食用菌超细粉免疫调节和抗氧化功能研究

以糙皮侧耳、双孢蘑菇、金针菇、3个黑木耳品种、3个香菇品种为材料,通过测定小鼠体重、免疫器官重量、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞的吞噬功能、血清及肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、肝脏中白介素-6、丙二醛等指标进行小鼠免疫功能的评价研究。结果表明:"四川青川"香菇、"北神奇1号"黑木耳和"黑龙江黑29"黑木耳能显著增强小鼠的细胞免疫功能;糙皮侧耳、"辽宁恒仁"香菇、金针菇、"北神奇1号"黑木耳、"黑龙江黑29"黑木耳均能显著促进小鼠单核吞噬细胞的吞噬能力,增强小鼠机体的免疫力;糙皮侧耳、"四川青川"香菇、"辽宁恒仁"香菇、金针菇和"黑龙江黑29"黑木耳具有提高小鼠肝脏中白介素-6含量的作用;双孢蘑菇、"福建古田"香菇、"辽宁恒仁"香菇、金针菇增加小鼠血清溶血素水平,具有显著的特异性体液免疫增强作用。此外,双孢蘑菇、金针菇、"北神奇1号"黑木耳、"吉林黑29"黑木耳均可显著提高血清和肝脏中的GSH-PX活性;糙皮侧耳能提高小鼠血清中和肝脏中SOD活性;从而达到清除自由基和抗氧化损伤的作用。综合上述结果,9种食用菌超细粉均具有显著增强小鼠免疫调节能力和抗氧化作用,为食用菌功能食品产品开发利用提供支撑。     

小麦肽对受环磷酰胺免疫抑制小鼠的免疫调节及抗氧化功能

本研究旨在分析小麦蛋白活性肽对免疫抑制小鼠免疫功能和抗氧化功能的调节作用。小鼠灌胃小麦肽10d,第8天用环磷酰胺诱导免疫抑制,测定血清溶血素、抗体生成细胞含量、脾细胞增殖、体外腹腔巨噬细胞吞噬能力、肝脏抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量以及血清清除DPPH和·OH的能力。实验结果表明,环磷酰胺处理显著的降低了小鼠血清中抗SRBC抗体(溶血素HC50)水平和腹腔巨噬细胞的吞噬能力;同时伴随着肝脏超氧化物歧化酶活性(SOD)、过氧化氢酶活力(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)的降低和MDA含量的提高。给小鼠灌胃小麦肽可以恢复HC50和脾细胞增殖,显著提高抗体生成细胞含量和腹腔巨噬细胞吞噬能力;此外,小麦肽增强了小鼠血清清除DPPH和清除·OH的能力。以上结果表明,小麦肽可以调节应激状态引起的机体抗氧化体系紊乱及免疫功能的降低。这可能与小麦肽缓冲自由基生成、激活腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞活性有关。     

人工合成胸腺肽α1对正常小鼠和免疫抑制荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的:本研究通过对正常小鼠和免疫抑制荷瘤小鼠皮下注射人工合成胸腺肽α1 (sTα1).方法:检测各组小鼠淋巴细胞亚群比率、T淋巴细胞增殖数量和脾细胞细胞因子的表达水平三个指标,来判定sTα1对小鼠免疫功能的影响.结果:sTα1可提高小鼠外周血CD4+T细胞比率、降低CD8+T细胞比率,使CD4+/CD8+的T细胞比率增加.sTα1能明显加强正常小鼠、环丙酰胺(CTX)免疫抑制小鼠和荷瘤+CTX免疫抑制小鼠的脾淋巴细胞的增殖(P＜0.5),明显促进正常小鼠及各免疫抑制组小鼠脾细胞细胞因子mIL-2和mIFNγ释放(P＜0.5).结论:sTα1可促进T细胞的快速成熟,活化T细胞,纠正了荷瘤和化疗药物产生的免疫抑制作用,有效刺激免疫系统,促进Th1型细胞免疫反应.     

