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1.
分离纯化质粒DNA,在遗传工程和质粒的
分子遗传学研究中是重要的一环。分离和制备
质粒DNA的方法很多,有:澳化乙锭密度梯度
祛[2-5]、两相法[6]、酸酚法[7][碱变性法[8]p、甲基化
白蛋白(MAK)柱层析法[9]硝酸纤维素法[10]、电
泳法[11]等,这些方法都各有所长。根据质粒的超
卷曲结构、开环结构和线状结构的不同,各个质
粒分子量大小的不同,以及质粒DNA与RNA
和染色体DNA在电泳中迁移率的不同,在我
们实验室的条件下,研制了一种琼脂糖凝胶电
泳分离纯化和制备质粒DNA装置。运用这种
装置,纯化制备了以下质粒: pBR322, pASI,
pUB110、F}lac+proA+B+, pVA517A, pVA517B,
pVA517C, pVA517D, pVA517E, pVA517F,
pVA517G和pVA517H。并且对它们进行了电
镜观察,对其中纯化过的pBR322和pASI质粒
进行了转化实验,证明它们有生物活性。同时,
应用这种装置,可以一次分离具有不同分子量
大小的几种质粒,回收率约为85多。结果表明,
这种装置结构简单,操作方便,是纯化制备质粒
DNA的一种可用工具。 相似文献
2.
3.
为了快速鉴定重组质粒DNA, Birnboim等
人[1]建立了快速碱性抽提法。在此基础上,我
们作了某些修改,不仅较有效地防止了质粒
DNA变性形式的出现,而且可以用来大量抽提
质粒DNA。若再协同轻基磷灰石柱层析121和酸
酚法[6]处理,可获得纯度较高的质粒DNA。我
们用修改法提取了分子量从2.6X10[6]-26X10[6]
道尔顿的4种不同质粒DNA,均收到了比较理
想的结果,特别对于难于抽提的或大质粒DNA
更为有效。 相似文献
4.
通过氯化艳梯度离心除去细菌DNA及细
菌残渣来分离纯化噬菌体颗粒是一种方便而有
效的方法〔ZJ。其唯一缺点是氯化艳价格昂贵。
Blin等人〔13报道说,可用碘化钾梯度离心法从
琼脂糖电泳凝胶中回收DNA, Smith 13,发展了
Blin法,在碘化钾溶液中加人I MM Na2S20,以
防止碘离子的氧化,使DNA稳定不受干扰。
最近,我们把该法应用于分离纯化兄噬菌体的
重组体DNA,结果表明在噬菌体颗粒的梯度
离心纯化过程中,完全可以用碘化钾替代氯化
艳。 相似文献
5.
质粒DNA的分离纯化通常采用传统的氯
化艳-溪化乙锭密度梯度离心法4),此法结果理
想,但耗钱多,费时长,不是目前我国一般实验
室所能常用的。而琼脂糖凝胶电泳不仅能将分
子量不同的DNA区分,还能区分共价闭环
(ccc) DNA和开环((oc) DNA3),并在此基础上
建立了从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA的
方法。但在回收过程中容易造成cccDNA出现
缺刻(nick)而转变为ocDNA8). 相似文献
6.
7.
高等植物基因组结构 总被引:1,自引:0,他引:1
高等植物基因组结构的研究是当前植物分子生物
学研究的一个重要领域。1976年Walbot和Dure报
道了棉花DNA复性动力学研究结果[26],同年Flavell
和Smith发表了小麦方面的工作[12] 迄今为止已报
道的经DNA复性动力学方法系统研究过的高等植物
还有: 烟草[29],豌豆[22,]大豆[1,15],蚕豆[27]黑
麦[25]欧芹[29],绿豆[23],玉米[16],花生[8],粟[28],亚
麻[6]等。从已发表的情况来看,高等植物基因组结构
在主要方面都和已知的动物方面的情况相仿,下面我
们分几个方面逐项加以讨论。 相似文献
8.
9.
木本植物花药培养的进展 总被引:1,自引:0,他引:1
近十年来,已从木本植物的8个科、9个属、约23
个种中获得了单倍体植株,它们是:茄科的滨黎叶拘祀
(Lycium halimifolzum Mill.)[33],宁夏拘祀(L. barbarum
L.)t'3拘祀(L. chinense Mill.)[2]。杨柳科的
黑杨(Populus nigra L. )[33,小叶杨X黑杨(P. simonit
Carr. X P. nigra L.),大青杨(P. ussuriensis Komar.
