β-联蛋白可能是影响MSCs存活和增殖的重要信号途径。这些发现可能有助于提高用于组织工程的PB-MSCs的体外生产。     

S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制

探讨S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制。用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6处理人骨肉瘤细胞系143B,Western blot分析处理前后细胞中β-catenin水平的变化;再以人胚肾细胞HEK293为研究对象,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合Western blot检测S100A6与Wnt经典信号通路主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、散乱蛋白(Dishevelled,DVL)和轴蛋白(Axin)之间的相互作用。结果:1)AdS100A6作用48h后,143B细胞中β-catenin水平较实验对照组(AdGFP组)增加了64%(P<0.01),而AdsiS100A6处理的细胞中β-catenin较AdGFP组减少了20.2%(P<0.05),AdGFP组与空白组之间的差异无统计学意义;2)在S100A6抗体的沉淀物中,检测到β-catenin、GSK-3β和DVL,而无Axin检出;3)β-catenin、GSK-3β和DVL的抗体沉淀物中,均有S100A6检出,而Axin抗体的沉淀物中无S100A6检出。结论:S100A6能够上调人骨肉瘤细胞系143B中的β-catenin水平;并与β-catenin、GSK-3β和DVL之间存在直接相互作用;S100A6与这三个分子之间的直接相互作用可能抑制了β-catenin的降解,使之在胞浆内聚集,水平升高。这可能是S100A6上调β-catenin的部分机制。     

4-1BBL通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进人胃癌细胞的增殖和迁移

4-1BB和4-1BB配体(4-1BBL),又被称为CD137和CD137配体,分别属于肿瘤坏死因子(TNF)受体和配体家族的成员。4-1BBL 与4-1BB相互作用可以激活T细胞免疫应答。因此,4-1BBL一直在抗肿瘤免疫应答中发挥经典的免疫共刺激分子作用。近期研究发现,4-1BBL在肿瘤细胞中另有其他的生物学功能,但4-1BBL在胃癌进展过程中的功能尚不明确。本文探讨了4-1BBL在人胃癌细胞中的生物学功能和分子作用机制。首先,通过检索TCGA和Kaplan Meier plotter数据库发现,4-1BBL在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.001）,且4-1BBL的高表达与胃癌的不良预后正相关（P<0.05）。细胞生物学的结果显示,敲除4-1BBL明显抑制胃癌细胞的增殖（P<0.05）、侵袭和迁移（P<0.05）,促进胃癌细胞的凋亡（P<0.05）;另外,蛋白质免疫印迹结果表明,敲除4-1BBL可使β-联蛋白、c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白质表达水平下降,抑制Wnt/β-catenin信号通路。相反,过表达4-1BBL则显著促进胃癌细胞增殖（P<0.05）、侵袭和迁移（P<0.05）,减少胃癌细胞的凋亡（P<0.05）;且过表达4-1BBL促进β-联蛋白(β-catenin)、c-Myc和细胞周期蛋白D1的蛋白质表达,激活Wnt/β-catenin信号通路。综上所述,4-1BBL可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进人胃癌细胞的增殖和迁移。     

体外培养条件下SCF、LIF与bFGF对昆明白小鼠精原干细胞增殖的影响

生长因子作为细胞体外培养和在体细胞生长及增殖必需的调节因子 ,一直被广泛的关注。业已证明干细胞因子(ＳｔｅｍＣｅｌｌＦａｃｔｏｒ,ＳＣＦ)、白血病抑制因子 (ｌｅｕｋａｅｍｉａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ,ＬＩＦ)和碱性成纤维细胞生长因子 (ＢｓａｉｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)具有刺激细胞增殖的作用[1～ 4] ,但大都是对单一因子进行研究。本实验探讨用这三种生长因子的不同组合观察对小鼠精原干细胞增殖的作用 ,以期定性和定量的探讨出体外培养初期三种因子对小鼠精原干细胞生长的影响 ,为小…     

