多肽核酸在分子生物学中的应用

多肽核酸（peptide nucleic acid,PNA）是DNA类似物,其生物性质稳定,不被核酸酶和蛋白酶消化降解。PNA遵循Watson—Crick规则和Hoogsteen规则与单链DNA（RNA）以序列特异性形成极其稳定的杂交二聚体或三聚体。根据PNA的生物特性,以PNA为基础的PNA探针和PCR钳制技术在肿瘤和老化研究以及染色体畸形、细菌和DNA点突变诊断等方面的应用日益增多。PNA协助的携带非天然氨基酸的氨基酰化tRNA的改造已获得成功,并且合成了人工蛋白。作为反义抑制药物,PNA在抑制细菌和病毒的基因表达以及蛋白质翻译方面也取得了初步成果。基于PNA的由RNA触发的药物释放系统设计巧妙,是十分有希望的靶向治疗药物。     

锁核酸——一种新的反义寡核苷酸

1978年 ,Ｚａｍｅｃｎｉｋ等[1] 开创了根据碱基互补配对原理 ,设计反义寡核苷酸以用于基因治疗的研究。相当时间内 ,反义治疗成为研究领域的热点。至今该研究已经进行了2 0多年 ,但所取得的成果一直不令人满意。其中的一个关键问题是反义寡核苷酸的易降解及杂交结合力不强。所以 ,近十几年来 ,科学家们一直在找寻一种强有力的核苷酸替代物质。这种物质既要有强大的杂交亲合力及抗核酸酶能力 ,又必须对人体没有毒性[2 ] 。已经有很多关于各种核苷酸类似物被用于反义研究的报道 ,如硫代磷酸寡核苷酸、甲基化寡核苷酸、肽核酸 (ＰＮＡ)等。近…     

反义核酸药物的研究现状

反义药物以其合理设计药物的可能性和精确的特异性广泛吸引了人们的注意,但反义药物的研究并非如人们最初预想的那样简单。本文从其特异性,稳定性,透过靶细胞的能力,作用强度,活性判定,给药途径,安全性和毒性,生产成本等诸方面对反义药物的研究现状,现存问题进行了综述。相信伴随这些问题的解决,反义药物很可能成为药典的一部分,给疾病的治疗带来益处。     

多肽核酸

通过计算机模型设计出一种以肽骨架取代ＤＮＡ中脱氧核糖磷酸酯骨架的ＤＮＡ类似物．实验已证明其与互补寡核苷酸的结合具有高度的特异性．综述了其合成、杂交性及在分子生物学等方面的应用．     

反义寡核苷酸的化学修饰

反义寡核苷酸的功能在很大程度上取决于其稳定性、生物利用度及与靶基因结合或反应的特性．通过特定的化学修饰可以改变这些物理、化学特性,从而增加其抗病毒、抗肿瘤及对其他特定基因的表达抑制活性．     

反义核酸技术应用及研究进展

伴随着先进的基因克隆和基因测序技术的出现,以及DNA合成技术的迅速发展,反义核酸技术已经渗透到了生物学的各个方面,表现出了诱人的前景。综述了反义核酸技术的作用机理及其在抗病毒、抗肿瘤、细胞凋亡、信号机制、中枢神经系统以及眼科等方面的运用以及研究进展。     

反义核酸技术应用难点及研究进展

反义核酸技术已被广泛用于治疗药物、药物靶点确认、探知病理基因的表达。目前对其作用原理的研究集中于其被吸收入细胞的机制、在细胞内的分布、反义核酸序列的最佳长度和性质,并针对体内可能抑制反义核酸活性的影响因素,采取了各种相应的反义核酸优化技术,如对反义核酸的化学修饰、联结高效的转运载体、确定最佳的反义结合位点等,通过这些技术来提高其体内稳定性、跨细胞转运的效率,识别靶序列的特异性,以获得更多更好的反义药物投入实用。     

反义核酸抗肝炎病毒研究进展

病毒性肝炎的治疗一直是困扰人类的一个难题.目前可利用的药物仍屈指可数.反义核酸技术的发展为病毒性肝炎的治疗带来了新的希望.利用反义DNA,反义RNA和核酶技术来抑制乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒,在体外已进行了大量的研究,体内也进行了一些研究,为临床应用反义核酸治疗病毒性肝炎奠定了基础.     

反义核酸在肿瘤研究中的应用

反义核酸研究已活跃于肿瘤研究及基因治疗领域,反义核酸通过碱基配对待异性地抑制基因表达,因此为研究肿瘤中癌基因和生长因子的功能及癌基因突变检测提供了更为有效的手段,并为肿瘤的基因治疗提供了可能途径.文章综述了反义核酸在基因治疗中所面临的问题及部分解决办法.     