)[32],加拿大白杨X香杨(P. canadensis Moench X
P. koreana Rehd.),哈青杨X钻天杨(P. harbinensis
Wang et Skv. X P. pyramidalis Roz.)[4],银白杨X小
叶杨(P. albs L. X P. simonii Carr.)[5],中东杨(P.
berolinensis Dipp. ),中东杨X钻夭杨(P. berolinensis
Dipp. X P. pyramidalis Roz. ),小青杨(P. pseudo-simonii
Kitagawa.)[6],小青杨X钻天杨(P. pseudo-stmonzi
Kitagawa. X P. pyramidalis Roz.)[5],小叶杨(P. simonii
Carr.) M,胡杨(P. euphratica Oliv. )[7][8]。芸香科的权
壳(Poncirus trifolata (L.) Raf.)[25], 柑桔(Citrus
microcarpa Bge.)[9] 葡萄科的葡萄(Vitis vinifera
L.)[10]蔷薇科苹果属的揪子(Malus pruni f olia (Wi-
11d.) Borkh.)[11]以及苹果(Malus pumilea Mill.)[12]。七叶树科的欧洲七叶树(Aesculus hippocastanum L.)[30]
无患子科的荔枝(Litchi chinensis Sonn.)[13]。此外,在
我国已从杉木花药培养获得小植株[14],油茶也已从花
药愈伤组织分化出绿芽点[15]。 相似文献
10.
目的探讨亲缘供者外周血红细胞参数对COBE Spectra血细胞分离机的自动外周血干细胞采集程序(AutoPBSC程序)与单个核细胞采集程序(MNC程序)的影响及经验分析。 方法选取河北燕达陆道培医院2019年6月至2021年2月小红细胞亲缘供者31例45次采集为小红细胞组,选取同期非小红细胞亲缘供者51例60次采集为非小红细胞组,分别应用AutoPBSC程序和MNC程序,比较两组采集情况及采集产品相关指标。采用独立样本t检验和Mann-Whitney U检验分析2组计量资料的差异。 结果与小红细胞AutoPBSC程序组比较,小红细胞MNC程序组血小板(PLT)降低率[(25.88±15.83)﹪比(36.64±10.22)﹪]、采集效率[32.65﹪(23.60﹪,73.82﹪)比63.74﹪ (59.83﹪,68.55﹪)]、采集物体积[(158.83±34.39)比(222.91±63.9)mL]、MNC总数[(218.04±117.57)×108/L比(350.24±127.64)×108/L]、CD34+细胞总数[113.83×106/L (79.25×106/L,154.10×106/L)比233.26×106/L (177.18×106/L,392.51×106/L)]、MNC计数[(4.04±2.61)×108/kg比(5.54±2.22)×108/ kg]、CD34+计数[1.84×106/kg (1.16×106/kg,4.41×106/kg)比3.64×106/kg (2.49×106/kg,6.37×106/kg)]均升高,差异有统计学意义(P < 0.05);与非小红细胞AutoPBSC程序组比较,非小红细胞组MNC程序组采集物体积[(162.83±51.74)比(242.56±43.25)mL]升高,差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论对造血干细胞移植供者红细胞体积偏小时,应用MNC程序采集外周血造血干细胞,比应用AutoPBSC程序更有优势。 相似文献
11.
椪柑营养诊断的DRIS初步标准 总被引:1,自引:0,他引:1
自1973年Beaufils提出综合诊断施肥法(Diagnosis and Recommendation Integrated System,简称DRIS)[1]后,Sumner等人相继制订了大豆[2]、玉米[3]、甘蔗[4]、马铃薯[5]和小麦[6]等农作物的DRIS标准,并在生产中获得了广泛的应用。但在柑桔生产中,直到1984年Beverly等人才建立伏令夏橙的DRIS标准[7]。而对椪柑的DRIS标准则至今尚未见报道。本文根据庄伊美等报道的福建省24个高产(亩产2000-5000公斤)椪柑园的资料[8],试图制订椪柑的DRIS初步标准,以供生产上应用之参考。 相似文献
12.
