地衣芽胞杆菌活菌制剂的临床应用进展

整肠生是应用二十多年的地衣芽胞杆菌活菌制剂,已有大量的研究报道其临床有效性和安全性。地衣芽胞杆菌大量分泌种类丰富的消化酶,通过抑制肠道有害菌生长和促进有益菌增殖调节肠道菌群,并产生杆菌肽、地衣素和乙酸等生物活性物质发挥益生作用。本文总结了益生菌的益生特点,并重点分析了芽胞杆菌的益生特点,归纳了整肠生的作用机制与临床研究现状,揭示了其在肝脏疾病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、幽门螺旋杆菌感染以及病毒感染等疾病中的治疗作用,并对整肠生未来的临床应用方向进行了展望。     

蜡样芽胞杆菌活菌制剂(源首胶囊)治疗婴幼儿及成人腹泻60例临床观察

我院从１９９５年８月～１９９６年１０月用安阳市源首生物药业有限责任公司生产的蜡样芽胞杆菌活菌制剂（源首胶囊）治疗婴幼儿、成人急慢性腹泻６０例,取得良好疗效,现报告如下：１临床资料１１一般资料：本组６０例,年龄１～８３岁,最小５个月,最大８３岁,其中...     

枯草芽胞杆菌活菌制剂促进烧伤创面愈合的实验研究

目的　探讨枯草芽胞杆菌活菌制剂对烧伤创面愈合的影响。方法　通过大鼠深Ⅱ°烧伤模型,使用枯草芽胞杆菌活菌制剂,观察烧伤创面愈合过程中,成纤维细胞增殖周期的变化,以及测定羟脯氨酸（OHP）的含量,同时记录烧伤创面愈合时间,从而评价该制剂对烧伤创面愈合的影响。结果　应用枯草芽胞杆菌活菌制剂可促进成纤维细胞分裂、增殖,胶原含量提高,创面愈合时间明显缩短。结论　枯草芽胞杆菌活菌制剂具有促进烧伤创面愈合的作用。     

凝结芽胞杆菌活菌片对实验性腹泻小鼠的治疗作用

目的 观察凝结芽胞杆菌活菌片对氨苄青霉素钠诱发的小鼠腹泻的治疗作用。方法利用氨苄青霉素钠口服诱发小鼠实验性腹泻和肠道菌群失调,然后用凝结芽胞杆菌活菌片,口服,每天2次,共4d,观察治疗后的小鼠排便和肠道菌群变化。结果在各给药组中,治疗第1天有70％～85％的小鼠排正常便,生理盐水组只有10％排正常便（P〈0．01）;治疗第2天给药组中有80％～90％的小鼠排正常便,生理盐水组仅为50％（P〈0．01）。肠道菌群分析结果表明,凝结芽胞杆菌在治疗第2天开始定植,停药第7天后逐渐消失,定植期为10d左右。在各给药组中,治疗第2天肠道菌群开始恢复,第4天均升高到正常,而生理盐水组的恢复比各给药组显著的慢（P〈0．01）。结论 凝结芽胞杆菌活菌片对小鼠实验性腹泻有明显的止泻作用,并能加速肠道菌群的恢复。     

双歧杆菌DM-8504活菌制剂预防化疗引起的腹泻疗效观察

２２例肿瘤化疗患者采用随机对照交叉试验,对照组采用单纯化疗实验组采用化疗＋双歧杆菌活菌制剂。结果显示双歧杆菌活菌制剂可预防化疗引起的腹泻（对照组腹泻率４５．５％,实验组为２７．３％）,并可改善腹珠反应程度（重度腹泻率对照组为１８．２％,初级组为４．５％）,有统计学差异（Ｐ〈０．０１）,提示双歧杆菌活菌制剂预防化疗引起的腹泻疗效确切。     

蜡样芽胞杆菌在双歧杆菌四联活菌片治疗小鼠腹泻中的作用研究

目的研究双歧杆菌四联活菌片中的蜡样芽胞杆菌对小鼠腹泻治疗作用的影响。方法将SPF小鼠采用抗生素联合伤寒沙门菌和志贺菌诱导建立腹泻模型,取112只造模成功后的小鼠随机分为7组,其中三组分别喂养3种不同剂量的四联活菌片,三组分别喂养3种不同剂量的不含蜡样芽胞杆菌的三联活菌片,余下一组为对照组灌胃生理盐水。比较各组小鼠腹泻的治愈时间,测定粪便菌群、结肠组织耗氧能力及氧化还原电势、肠内sIgA含量及脾脏指数变化。结果相同剂量条件下,含蜡样芽胞杆菌的四联活菌片治愈腹泻时间比三联活菌片缩短48~72h。治疗48h后,四联活菌片组肠内sIgA水平明显增加,与三联活菌片组相比差异有统计学意义(t=5.5783,P=0.0002);治疗结束后,四联活菌片组的脾脏指数也显著高于三联活菌片组(t=18.8648,P=0.0001)。结论含蜡样芽胞杆菌的四联活菌片对小鼠腹泻的治疗及肠道菌群的恢复作用比三联活菌片效果更佳,能显著促进腹泻小鼠肠黏膜局部免疫力的提高。     

