Novo公司在美国开始生产重组酶

丹麦Novo Nordisk公司继日欧之后,也在美国开始利用重组微生物生产酶.Novo Nordisk公司的美国法人Novo Nordisk Biochem公司整顿了重组酶的生产体制. Novo公司最初在美国生产的重组酶是用于淀粉工业和纤维工业的耐热性α-淀粉酶.用生产菌芽孢杆菌属菌株的基因重组提高了产物的产率. 该公司去年10月就重组菌用于工业生产这一专题邀请了工厂所在社区的居民和立法、行政当局召开了约60人的说明会.     

91年12月销售重组胰岛素

新北欧药物公司在12月销售5种重组人胰岛素制剂。这是用美国Zymogenetics公司开发的酵母为宿主,利用基因操作技术制造的。该公司现也已申请引进配合型和注射制剂等,1992年将胰岛素制剂更换成重组人胰岛素,分割该公司和日本市场的盐野义制药公司、美国Eli Lilly公司从1986年销售重组人胰岛素。日本决定1992年用基因操作技术制造胰岛素。丹麦Novo Nordisk公司开发用蛋白分解酶将猪胰岛素(有一个氨基酸序列与人的不同)变换成人型的制造     

用种子表达植酸酶,添加重组种子提高饲料效率

荷兰PlantZyme公司(Leiden)宣布,用基因操作开发大量生产种子特异性植酸酶的技术,重组种子用烤鸡器处理提高了饲料效率(磷酸的吸收效率)。该公司的合作方荷兰Gist-Brocades打算5年内在EU商品化。这次的实验还是初级阶段。但重组种子可用于饲料用酶和食品用酶等的生产、保存和流通。该公司征集合作伙伴共同开发除植酸酶以外的使用重组种子的生产技术。     

信号肽捕获系统的建立

细胞分泌蛋白的分泌有赖于蛋白质N端的信号肽的存在,利用酵母建立了从cDNA文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统,为此,用一步基因破坏法对酿酒酵母EGY48基因组中的suc2基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位突变,获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株EGY48－suc。将无信号肽的suc 2成熟肽基因克隆于酵母乙 氢酶（ADHI）基因启动子下游,得到用于文库筛选的酵母真核表达工体,启动子与成熟肽基因之间为多克隆位 ,用于插入待筛选的CDNA文库,用此载体转化酵母EGY48－suc,所得克隆可以在葡萄糖为碳源的培养基上生长,但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长,在suc 2成熟肽基因前分别插入suc 2信号肽基因片段或人IL－2受体α链信号肽基因片段,然后转染EGY48－suc,所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长,也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长,表明构建的系统可用于筛选插篱多克隆位点cDNA片段是否具有编码信号肽的功能。     

来源于Aspergillus candidus的乳糖酶基因的克隆及序列分析

从一株产乳糖酶的亮白曲霉（Aspergillus candidus)中克隆到了乳糖酶基因组DNA及cDNA序列（EMBL AC－CESSION No.AJ431643),序列分析表明,乳糖酶基因组DNA序列长3458bp,其中含有8个内含子,cDNA编码区长3015bp,共编码1005个氨基酸,前19个氨基酸为信号肽序列,氨基酸序列中共含有11个潜在的糖基化位点。将此基因在不同来源的乳糖酶基因序列进行比较发现,该基因与绝大多数乳糖酶基因同源性较低。虽与米曲霉ATCC20423的乳糖酶序列同源性较高,但其在酶学性质上更优于后者,亮白曲霉的乳糖酶基因可能是一个具有更广阔的生产应用前景的新基因。     

Allelix公司研究出一种丝状真菌表达系统

已开发的商业上可行的活表达系统中使用的微生物越来越多。Alleix公司(多伦多,安大略)利用丝状真菌寄主曲霉属(Aspergillus)研究出两种新的新型胞外蛋白表达系统,包括适用于黑曲霉(一种很有用的工业用菌种)和无冠构巢曲霉(一种遗传特征非常清楚的寄主)的表达-分泌载体。据该公司报道,用此种黑曲霉技术特别适合于异种蛋白,尤其是酶的分泌。本技术的基础是曲霉属能高水平地分泌所需要的产品的这种非常出色的能力。这两种系统包括与无冠构巢曲霉中的一些基因(与乙醇利用有关)和黑曲霉中得到充分     