血清血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平变化对服药自杀青少年心理状况的影响

摘要 目的：研究服药自杀青少年血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）变化,及其与患者心理状况的相关性。方法：纳入2018年1月到2020年12月四川大学华西医院收治的服药自杀青少年81例（研究组）,同时纳入81例健康志愿者作为对照（对照组）。检测两组研究对象血清VEGF和bFGF水平,并使用汉密顿抑郁量表（HAMD）、抑郁自评量表（SDS）和自杀意念自评量表（SlOSS）评估两组患者心理状态。结果：两组研究对象性别、年龄、身高以及体质指数（BMI）具有可比性（P>0.05）;研究组吸烟者比例（16/81）和有家族精神病史比例（13/81）均显著高于对照组（6/81和3/81）（P<0.05）。研究组服药自杀青少年血清VEGF（699.72±103.42）ng/mL和bFGF（348.31±65.13）ng/mL水平均高于与对照组健康志愿者[（620.31±85.32）ng/mL和（265.37±35.23）ng/mL]（P<0.05）,并且与是否吸烟或有无家族精神疾病史无关（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示：服药自杀青少年血清VEGF和BFGF均与HAMD和SDS评分无相关,与SIOSS评分均呈正相关（r=0.278和r=0.302,均P<0.05）。结论：服药自杀青少年血清VEGF和bFGF水平升高,与自杀意念自评量表得分有正相关。     

白藜芦醇对小鼠溃疡性结肠炎的影响*

目的:研究白藜芦醇通过调节Wnt/β-catenin信号通路抗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:①葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱发溃疡性结肠炎实验:28只C57BL/6小鼠随机分为4组(n=7):control组、 DSS组、DSS+白藜芦醇(DSS+Res)组和Res组。实验周期为3周,小鼠饮用DSS水诱导溃疡性结肠炎并给予白藜芦醇灌胃。实验期间每天称小鼠体重并观察小鼠活动和粪便情况。处理结束后,安乐死小鼠,取小鼠脾脏称重,取小鼠结肠测量长度。苏木精-伊红染色法(H&E)染色观察小鼠结肠组织病理改变;实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠结肠组织miRNA-31的表达;Western Blot检测小鼠结肠组织β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达。②离体实验:以10 mg/ml浓度的白藜芦醇处理HCT 116细胞,检测HCT 116细胞β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)、卷曲蛋白3(FZD3)、c-Myc蛋白的表达;HCT 116细胞转染miRNA-31 mimic和inhibitor,检测β-catenin蛋白的表达。结果:①DSS组小鼠实验期间体重下降明显,精神萎靡,活动减少,出现血便;处理结束后小鼠的结肠长度缩短,脾脏增大。而给予白藜芦醇后小鼠的以上情况得到改善。②白藜芦醇抑制了溃疡性结肠炎小鼠结肠组织miRNA-31的表达及β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达。③白藜芦醇下调HCT 116细胞β-catenin、LRP-6、FZD3、c-Myc蛋白的表达。转染miRNA-31 inhibitor后,HCT 116细胞中β-catenin蛋白表达减少。结论:白藜芦醇能够抑制DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎,这种作用与下调Wnt信号通路有关,其对Wnt 信号的下调作用与miRNA-31有关。     

吴茱萸次碱对高糖诱导的阿尔茨海默病大鼠认知障碍的影响*

目的: 探讨吴茱萸次碱对高糖诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能障碍的影响及其机制。方法: 健康成年雄性SD大鼠随机分为3组(n=20):对照组、高糖组和吴茱萸次碱组。对照组大鼠行常规饲料和自来水饲养;高糖组大鼠行常规饲料和20%蔗糖水饲养;吴茱萸次碱组行0.01%吴茱萸次碱饲料和20%蔗糖水饲养。三组大鼠饲养24周后行Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆和认知功能,Western blot实验检测各组大鼠tau蛋白在Thr205和Ser214位点以及GSK-3β在丝氨酸9位点糖原合成酶激酶-3β(S9-GSK-3β)和PP2A在络氨酸307位点蛋白磷酸酯酶-2A(Y307-PP2A)的磷酸化水平;免疫组织化学进一步验证各组大鼠大脑海马和皮层tau蛋白在Thr205位点上的表达情况。结果: 与对照组比较,高糖组Morris水迷宫大鼠潜伏期明显升高,穿越平台次数和目标象限停留时间均明显降低(P均＜0.05),免疫组织化学染色中tau蛋白在Thr205位点上的磷酸化水平显著增高(P＜ 0.05),Western blot实验tau蛋白在Thr205和Ser214位点的磷酸化水平显著增高,pS9-GSK-3β的磷酸化水平显著降低(P均＜0.05);与高糖组相比,吴茱萸次碱组Morris水迷宫大鼠潜伏期明显降低,穿越平台次数和目标象限停留时间明显升高(P均＜0.05),免疫组织化学染色中tau蛋白在Thr205位点的磷酸化水平显著降低(P＜0.05);Western blot实验tau蛋白在Thr205和Ser214位点磷酸化水平显著降低,pS9-GSK-3β的磷酸化水平显著增高(P均＜ 0.05)。结论: 吴茱萸次碱可减轻高糖诱导的AD样大鼠认知功能障碍,其机制可能是通过增强海马pS9-GSK-3β磷酸化水平,下调GSK-3β活性,进而降低tau蛋白相关位点的过度磷酸化实现的。     