枯草芽胞杆菌微生态制剂的研制

采用液体发酵工艺,确定枯草芽胞杆菌的最适发酵条件为:发酵温度30℃,初始pH值7.2,并以1%海藻酸钠和3%明胶组成的混合胶体溶液为囊壁材料,以4%氯化钙作固化剂将枯草芽胞杆菌制成微胶囊剂,稳定性试验结果显示经微胶囊包埋的枯草芽胞杆菌制剂,室温下保存1个月,活菌存活率为98.8%,保存3个月,活菌存活率为50.6%,保存6个月,活菌存活率为15.7%,均高于未经微胶囊化的样品;在4℃冷藏下保存3个月,未经微胶囊化的样品活菌存活率仅为经微胶囊包埋制剂的66.2%。该微胶囊制剂提高了活菌存活率,延长了活菌常温保存期。     

地衣芽胞杆菌在消化系统疾病中的应用

地衣芽胞杆菌在土壤等环境中普遍存在,体外研究显示该菌株的代谢产物可对致病菌的生长产生抑制作用。地衣芽胞杆菌活菌制剂进入肠道后可产生多种抗菌物质,并可通过生物夺氧作用改善肠道内环境,具有调节肠道微生态,改善消化道屏障功能,减轻炎症反应,增强免疫功能等作用,在肠道菌群失调相关疾病中应用前景广阔。地衣芽胞杆菌活菌制剂已广泛应用于腹泻疾病的治疗,并在炎症性肠病、某些肝病及幽门螺杆菌根除等治疗的研究中显示出其在改善肠道内环境,促进病情缓解的疗效。本文将对地衣芽胞杆菌活菌制剂及其消化系统疾病中的应用进行简要的叙述,并对该益生菌的研究方向做初步的探讨。     

地衣芽胞杆菌培养条件的研究

应用单因素和正交试验设计试验法对地衣芽胞杆菌在摇瓶水平上进行了培养基配方和培养条件的研究。结果表明：最适培养基配方为山芋淀粉1．0％,豆粕0．6％,玉米芯粉0．8％,K2HPO4 0．1％,MgSO40．1％。最适培养条件为37℃,摇床转速150r／min,250mL三角瓶装液50mL,接种量5．0％,振荡培养48h,pH7．0。在20L自动发酵罐中进行了扩大培养试验,考察溶氧对菌体生长的影响,并根据试验结果进一步扩大至1m^3发酵罐,通过控制搅拌速度和通气量,1m^3发酵罐中地衣芽胞杆菌培养液菌浓为7．2×10^9efu／mL,芽胞率达到90％。     

能量代谢工程促地衣芽胞杆菌DW2高效合成杆菌肽

杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性环肽类抗生素,目前广泛应用于兽药领域。能量代谢在微生物高效合成目的代谢产物中具有重要作用。文中以杆菌肽工业生产菌株地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株,首先构建了呼吸链分支途径细胞色素bd泛醇氧化酶基因cydB缺失菌株,发现cydB缺失后杆菌肽效价和胞内ATP浓度相比于对照菌株分别提高了10.97%和22.96%。接着,证实了强化表达另外一条呼吸链分支途径——细胞色素aa3氧化酶基因qoxA能够提高杆菌肽合成水平,其杆菌肽效价和胞内ATP浓度相比于对照菌株分别提高了18.27%和34.00%。强化ADP合成供给也是促进胞内ATP积累的有效策略,结果表明强化表达腺苷激酶DcK和腺苷酸激酶AdK均可以提高杆菌肽效价和胞内ATP浓度,其中强化表达DcK效果较好,其杆菌肽效价相比对照提高16.78%。最后,通过组合代谢工程育种,在基因cydB缺失菌DW2ΔcydB基础上整合表达了qoxA和dck,得到工程菌株DW2-CQD(DW2ΔcydB::qoxA::dck),发酵结果表明,DW2-CQD杆菌肽效价达到954.25 U/mL,相比于对照菌株提高了21.66%,单位菌体杆菌肽效价为2.11 U/CFU,相比对照提高了11.05%。此外,DW2-CQD胞内ATP浓度为39.54 nmol/L,相比于对照提高了49.32%。结果证实能量代谢工程是提高杆菌肽发酵水平的有效策略,提供了一株具有工业化应用前景的杆菌肽生产菌株。     