Hoechst和Novo公司建立rDNA胰岛素厂

欧洲最大的两家可生产胰岛素的公司宣布,打算在重组体DNA技术的基础上建立人胰岛素的生产厂。西德法兰克福Hoechst公司将投资1660万美元于1985年在法兰克福开始建厂。该公司预期这个厂两年后可交付使用。与此同时,丹麦巴斯韦尔Novo Industri A/S公司向丹麦环境管理局申请批准在Koldingberg建一个商业规模的rDNA人胰岛素厂。虽然没有宣布预定的完工或动工日期,但Novo公司声称它目前正在有计划地扩大其中试厂的发     

来源于Aspergillus candidus的乳糖酶基因的克隆及序列分析

从一株产乳糖酶的亮白曲霉(Aspergillus candidus)中克隆到了乳糖酶基因组DNA及cDNA序列(EMBL ACCESSION No. AJ431643),序列分析表明,乳糖酶基因组DNA序列长3458bp,其中含有8个内含子,cDNA编码区长3015bp,共编码1005个氨基酸,前19个氨基酸为信号肽序列,氨基酸序列中共含有11个潜在的糖基化位点。将此基因与不同来源的乳糖酶基因序列进行比较发现,该基因与绝大多数乳糖酶基因同源性较低。虽与米曲霉ATCC 20423的乳糖酶序列同源性较高,但其在酶学性质上更优于后者,亮白曲霉的乳糖酶基因可能是一个具有更广阔的生产应用前景的新基因。      

Novo公司获准制造重组的人胰岛素

丹麦环境保护局已批准Novo工业公司制造基因重组人胰岛素的申请。计划采用酵母菌为宿主生产重组人胰岛素,其回收提纯工段将在该公司花2700万美元新建的Kalundborg工厂中进行,预计在1987年上半年投产。     

日本的生物技术产品降低纸浆和纸张的处理费用

在日本,用酶促和微生物过程降低造纸费用、同时减少污染的产品即将投放市场.研究人员已经找到了用生物技术去除纸浆中非纤维素杂质的方法. 首先是树脂酶(Resinase),它将成为世界上应用最广泛的一种酶.生产它的公司Novo Nordisk's Bioindustrial Group(Bagsvaerd,Sweden)与日本第二大造纸公司Jujo Paper共同开发产品.此酶作用于树脂,也叫树液).树液是伐木时的渗出物.树脂粘滞     

InFerGene公司集中力量生产食品酶

InFerGene 公司的研究与发展部门将力量集中在重组体 DNA 技术的应用上,以改进用于食品和饮料工业的一些酶的微生物生产。最初,InFerGene 公司主要是生产重组体酵母,而现在主要生产一些如曲霉这种丝状真菌和芽孢杆菌种。最主要的计划是生产葡糖淀粉酶。In-FerGene 公司的一些研究人员已从一种曲霉菌株中分离出这种葡糖淀粉酶基因,他们将这种基因插入一种载体,并用它来转化一种更好的寄主菌株。目的是增加每个发酵罐运转期的葡糖淀粉酶产量,减少发酵罐的运转时间,降低生产成本,以获得一种比较标准和统一的产品。     

米曲霉GX0015蔗糖酶基因克隆及生物信息学分析

在亚洲,低聚果糖的工业生产通常利用米曲霉或黑曲霉发酵蔗糖而来,而曲霉含有水解蔗糖和低聚果糖的蔗糖酶。因此要生产高纯度低聚果糖,必须抑制蔗糖酶的水解活性。本研究以工业生产低聚果糖的米曲霉菌株GX0015为研究材料,采用RT-PCR技术,克隆获得蔗糖酶基因(GenBank登录号:EU181219)。利用生物信息学手段对蔗糖酶基因进行分析:该酶为525个氨基酸残基组成的亲水性膜外蛋白;功能域分析结果显示:该酶具有信号肽序列,糖苷酶32家族N端特征序列和糖苷酶32家族特征序列;并具有糖苷酶32家族酶活性中心的NDPNG、RDP和EC保守序列。米曲霉蔗糖酶与酵母菌的转化酶在进化树上的位置最近。     

用曲菌的酰胺酶基因导入酵母试酿日本酒

国税厅酿造试验所第4研究室室主任熊谷知荣子、该主任研究员北本滕彦等将曲菌酰胺酶基因导入清酒酵母(协会酵母),稳定地保持着导入基因,试酿获得成功。现在,正进行宫能检查和成分分析,将在东京召开的日本酿造学会大会上发表这项成果。导入的基因是米曲霉的α淀粉酶和葡聚糖酶。先将α淀粉酶基因搭载到拷贝数多的YEp 类型的载体上     