反义寡核苷酸的抗病毒作用及其研究进展

根据靶核酸序列设计的具有一定长度的反义寡核苷酸可与靶核酸特异结合,从而发挥调节基因表达的功能。本文涉及反义寡核苷酸及其类似物的抗病特性、抗病毒机理、反义寡核苷酸的毒性和药物动力学以及未来的发展前景。     

反义核酸对人大肠癌CCL229细胞侵袭力的抑制作用

为观察反义寡核苷酸(asODN)对培养的高侵袭性人大肠癌CCL229细胞侵袭性的抑制作用,针对尿激酶型纤溶酶原激活物受体(re-ceptorofuPAR)mRNA的翻译起始区,合成了一段反义寡核苷酸(asODN),用脂质体将其导入培养的CCL229细胞中,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术、羊膜侵袭试验测定uPARmRNA水平、细胞表面uPAR抗原表达及细胞侵袭力的变化,并在扫描电镜下观察细胞的形态改变.结果为(1)RT-PCR检测asODNs组uPAR/β-actin比值为0.44±0.02,与对照组(0.81±0.01)相比,显著降低(P＜0.05);(2)流式细胞术检测asODNs组癌细胞表面与uPA结合的受体和总受体的平均荧光指数分别为0.20±0.07、0.59±0.09,与对照组(分别为0.72±0.12、2.21±0.36)比较,明显下降(P＜0.01,P＜0.05);(3)体外侵袭试验结果,asODN组在48h和72h后穿过羊膜的细胞数分别为12±2、20±3,与对照组(分别为25±4、44±5)相比,明显减少;(4)扫描电镜观察表明细胞经asODNs作用后,表面伪足和针状突起明显减少.以上各指标在随机序列寡核苷酸(rODN)组和对照组相比,无明显变化.CCL229细胞表面uPAR的表达与癌细胞的侵袭力密切相关,asODNs能有效抑制CCL229细胞uPAR基因的表达,从而抑制相关的蛋白质合成,降低其侵袭性,实验结果在癌症的基因治疗上将具有一定意义.     

反义寡核苷酸的非反义作用

反义核酸作为一种调控特定基因表达的手段,是通过与特异ｍＲＮＡ分子上５′翻译区、ｍＲＮＡ启动－编码重叠区、核内ｈｎＲＮＡ剪接供点结合抑制ｍＲＮＡ的翻译、剪接、转运或通过形成ＲＮＡ－ＤＮＡ杂合双链,激活ＲＮａｓｅＨ,降解ｍＲＮＡ来达到抑制靶基因表达的目的...     

反义技术及其在G蛋白研究中的应用

反义技术至少包括反义寡核苷酸技术、反义RNA技术和核酶技术.在G蛋白研究中,反义技术在G蛋白受体及受体亚型研究、G蛋白转导信号特异性研究方面及对G蛋白耦联信号传导途径与其他信号传导途径之间“cross talk”认识方面的研究中,有着广泛的应用.     

聚丙烯酰胺凝胶固定核酸方法及其应用

固相核酸已被广泛用于DNA/cDNA微阵列、固相PCR及其它核酸与生物分子检测的传感技术中.和硬质玻璃载片相比,三维聚丙烯酰胺凝胶作为固定核酸的载体具有结合核酸容量高、利于反应的类似液相环境和较少的空间效应等优点.综述了丙烯酰胺凝胶作为固定核酸载体的发展历史.着重介绍了丙烯酰胺修饰核酸直接聚合固定的方法以及在DNA芯片、焦测序、固相PCR(克隆)、及全基因组测序等核酸分析中的应用.     

基因组磷硫酰化修饰的研究进展及展望北大核心CSCD

DNA磷硫酰化修饰是DNA骨架上的第一例生理修饰。该修饰由dnd ABCDE编码的5个蛋白协同作用,以硫原子取代DNA磷酸二酯键上一个非桥接的氧原子。研究发现,DNA磷硫酰化修饰广泛存在于各种微生物中,在不同细菌中存在序列特异性,且具有R_P空间构象专一性。近年来,对DNA磷硫酰化修饰的研究取得了一系列的成果。为了对DNA磷硫酰化修饰有一个系统全面的了解,本文将就这一特殊生理修饰的发现过程,研究进展,未来所面临的机遇及挑战作一个简要的概述。     

植物反义寡核苷酸的研究进展

本文介绍了近年来植物中反义寡核苷酸的研究现状,它包括反义ＤＮＡ、反应ＲＮＡ和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ。反义寡核苷酸能特异地拮抗内源或外源基因表达,这为研究某特定基因功能提供了更有效的方法,此外也为培育抗病植株,建立植物反向筛选系统,次生代谢调控及农艺性状改良提供了可能途径。     

EGFR反义脱氧寡核苷酸及其硫代修饰片段抑制人肝癌细胞系BEL-7404细胞生长

本文旨在研究针对EGFR mRNA的反义寡核苷酸片段对BEL-7404细胞EGFR基因表达及其对细胞生长的影响。合成了互补于EGFR基因5′起始编码区的21聚脱氧寡核苷酸(ODNs)。实验结果显示,3.2μmol/L ODNs明显抑制BEL-7404细胞生长,[~3H]TdR掺入抑制试验显示其对细胞DNA合成的抑制作用表现剂量依赖性;密度扫描分析显示ODNs处理6、24h后,肝癌细胞EGFR mRNA分别下降10.5%和14.3%,ODNs处理4天后,细胞EGFR含量下降37.4%,同时观察了同一长度、针对同一靶基因区域的硫代磷酸型反义寡核苷酸对BEL-7404细胞的作用,表明3.2μmol/L ODNs在作用30h内,细胞DNA合成抑制率达62.1%,但此后渐下降,而SODNs在作用96h后达相应的抑制率(此后作用仍持续),提示S-ODNs在体外培养体系中有较好的稳定性。结果表明,针对EGFR基因的反义脱氧寡核苷酸片段可通过部分封闭EGFR基因表达而抑制BEL-7404细胞的生长,而硫代修饰型比未修饰型反义核酸片段具有更好的稳定性。     

反义技术及其在胚胎异常发育机制研究中的应用

综述了反义研究中的几个关键问题,提出严格的ODNs设计,有效的ODNs转运和设计合理的对照等是获得良好实验结果的关键;介绍该技术在各种体外胚胎试验中的应用。