缺氧诱导因子-1α调节叉头框蛋白1表达促进大鼠外周血间充质干细胞缺氧存活

间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是再生医学中临床使用最多的干细胞之一。外周血间充质干细胞(peripheral blood mesenchymal stem cells, PBMSCs)以其获取简便、创伤小和具有多向分化能力等优势,在人类缺血性疾病的治疗方面具有重要应用前景。但尚未建立在缺氧环境下,使PBMSCs高存活和高扩增培养方法。本研究旨在探讨HIF-1α(hypoxia-inducible factor -1α, HIF-1α)通过调节叉头框蛋白1(forkhead box C1, FoxC1)表达,促进PBMSCs缺氧存活和扩增的作用。采取SD大鼠外周血,分离出单个核细胞(mononuclear cells, MNCs),培养第3代后得到MSCs,随机将细胞进行以下3种处理,并分组:未处理组(Control, CON)、HIF-1α激动剂组(dimethyloxallyl glycine, DMOG,0.1 mmol/L,DMOG组)和HIF-1α抑制剂组(BAY87-2243,50 nmol/L,BAY组),进行缺氧培养PBMSCs,观察各组不同时间点(1 h、10 h、20 h、30 h、40 h、50 h、60 h、70 h、80 h)PBMSCs凋亡和增殖情况。应用qRT-PCR和Western 印迹观察细胞FoxC1表达情况,及抗凋亡分子Bcl2和凋亡信号分子Bax和胱天蛋白酶3(caspase3)表达情况。MNCs经过3代培养后,可得到纯度较高的PBMSCs。但是,这些细胞在体外缺氧培养30 h即发生凋亡,但经HIF-1α激动剂DMOG能抑制其凋亡,能使PBMSCs缺氧延长到60 h以上。与CON组比较,DMOG处理使DMOG组PBMSCs活力升高2.6倍(P<0.001),细胞老化率(SA-β-gal阳性细胞百分率)降低70.1%(P<0.001),细胞凋亡率(Annexin V+PI+细胞百分率)减少64.6%(P<0.001)。加入HIF-1α抑制剂BAY87-2243则引起相反的变化:培养20 h后细胞增殖能力明显减弱,与CON组比较,BAY组细胞活力明显下降(P<0.001),老化率增加35.6%(P<0.001),细胞凋亡率增加38.1%(P<0.001)。进一步研究发现,DMOG可上调HIF-1α表达,促进FoxC1表达(DMOG组较CON组升高2.3倍,P<0.001),上调抗凋亡蛋白Bcl2(DMOG组较CON组升高3.8倍,P<0.001)、下调凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3表达(各下降86.5%和85.0%,均P<0.001),而加入BAY87-2243显著降低HIF-1α、FoxC1和Bcl2表达,上调Bax和胱天蛋白酶3表达(与CON组比较,均P<0.001)。由此可见,HIF-1α-FoxC1是影响MSCs缺氧存活和增殖的重要信号途径,这有助于提高PBMSCs在缺氧环境中存活和扩增。     

Regulation of oocyte mitochondrial DNA copy number by follicular fluid, EGF, and neuregulin 1 during in vitro maturation affects embryo development in pigs

