新组合菌系SCB329—SCB933利用L—山梨糖发酵产生维生素C前体2—酮基—L—…

在分析了新组合菌系ＳＣＢ３２９－ＳＣＢ９３３发酵过程特征的基础上,对流加发酵工艺中的种子培养、ｐＨ、溶氧的控制,以及发酵液初始培养基中的Ｌ－山梨糖浓度和流加起始点进行了优化,获得了比分批发酵更为满意的结果：发酵最终总糖达１３％（ｗ／ｖ）左右,发酵周期４０￣５０ｈ,产２－酮基－Ｌ－古龙酸达１１５－１３０ｍｇ／ｍｌ,克分子转化率达８８ｍｏｌ％左右。     

高密度发酵生产突变型重组人肿瘤坏死因子rhTNFα-DK2的研究

通过对发酵基质和发酵关键参数的优化,确定了发酵培养基的磷酸盐浓度为０．１５Ｍ,甘油浓度为１．２ｍｌ／Ｌ,补料中甘油浓度为２０ｍｌ／Ｌ,发酵过程中溶解氧控制在３０％～６０％,ｐＨ控制在６．８５左右。在５Ｌ在ＮＢＳ－Ｂｉｏｆｌｏ３０００型自动控制发酵罐中采取加速补料的补料分批培养,重组大肠杆菌ＹＫ５３７／ｐＳＢ－ＴＫ经１０ｈ３０°Ｃ培养和５ｈ４２°Ｃ诱导培养,最终密度达到６０ＯＤ６００,ｒｈＴＮＦα－ＤＫ２的表达量占菌体总蛋白的５０％以上,每升发酵液纯化可得到近２ｇ的ｒｈＴＮＦα－ＤＫ２。     

欧文氏菌和棒杆菌的属间融合研究*

研究了用原生质体融合技术获得欧文氏菌和棒杆菌的融合细胞。串联发酵Ｄ－葡萄糖产生２－酮基－Ｌ－古龙酸的第一步发酵菌株欧文氏菌ＳＣＢ２４７经０．８ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解０．５ｈ后,原生质体的形成率和再生率分别为９９．８％和２７．８％。第二步发酵菌株棒杆菌ＳＣＢ３０５８经预处理后由１．３ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解２ｈ,原生质体的形成率和再生率分别为９９．５％和５６．３％。用携带氨苄青霉素抗性标记的ＳＣＢ２４７和经热灭活的ＳＣＢ３０５８为亲本,在４０％ＰＥＧ６０００和０．２ｍｏｌ／Ｌ新生磷酸钙等适宜条件下融合,融合频率为３．６×１０~(－６)。在非选择和选择培养基上连续传代十几次后,对融合子的单菌形态、染色结果、菌落形态、色泽、总蛋白量、同工酶、发酵性能等方面与亲本进行了比较。结果表明,融合子确系棒杆菌和欧文氏菌的融合细胞。摇瓶发酵结果显示,所得的３８株稳定的融合子中约４０％能转化葡萄糖为维生素Ｃ前体２－酮基－Ｌ－古龙酸。     

新组合菌系SCB329—SCB933利用L—山梨糖发酵生产维生素C前体—2—酮基…

新组合菌系氧化葡萄糖酸杆菌ＳＣＢ３２９－苏芸金芽杆菌ＳＣＢ９３３能在较长时间内保持高的转化活力且具有极强的抗杂菌污染的特性。在一次投糖分批发酵的基础上,探索在控制溶氧、ＰＨ,温度等条件下,分批加入Ｌ－山梨糖发酵生产２－酮基－Ｌ－古龙酸新工艺。采用新工艺,既充分利用了菌系的优良特性,又避免了高糖浓度可能对菌系造成的不良影响。Ｌ－山梨糖最终浓度达到１４％（Ｗ／Ｖ）,产酸１２０－１３５ｇ／ｌ,转化率９０     