13.
在DNA体外重组技术的研究和应用中,转
化是个很重要的步骤。自Cohen等人[2]在1972
年首次用CaCl:处理的方法成功地进行了R因
子对E. colt C600的转化之后,这个方法一直
广泛地应用于大肠杆菌各受体菌系的转化。鼠
伤寒沙门氏杆菌S. typhimurium[3]和金黄色葡
萄球菌S. aureus[4],的转化也都沿用此法。直
至1978年,Michael等[5]在用pBR 322质粒
DNA对E. colt X1776的转化中却采用了与
此不同的方法。 相似文献
14.
[目的]优化噬热栖热菌Thermus thermophilus的转化体系。[方法]将质粒DNA的形态、浓度及转化时间作为变量设计噬热栖热菌T.thermophilus的转化体系,以通过直接双交换同源重组法获取Δpyr E突变体的概率为依据判定转化效率。[结果]在转化时间为2 h,使用3.0μg/m L线性质粒DNA,获取表观Δpyr E的概率为3.44×10-5;而使用同样浓度的超螺旋质粒DNA,该概率可达1.03×10-3;说明超螺旋质粒的转化效率高于线状质粒。质粒DNA的使用浓度及转化反应时间对转化效率亦有影响,但并非完全成正相关。使用浓度为15μg/m L超螺旋质粒DNA,在转化时间为3 h时,获取表观Δpyr E的概率达到最大值(1.36×10-2);超过该阈值,转化效率降低。[结论]在T.thermophilus中,通过优化转化体系将基因无痕敲除突变体获取概率提高到10-2。 相似文献
15.
16.
香英兰根腐病是为害香荚兰的严重病害之一,世界上很多香荚兰产区均有发生,在波多黎各发生特别严重,已成为该地区发展香荚兰生产的阻碍因素[10,11]。近年来,马达加斯加[9]、印度[6]、乌干达[5]均报道过本病。 相似文献
17.
18.
Bolivar等u]于1977年用人工重组技术从ColEl质粒构建出声pBR322质粒,由于pBR322质粒带有两个抗药性标记,有多拷贝以及多种限制性内切酶单一切点等特性,近年来已被广泛用作重组DNA实验的载体。Collins等[2]用pBR3222质粒与λ charon 4A的带有Cos位点的EcoRI酶切片段重组,进一步得到cosmid质粒,cosmid质拉除了具有pBR322质粒原来的优点外,它能够携带更大的外源DNA片段(40Kb),能够像λ charon 4A一样在体外进行包装,从而提高转化率。 相似文献
19.
在重组DNA实验中,获得高纯度的质粒DNA是构建载体所必须的步骤之一。目前,国内外多数实验室沿用氯化铯梯度离心法纯化质粒DNA,本文介绍了一种改进的提取和纯化质粒DNA方法,简便易行。 材料和方法 材料 RNase(Oxioid England),胰蛋白胨(Oxioid England),琼脂糖(Sigma Ⅰ型),BamHI(Bio Lab)。其它试剂均为国产分析纯。所用菌种为E.coli JA221(hsd R.trp E5.Leu 相似文献
20.
630例正常学龄儿童手的皮纹学观察 总被引:5,自引:1,他引:4
近几年,皮纹学(Dermatoglyphics)的研究
已广泛应用于临床有关疾病的诊断。Reed[5]根
据皮纹表现的规律,制定了一个皮纹图式,做为
医生诊断某些疾病的简单依据。Uchrida[6],则依
皮纹表现,提出七条做为检查染色体疾病的适
应征。观察证明,皮纹学不但在染色体疾病中
已得到应用,进而对先天性心胜病[7]癌症[8]、小
儿白血病[9]以及子宫内环境影响(如病毒、药
物)胎儿皮纹学变化[2]等方面均有报告。我国
除在法医上早有应用外,近年来在先天性大脑
发育不全患儿的染色体检查诊断中,使用了皮
纹学的方法[1]。为了进一步做好染色体疾病的
诊断、先天性畸形的研究、探讨皮纹学与遗传性
疾病的关系,有必要做一些临床常用的正常值,
特别是儿童时期的皮纹学常值,以便与其它各
种异常情况进行对比。本文是在初报250例[3]
的基础上,增加到63。例的进一步观察报告。 相似文献