Little is known about mitochondrial DNA (mtDNA) replication during oocyte maturation and its regulation by extracellular factors. The present study determined the effects of supplementation of maturation medium with porcine follicular fluid (pFF; 0, 10%, 20%, and 30%) on mtDNA copy number and oocyte maturation in experiment 1; the effects on epidermal growth factor (EGF; 10 ng/mL), neuregulin 1 (NRG1; 20 ng/mL), and NRG1 + insulin-like growth factor 1 (IGF1; 100 ng/mL + NRG1 20 ng/mL), on mtDNA copy number, oocyte maturation, and embryo development after parthenogenic activation in experiment 2; and effects on embryo development after in vitro fertilization in experiment 3. Overall, mtDNA copy number increased from germinal vesicle (GV) to metaphase II (MII) stage oocytes after in vitro maturation (GV: 167 634.6 ± 20 740.4 vs. MII: 275 131.9 ± 9 758.4 in experiment 1; P < 0.05; GV: 185 004.7 ± 20 089.3 vs. MII: 239 392.8 ± 10 345.3 in experiment 2; P < 0.05; Least Squares Means ± SEM). Supplementation of IVM medium with pFF inhibited mtDNA replication (266 789.9 ± 11 790.4 vs. 318 510.1 ± 20 377.4; P < 0.05) and oocyte meiotic maturation (67.3 ± 0.7% vs. 73.2 ± 1.2%, for the pFF supplemented and zero pFF control, respectively; P < 0.01). Compared with the control, addition of growth factors enhanced oocyte maturation. Furthermore, supplementation of NRG1 stimulated mitochondrial replication, increased mtDNA copies in MII oocytes than in GV oocytes, and increased percentage of blastocysts in both parthenogenetic and in vitro fertilized embryos. In this study, mitochondrial biogenesis in oocytes was stimulated during in vitro maturation. Oocyte mtDNA copy number was associated with developmental competence. Supplementation of maturation medium with NRG1 increased mtDNA copy number, and thus provides a means to improve oocyte quality and developmental competence in pigs.     

细胞因子对鸡胚胎原始生殖细胞（EPGCs）增殖的影响

采用MTT法分别检测mLIF、bFGF、hSCF、hIL-11四种细胞因子协同作用对体外培养的第19、28期鸡EPGCs生长的影响。结果表明：与对照组相比较,19期的EPGCs体外培养72h后, mLIF、hSCF、bFGF、hIL-11对鸡EPGCs的增殖影响显著（P<0.05）。mLIF的最佳作用剂量是10~20ng/ml,hSCF的最佳作用剂量是15~20ng/ml,bFGF的最佳作用剂量是10～20ng/ml。hSCF、bFGF的联合使用优于单因子作用的结果（P<0.05）。单独使用hIL-11时,细胞的增殖情况比其他三因子单独使用的效果较差,但OD均值有随剂量增高而上升的趋势。在与其他因子联合使用的情况下, hIL-11的最佳作用剂量为0.10~0.20ng/ml。     

DKK3调控羊驼黑色素细胞中黑色素生成

Dickkopf-3(DKK3),Wnt/p-catenin信号通路中一个重要的抑制因子,可能参与调控黑色素生成过程.本文研究了DKK3在羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用.在羊驼黑色素细胞中,过表达DKK3显著下调Wntl,Lefl,Myc和黑色素生成相关基因MITF及其下游基因TYR,TYRP1和TYRP2的表达,在...     

Gli1与β-catenin相互作用促进二者在结肠癌细胞中的协同核输入

Wnt信号通路和Hedgehog（Hh）信号通路在胚胎和干细胞的发育中发挥重要作用.此外,这两条信号途径在结肠癌复发和浸润的过程也至关重要.然而,Wnt信号通路、Hedgehog信号通路二者之间具体的交互作用机制目前仍不清楚.本文发现,这两条途径的关键分子Gli1和β-联蛋白之间存在蛋白质相互作用.Gli1与β-联蛋白之间的分子相互作用有助于二者的核输入.同时发现,在肠癌细胞系中,Gli1与β-联蛋白协同上调表达. LiCl激活细胞Wnt信号通路使Gli1表达水平增加, RNA干扰抑制Wnt信号通路,Gli1的表达水平下降.同时,Gli1的过表达也提高了细胞内β-联蛋白的表达水平,并且用Hedgehog信号通路抑制剂GANT61处理细胞,降低Gli1的表达后细胞内β 联蛋白的表达相应下降.本研究揭示了Gli1 和 β-联蛋白的相互作用及二者协助核输入在Wnt、Hedgehog信号通路交互调节中发挥重要作用,Wnt、Hedgehog信号通路交互作用为大肠癌发生发展研究提供了细胞水平交互调控机制.     