欧文氏菌和棒杆菌的属间隔合研究

研究了用原生质体融合技术获得欧文氏菌和棒杆菌的融合细胞,串联发酵Ｄ－葡萄糖产生２－酮基－Ｌ－古龙酸的第一步发酵菌株欧文氏菌ＳＣＢ２４７经０．８ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解０．５ｈ后,原生质体的形成率和再生率分别为９９．８％和２７．８％。第二步发酵菌株棒杆菌ＳＣＢ３０５８经预处理后由１．３ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解２ｈ,原生质体的形成率和再生率分别为９９．５％和５６．３％,用携带氨苄青霉素抗性标记的ＳＣＢ２４７和     

枯草芽孢杆菌C1—B941的D—核糖发酵中间试验

使用转酮醇酶变异株－枯草芽孢杆菌Ｃ１－Ｂ９４１进行了Ｄ－核糖发酵中间试验。３０００Ｌ发酵罐试验结果表明,发酵培养基中的葡萄糖浓度为１８％时,发酵周期约为６４ｈ,发酵转化率达３６．８４％,发酵液经离子交换树脂纯化后,可以直接用于生产ＶＢ２合成的中间体－Ｎ－Ｄ－核糖醇基－３,４－二甲苯胺。     

D-核糖发酵过程参数的研究与控制

以７Ｌ自控发酵罐进行Ｄ－核糖发酵实验,对Ｄ－核糖发酵过程参数进行优化,发现对数生长后期接种,溶氧控制在４０％左右,以葡萄糖酸补料并调节ｐＨ值在７．２左右,可使罐的发酵单位由４５ｇ／Ｌ提高至６５ｇ／Ｌ左右。     

重组人生长激素在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达研究

对重组人生长激素基因工程菌ｐＥＴ－１１ｂ／ｒｈＧＨ／ＢＬ２１的培养条件进行了优化,在ＮＢＳ ＭＰＰ－４０发酵罐中实现了高密度培养和高效表达,三批实验结果表明,在较短的发酵时间（１２ｈ）内细菌干重达８５ｇ／Ｌ,重组人生长激素占总蛋白量的２５％左右。     

利用糖蜜发酵生产生物降解塑料PHB的研究

由Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｌａｔｕｓ经单菌落分离,从中筛选到一株高效利用糖蜜产聚羟基丁酸（ＰＨＢ）的优良菌株１０１８。在６Ｌ台式发酵罐（Ｎ.Ｂ.Ｓ）中,进行了该菌利用甜菜糖蜜和甘蔗糖蜜积累ＰＨＢ的分批补料培养的研究。结果表明,培养５４ｈ左右发酵液中细胞干重达７０～８５ｇ／Ｌ,ＰＨＢ含量占细胞干重的６０％～７０％,生产强度１．０ｇＰＨＢ／Ｌ／ｈ以上;发酵液经非有机溶剂提取制得ＰＨＢ产品,纯度９５％,提取收率８０％以上。     

真养产碱杆菌突变株65—7产聚—β—羟基丁酸的研究

本文对真养产碱杆菌突变株６５－７在台式２Ｌ发酵罐中利用葡萄糖积累ＰＨＢ进行了碳源和氮源补料分批培养的研究。结果表明７２ｈ发酵液中细胞干重达５０ｇ／Ｌ,ＰＨＢ占细胞干重的７７％,糖对ＰＨＢ的转化率为２５％。制得的ＰＨＢ产品纯度与Ｓｉｇｍａ公司的相当,熔点１７４℃     

口服双歧杆菌,酪酸梭菌活菌制剂药效作用研究

利用氨苄青霉素引起ＳＰＦ－ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠肠道菌群失调腹泻作为模型,观察肠康平制调整扬道菌群的药效作用,并与它同类单价制剂不平制剂对该ＳＰＦ－ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠肠道菌群失调腹泻具有治疗作用,高剂量组９１０＾６ＣＦＵ／次）的治疗效果优于低剂量组（１０＾４ＣＦＵ／次）,肠康平制剂缓解ＳＰＦ－ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠筵菌群失调后腹泻症状的时间较单价制剂略快。     