Development of an asporogenic Bacillus licheniformis for the production of keratinase

AIMS: Bacillus licheniformis PWD-1 is a keratin-degrading, spore-forming bacterium isolated from a poultry waste digester. A sporulation-deficient mutant of B. licheniformis PWD-1, named B. licheniformis WBG, was developed and characterized. METHODS AND RESULTS: The mutation was generated using the splicing by overlap extension PCR method (Gene SOEing) to create 256 bp deletion in the spoIIAC gene, which encodes an essential sporulation-specific sigma factor. In vivo gene replacement was accomplished with the use of a temperature-sensitive plasmid that is able to integrate and excise the nucleotide fragment 256 bp from the B. licheniformis chromosome. PCR analysis and DNA sequencing confirmed the spoIIAC gene deletion. Heat-treatment assays and electron microscopy verified the absence of spores. CONCLUSIONS: This asporogenic strain is able to express normal levels of keratinase when compared with its wild-type host. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: In this study, a method of constructing a stable sporulation-defective strain was developed. It can be potentially useful as a tool to generate asporogenic strains of Bacillus that retain their industrial capabilities for production of exoproteases and other exozymes.     

溶剂稳定性蛋白酶产生菌Bacillus licheniformis YP1的发酵优化

溶剂稳定性蛋白酶产生菌Bacillus licheniformis YP1分离自油田土样。考察了碳源、氮源、金属离子等营养因素对YP1菌株发酵产溶剂稳定性蛋白酶的影响。YP1菌株发酵产胞外蛋白酶的最佳碳源为淀粉,果糖、甘露糖和乳糖显著抑制产酶;最佳氮源为酵母膏,干酪素、酵母粉和牛肉膏促进产酶,玉米浆和尿素显著抑制产酶。Mn^2＋可以显著促进酶活,Mg^2＋可以促进产酶,在初步优化的培养条件下,YP1菌株的胞外蛋白酶产量达980U。     

产生物表面活性剂的地衣芽孢杆菌种子培养条件研究

本文对产生物表面活性剂的油藏地衣芽孢杆菌种子培养条件进行优化.通过测定种子培养液中菌体浓度和发酵液的菌浓及表面张力,研究温度、通气量、接种龄、接种量对种子生长和发酵产生物表面活性剂的影响.确定了种子适宜培养条件为装液量100 mL/250 mL,12层纱布封口,于50 ℃、180 r/min摇床培养14 h.以10％接种量接种发酵,发酵24 h的发酵液表面张力降至最低,为22.6 mN/m.在该条件下培养种子,可缩短种子培养时间,实现提前接种发酵并高产生物表面活性剂.     

Co-linear scaffold of the Bacillus licheniformis and Bacillus subtilis genomes and its use to compare their competence genes

We have established the co-linear regions of Bacillus licheniformis, an industrially important bacterium, and Bacillus subtilis, a model bacterium. In the co-linear regions, revealed by PCR, gene content and order are presumed to be conserved. These regions constitute approximately 60% of the compared chromosomes. Sequencing of the competence genes of B. licheniformis allowed us to validate the approach, and to demonstrate how it can be used for the comparative analysis of complex genetic systems. A new insertion sequence, designated IS3Bli1, was discovered in the competence region of the analyzed B. licheniformis strain.     

微生态系统中地衣芽孢杆菌消长的研究

采用不同接种培养方法,研究了地衣芽孢杆菌在微生态系统的消长状况．结果表明,在健康人体内该菌能迅速增殖,菌数为１．４９×１０８～１．８３×１０８个·ｇ－１,并能较长时间定植下来,３０ｄ后菌数为１．２７×１０７～１．５１×１０７个·ｇ－１．在病人体内增殖相对较慢些,菌数为１．４０×１０８～１．６７×１０８个·ｇ－１,３０ｄ后菌数为１．１５×１０７～１．３１×１０７个·ｇ－１．在人工模拟微生态系统中,当ｐＨ为５．０～９．０,营养物为食物匀浆培养基、牛肉膏蛋白胨培养基时,其菌数为３．０５×１０８、３．４２×１０８个·ｍｌ－１．     

Heterodimeric Aminopeptidase A from Bacillus licheniformis NS115

An aminopeptidase A (EC 3.4.11.7) was purified to homogeneity from Bacillus licheniformis NS115 and its enzymatic properties were characterized. The enzyme had an apparent molecular mass of 64 kDa, consisting of heterodimeric 42 kDa and 22 kDa subunits, and is a new enzyme from N-terminal analysis of heavy and light subunits. The light suhunit had no catalytic activity against the substrate and apparent K_m values of heavy and whole enzyme were 0.26 and 0.087 mM of γ-glutamyl-p-nitroanilide, respectively.