太湖地区典型菜地土壤微生物16S rDNA的PCR-RFLP分析

土壤微生物多样性是土壤生态功能的基础,但长期以来缺乏对高强度土地利用条件下的土壤微生物多样性的认识.作者采用间接法提取了江苏省太湖地区典型菜地土壤微生物的总DNA,以细菌的通用引物27F和1492R扩增16S rDNA片段,将扩增产物与T-载体酶连,转化大肠杆菌,建立土壤微生物16S rDNA克隆文库.PCR扩增基因文库中插入的16S rDNA外源片段,用两种限制性内切酶Hha I和Rsa I分别酶切,获得该土壤173个克隆的酶切指纹图谱.结果表明,Hha I和Rsa I联合酶切产生了63个基因分型,文库的覆盖度达76.30%,单一酶切产生的基因分型少,但文库的覆盖度高;克隆文库中存在两种优势类群,分别占总克隆的16%和12%.16S rDNA测序结果表明,太湖地区菜地土壤细菌在分类方面主要属于α-和γ-变形杆菌亚门.以上结果为进一步研究太湖地区菜地土壤微生物生态功能提供了基础资料.     

丝状真菌能分泌外源蛋白

Genencor公司的一个研究小组已用重组DNA技术开发出一种丝状真菌分泌系统。他们是用一种曲霉(Aspergillus)实现这一点的。该公司现用大规模发酵曲霉及其他丝状真菌来生产商用的食品级酶。已用这项新技术分泌凝乳酶,此酶通常由牛第四胃的壁衬细胞分泌,可用于奶酪生产。     

新的基因检测系统

找出某一基因是克隆它的前提。Allelix公司已经开发了一种检测广泛的革兰氏阴性菌基因的新的转座子系统,上述菌包括一些尚未存在转化系统的菌种。该公司宣称,这个系统比任何其他转座子系统的效率都高一千倍。加拿大的公司对得到生产该系统的许可证抱有兴趣,或者有意于与其它部门进行合作。典型的应用可能是检测编码那些在工业上有前途的细菌酶的基因。该系统的核心是一个质粒,其 DNA 包括三个主要成分:大肠杆菌中主宰接合作用的野     

霍乱弧菌O139脂多糖基因的克隆表达

霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以串联体的形式集中在一起,这为我们的克隆表达提供了便利条件。 本研究首先用粘粒pCOS5构建了O139霍乱弧菌基因组粘粒文库,在此基础上采用玻片凝集法从基因组文库中初步筛选出可在大肠杆     

利用基因重组技术大量生产第3种砂糖、甜低聚糖

三得利基础研究所开发了用新的耐热性酶大量生产甜味好的甜低聚糖,打算先开发用途,几年后事业化。三得利基础研究所从嗜热性Bacillus属菌中找出作用于砂糖生成甜低聚糖的新酶、α糖苷酶。但是,这种微生物难以培养,所以不能大量生产酶。因此,用大肠杆菌克隆了基因,将酶的生产性提高到天然菌的2000倍,就能大量生产甜低聚糖。对三得利来说将基因重组技术应用于食品是首例。三得利公司先开发了具有双层菌增殖活性的低聚糖—甜低聚糖,配合本公司产品,由本公司及委托生     

沼气池宏基因组文库中未培养微生物β-葡萄糖苷酶基因的克隆与鉴定

以间接提取法提取了沼气池样品的微生物宏基因组DNA,用柯斯质粒载体pWEB:TNC构建了一个含三万个克隆的沼气池宏基因组文库,对文库中的克隆随机分析表明,该文库的外源片段平均长度为40 kb,文库的总容量为1 .2×106kb。对其中的一个在七叶苷平板上显色的阳性克隆pGXN100进行进一步亚克隆、测序和序列分析。结果表明,pGXN100上有一个全长为1 863bp的ORF,编码621个氨基酸组成的蛋白质。将该基因命名为Unglu100。与产气克雷伯菌属的一个β-葡萄糖苷酶基因AN292在核苷酸和氨基酸水平上分别有76%和85%的同源性,利用SMART软件进行预测表明,Unglu100可能是PTS中β-葡萄糖苷酶特异性的转运蛋白组件。     

Genencor公司在酶技术方面取得进展

Genencor公司(南旧金山,加利福尼亚州)在几种可产生大量凝乳酶的丝状真菌的遗传操作方面取得了很大的进展。该公司还在研究一种能产木质素酶的方法,该酶能分解木质素。该公司将凝乳酶基因插入到两种丝状真菌,即泡盛曲霉(Aspergillus awamori)和一种木霉Trichoderma reesei中已获得成功,这些菌分泌出存在于犊牛胃中的物质的精确复制物。