真养产碱杆菌突变株65－7产聚－β－羟基丁酸的研究

本文对真养产碱杆菌突变株６５－７在台式２Ｌ发酵罐中利用葡萄糖积累ＰＨＢ进行了碳源和氮源补料分批培养的研究。结果表明７２ｈ发酵液中细胞干重达５０ｇ／Ｌ,ＰＨＢ占细胞干重的７７％,糖对ＰＨＢ的转化率为２５％。制得的ＰＨＢ产品纯度与Ｓｉｇｍａ公司的相当,熔点１７４℃。     

不同品系小鼠对实验感染念珠状链杆菌敏感性的观察

本文通过念珠状链杆菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｕｓｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ,Ｓ．ｍ．）实验感染昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＢＡＬＢ／ｃ、ＩＣＲ、ＮＩＨ、ＤＢＡ共６个品系小鼠,观察其对Ｓ．ｍ．敏感性的差异。其中昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ两个品系在腹腔接种后表现出明显的临床、病理改变。昆明小鼠发病率和死亡率分别为９２％和８０％;Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ分别是８０％和１２％。昆明小鼠较之Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠起病急、病情严重,多数动物死于感染的急性期。其余品系的发病率为：ＮＩＨ８％、ＢＡＬＢ／ｃ和ＤＢＡ４％,没有动物死亡;ＩＣＲ在接种后无任何临床病理改变。在实验感染后临床病理改变方面,昆明小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠间有较大不同。昆明小鼠以末梢血管淤血、四肢尾部水肿、关节炎、截瘫、腹泻为主,而Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠则以注射部位和其它部位皮下脓肿、化脓性关节炎为主。本研究提示,中国昆明小鼠对Ｓ．ｍ．敏感性最高,可以将其作为“哨兵动物”用于实验大鼠Ｓ．ｍ．的常规监测;不同品系小鼠不仅对实验感染Ｓ．ｍ．的敏感性不同,而且表现出不同的临床病理改变。     

L－异亮氨酸产生菌选育的研究

以黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６７为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）、紫外线（ＵＶ）和亚硝基胍（ＮＴＧ）逐级诱变处理,α－氨基－β－羟基戊酸（ＡＨＶ）、Ｓ－２－氨基乙基－Ｌ－半胱氨酸（ＡＥＣ）、磺胺胍（ＳＧ）、乙硫氨酸（Ｅｔｈ）、α－氨基丁酸（α－ＡＢ）、异亮氨酸氧肟酸（ＩｌｅＨｘ）等氨基酸结构类似物及琥珀酸为碳源平板定向筛选,获得一株Ｌ－异亮氨酸高产菌ＺＱ－４（ＡＨＶ~γ、ＡＥＣ~γ、ＳＡＭ~γ、ＳＧ~γ、Ｅｔｈ~γ、α－ＡＢ~γ、ＩｌｅＨｘ~γ）在含１３．５％葡萄糖培养基中,摇瓶发酵７２ｈ、Ｌ－异亮氨酸积累可达２．８－３．０％。     

L－异亮氨酸产生菌选育的研究

以黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６７为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）、紫外线（ＵＶ）和亚硝基胍（ＮＴＧ）逐级诱变处理,α－氨基－β－羟基戊酸（ＡＨＶ）、Ｓ－２－氨基乙基－Ｌ－半胱氨酸（ＡＥＣ）、磺胺胍（ＳＧ）、乙硫氨酸（Ｅｔｈ）、α－氨基丁酸（α－ＡＢ）、异亮氨酸氧肟酸（ＩｌｅＨｘ）等氨基酸结构类似物及琥珀酸为碳源平板定向筛选,获得一株Ｌ－异亮氨酸高产菌ＺＱ－４（ＡＨＶ~γ、ＡＥＣ~γ、ＳＡＭ~γ、ＳＧ~γ、Ｅｔｈ~γ、α－ＡＢ~γ、ＩｌｅＨｘ~γ）在含１３．５％葡萄糖培养基中,摇瓶发酵７２ｈ、Ｌ－异亮氨酸积累可达２．８－３．０％。     