绝经后女性血清25(OH)D水平与高血压的相关性分析

目的:探讨绝经后女性血清25羟维生素D[25(OH)D]与高血压的相关性。方法:选取456例绝经后女性为研究对象,按照是否存在高血压分为高血压组(n=102例)和非高血压组(n=354例),测定所有患者的血清25(OH)D水平;血清25(OH)D水平分为四组:即25(OH)D≥30 ng/m L组(n=50例)、21~29 ng/m L组(n=110例)、10~20 ng/m L组(n=240例)、25(OH)D10 ng/m L组(n=56例);比较各组相关指标的差异。并利用Logistic回归方程分析血清25(OH)D与高血压发生的关系。结果:高血压组与非高血压组在体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(SDP)、雌激素、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)方面存在统计学差异(P0.05);高血压组血清25(OH)D[14.56±3.21(ng/ml)]低于非高血压组[19.89±4.75(ng/ml)](t=10.649,P0.001);在血清25(OH)D10 ng/m L组中,SBP和SDP值、高血压发生率均高于25(OH)D≥30 ng/m L组、21~29ng/m L组(n=110例)、10~20 ng/m L组(P0.05);血清25(OH)D水平与绝经后女性发生高血压呈现负相关(P0.05)。在血清25(OH)D不同分组中,从25(OH)D≥30 ng/m L组到25(OH)D10 ng/m L组发生高血压的风险值依次增加。结论:血清25(OH)D水平与绝经后高血压的发生密切相关,随着血清25(OH)D水平的逐渐降低,高血压发生的风险亦逐渐增大。     

右美托咪啶对肺缺血/再灌注诱发小鼠肾脏超微结构改变的影响

目的：评价右美托咪啶对小鼠肺缺血/再灌注诱发肾脏损伤的影响。方法：雄性健康SPF级C57BL/6J小鼠50只,体重20 g~24 g,8~10周龄,采用随机数字表法,将其分为5组（n=10）：假手术组（sham组）、肺缺血/再灌注损伤组（I/R组）、肺缺血/再灌注+生理盐水组（NS组）、右美托咪啶组（Dex组）、右美托咪啶+阿替美唑（Atip）（DA组）。采用小鼠在体左侧肺门夹闭30 min再灌注180 min方法制备肺缺血/再灌注损伤（I/R）模型。Dex组在肺门阻断前30 min腹腔注射右美托咪啶20 μg/kg,NS组为用同Dex组等体积的生理盐水替代Dex,DA组腹腔注射右美托咪啶（20 μg/kg）+阿替美唑（250 μg/kg）,其余处理同I/R组。再灌注结束后静脉取血ELISA法检测血浆中IL-1β和TNF-α浓度;取双肾组织,透射电镜下观察肾组织病理学结果。结果：与对照组相比,其余组血浆IL-1β和TNF-α浓度明显升高,肾组织病理学损伤明显加重;与I/R、NS、DA组相比,Dex组IL-1β和TNF-α浓度明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,且肾组织超微结构损伤有所减轻。结论：右美托咪啶预先给药可减轻小鼠肺缺血/再灌注诱发肾脏损伤,其机制可能与抑制炎性反应有关。     

粘着斑激酶在bFGF引起细胞迁移中的动态变化及意义

本文旨在观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)引起体外培养的ECV-304细胞迁移时粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的动态变化及FAK与细胞迁移的关系。建立体外培养的ECV-304细胞划痕损伤模型,观察经不同剂量(0、5、10、15 ng/ml)bFGF作用12-24 h内细胞迁移距离(电脑图像测定)和FAK蛋白含量(Western blot)、活性(免疫沉淀加Western blot)和mRNA(RT-PCR)的动态变化。用免疫细胞化学(ABC法)染色研究整合素α3表达。结果发现,低浓度(5 ng/ml)bFGF促进细胞迁移,FAK蛋白含量增加42.07±2.02％、活性增加71.37±1.85％,与对照组比,差异显著(P<0.05),并与迁移距离呈正相关(P<0.05)。高浓度(15 ng/ml)bFGF抑制细胞迁移,FAK的变化相反。FAK mRNA的变化比蛋白变化早出现6 h。与对照细比,各实验组整合素α3表达无明显差异。由此可见,不同剂量bFGF对ECV-304细胞迁移的双相调节作用与FAK含量、活性与mRNA表达呈正相关,FAK在bFGF引起的细胞迁移的信号转导途径中起着重要作用。     