新组合菌系SCB329—SCB933利用L—山梨糖发酵产生维生素C前体——2—酮基…

采用紫外照射,化学诱变和原生质融合等方法选育到一株性状更优良的突变株ＳＣＢ３２９,并与新筛选的一株芽孢杆菌ＳＣＢ９３３搭配组成新的组合菌系,产酸小菌ＳＣＢ３２９与其亲本菌株氧化葡萄糖酸杆菌性状相似,伴生大菌ＳＣＢ９３３属苏芸金芽孢杆菌（Ｂ．ｔｈｕｒｎｇｉｅｎｓｉｓ）,新组合菌系列Ｌ－山梨糖的发酵液提取后经纸层析,元素分析和红外吸收光谱等项鉴定,其发酵产物克系２－酮基－Ｌ－古龙酸,对新组合菌系的生物     

肌苷产生菌缺失核苷水解酶活性突变株选育及其发酵生产试验

以枯草芽孢杆菌ＪＳＩＭ－１０１９为出发菌株,经物理、化学诱变剂连续处理,获得一株缺失核苷水解酶活性的突变株ＪＳＩＭ－Ｂ－１９８。该突变株不能降解肌苷,应用于发酵生产中,肌苷产量显著增加。在２００００升发酵罐中,连续１０罐批,平均产肌苷８．３８ｇ／Ｌ,对糖转化率２１．９８％,发酵周期５０ｈ￣６０ｈ,该菌株遗传性能稳定,已在工业生产中应用。     

革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性

目的 了解本院最近的革兰阴性杆菌中产超广谱β－内酰胺酶（ＣＳＢＬ）菌株的民生北及其耐药性情况。方法 双纸片法筛选,然后用头孢噻肟／棒酸,头孢他啶／棒权进行确证。结果 １７４株革兰阴性杆菌中有４６株是ＥＳＢＬ菌株,包括大肠埃希菌２７株,肺炎克雷伯菌１３株,阴沟肠杆菌４株,铜绿假单胞菌１侏,枸橼酸杆菌１株。本院ＥＳＢＬ株以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌多见,名占该种菌中的３３％、４２％。ＥＳＢＬ菌株对亚胺培     

高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建

重组大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉＨＭＳ１７４（ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ） 含有携带聚羟基烷酸（ＰＨＡ） 合成基因（ ｐｈａＣＡＢ）＊＊ 的质粒ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ,是很有潜力的ＰＨＡ 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成３羟基丁酸（３ＨＢ） 与３羟基戊酸（３ＨＶ） 共聚物［Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ）］ 的缺陷。将ＲＫ２ 质粒上的ｐａｒ ＤＥ 基因引入ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ 构成质粒ｐＪＭＣ２ ,该质粒可以在宿主Ｅ．ＣｏｌｉＨＭＳ１７４ 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至１８ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,发现Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） 能够以丙酸为前体合成Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为５ ％ ～８ ％ 。在５Ｌ自动发酵罐中分批补料培养Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） ,培养基初始磷酸盐浓度为１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,３０ ｈ 后每升培养液中干菌体可达４２－５ ｇ,Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） 占干重的７０ ％ ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为４－９ ％ 。     

芽孢杆菌A-30产碱性β-1,4-聚糖酶固体发酵研究

筛选得到一株高产β－１,４－聚糖酶的耐碱性芽孢杆菌Ａ－３０,其固体发酵（Ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ＳＳＦ）时最适培养条件：起始ｐＨ为８．０、培养温度为３２℃、１０％（ｖ／ｗ）接种量,含水量为６６．６％（ｖ／ｗ）,以０．５％的ＮａＮＯ３为无机氮源,发酵９６ｈ,木聚糖酶活可达６４５７ＩＵ／ｇ（Ｄｒｙｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｒａｎ）,纤维素酶活（ＣＭＣａｓｅ）可以达到１８．６６ＩＵ