CDA基因沉默对人慢性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨胞苷脱氨酶(CDA)基因沉默在治疗人慢性髓系白血病(CML)中的潜在价值。方法:通过RT-PCR和Western blot检测CML患者和造血干细胞移植供体的骨髓单个核细胞中的CDA表达。对CML KCL-22细胞系转染shRNA和过表达CDA的p BS/U6-Neo质粒来诱导CDA基因沉默或过表达。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定和细胞集落形成实验评价细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞凋亡。此外,将0.2 m L不同处理的细胞悬浮液(106个细胞/m L)注射到裸鼠中建立裸鼠肿瘤异种移植模型。结果:与造血干细胞移植供体相比,CML患者的骨髓单个核细胞中的CDA m RNA和蛋白表达显著升高(P 0.05)。转染shRNA-CDA显著降低了KCL-22细胞的细胞活力和细胞集落数(P0.05)。与对照组(4.32%)相比,shRNA-CDA组(13.45%)的细胞凋亡率显著升高(P0.05)。与对照组相比,shRNA-CDA组的BCL-2蛋白表达水平显著降低,而cleaved caspase-3显著升高(P0.05)。与对照组相比,shRNA-CDA组的PI3K蛋白表达水平和Akt磷酸化水平显著降低(P0.05)。接种30 d后,与对照组相比,shRNA-CDA组裸鼠的肿瘤重量和肿瘤体积均显著降低(P0.05)。结论:CDA在人慢性髓系白血病中高表达,CDA基因沉默可在体内和体外抑制肿瘤细胞的生长。其机制与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

灵芝多糖GLP 抑制小鼠骨肉瘤细胞S-180 在体内生长的作用机制

目的:探讨灵芝多糖成分(GLP)抑制肿瘤的作用机制。方法:在小鼠右腋皮下接种1×106TC-1细胞后7天后,用100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg 3种剂量给小鼠口服灌胃给药20天,然后观察肿瘤的重量,并用ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-6和TNF-alpha,用流式细胞仪检测其外周血中CD4+和CD8+。结果:100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg 3种剂量给小鼠口服灌胃给药20天,与对照组比较,抑瘤率分别可以达到53%、59%和58%,P<0.05;小鼠外周血血清中的IL-2从1.27ng/mL提高到了2.88ng/mL,P<0.05;TNF-α从1.05ng/mL提高到了1.82ng/mL,P<0.05;而IL-6则没有明显的变化。CD4+细胞水平升高(从54.80%提高到了58.27%),但差异无统计学意义(P>0.05);CD8+细胞明显增多(从24.15%提高到了45.36%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GLP有明显抑瘤作用,但抑瘤作用与GLP剂量不存在依赖关系。GLP对肿瘤细胞生长的抑制是通过提高小鼠的细胞免疫能力来实现,而并非直接杀伤肿瘤细胞。     

HCV core通过活化Wnt/β-catenin信号通路诱导肝前体细胞向肝癌干细胞分化

丙型病毒性肝炎（hepatitis C virus,HCV）慢性感染及肝前体细胞向肝癌干细胞分化是原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要致病因素。且Wnt信号参与维持肝癌干细胞特性,但HCV能否通过活化Wnt信号诱导肝前体细胞向肝癌干细胞分化尚不清楚。本室研究发现,在HCV core诱导分化的肝前体细胞中,HCV core抑制成熟肝细胞标志物Alb、CK18的表达,糖原储存能力显著下降（P<0.05）,且上调肝癌干细胞标志物EpCAM、CD133、CD44等表达。另外,HCV core增强β-联蛋白活性及表达水平,促使β-联蛋白向核内聚集,上调其下游靶基因EpCAM、细胞周期蛋白D1、C-myc的表达,沉默β-联蛋白后,Wnt/β-catenin通路其下游靶基因表达明显受到抑制,糖原储存能力部分恢复,荧光共聚焦显示HCV core与β-联蛋白在细胞核内存在共定位。因此,HCV core可能与β-联蛋白相互作用,直接活化Wnt/β-catenin通路,上调其下游靶基因EpCAM等表达,诱导肝前体细胞向肝癌干细胞分化。