合成肺炎链球菌荚膜多糖基因的研究进展

肺炎链球菌是导致婴幼儿和老年人罹患肺炎、脑膜炎、中耳炎等疾病的主要病原体之一,其致病力与位于细菌表面的荚膜多糖密切相关,而荚膜多糖层的薄厚和多糖结构是影响致病力的主要因素。在分子水平探索参与荚膜多糖合成的相关基因,不仅有助于进一步理解肺炎链球菌的致病机理,而且可从基因水平选育高表达荚膜多糖的肺炎链球菌菌株用于多糖疫苗的研发。鉴于此,现就合成肺炎链球菌荚膜多糖基因的作用机制和研究方法作一综述。     

~1H-NMR用于肺炎链球菌荚膜多糖质量控制的尝试

纯化的6B、18C血清型肺炎链球菌荚膜多糖用生化试验和免疫学试验检测分析后再用一维氢谱核磁共振波谱(1H-NMR)法分析。生化检测其相应多糖的主要化学基团含量是否合格,免疫学检测旨在了解多糖纯化工艺是否影响了多糖的抗原活性,并间接佐证纯化多糖的生化特性是否正确。在此基础上进行1H-NMR分析,可以对纯化多糖的特性有进一步的了解。结果表明,常规的生化检测试验和免疫学检测试验并联合应用1H-NMR分析法后可更好地控制纯化肺炎链球菌荚膜多糖的质量。     

肺炎链球菌荚膜多糖纯化及质量控制方法的研究现状

肺炎链球菌(简称肺炎球菌)荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)位于肺炎球菌的最外层,是肺炎球菌主要的毒力因子之一,也是有效的保护性抗原.获得高质量的肺炎球菌CPS,是肺炎球菌多糖疫苗(pneumococcal pol-ysaccharide vaccine,PPV)和肺炎球菌结合疫苗(pn...     

肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控作用

摘要:【目的】研究肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对肺炎链球菌荚膜多糖(CPS)的调控作用。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)工程菌原核表达CcpA蛋白,使用Ni2+亲和层析的方法纯化蛋白。利用纯化后的CcpA蛋白免疫昆明小鼠并制备多克隆抗体;采用ELISA法测定抗CcpA抗体效价。随后,利用Westertn blot方法分析CcpA蛋白在肺炎链球菌中的保守性。另外,利用EMSA方法分析CcpA与cps基因座启动子区域片段的结合。最后,构建ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株;利用ELISA法测定野生D39菌 株、ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株的荚膜多糖含量。【结果】Western blot结果显示CcpA蛋白在多种血清型的肺炎链球菌均有表达,CcpA蛋白可与cps基因座启动子区域结合,且呈剂量依赖性;ccpA基因缺失时,细菌CPS含量升高,回复表达CcpA蛋白后,CPS含量显著降低。【结论】CcpA是肺炎链球菌中一种保守表达的蛋白,可通过调节cps基因座启动子负性调控肺炎链球菌荚膜多糖的表达。     

日本虫草子实体多糖抗氧化及免疫调节作用

为明确日本虫草子实体多糖（CJPs）的抗氧化活性及免疫调节作用,本研究以子实体为原料,采用热水浸提法得多糖,通过对ABTS自由基、DPPH自由基、·OH自由基清除能力评价CJPs的体外抗氧化活性;探讨CJPs对氢化可的松诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用。结果表明,CJPs对ABTS、DPPH、·OH自由基均有明显的清除效果,且存在量效关系,IC₅₀分别为0.165、0.098、0.253mg/mL;灌胃CJPs的小鼠与模型组相比,免疫器官指数、巨噬细胞吞噬指数、血清中细胞因子水平、免疫球蛋白含量均有所提高,脾脏中乳酸脱氢酶（LDH）和酸性磷酸酶（ACP）的活力显著增强（P<0.05或P<0.01）。该研究表明CJPs是一种潜在的抗氧化剂,并能显著提高免疫低下小鼠的免疫功能,为其进一步研究和应用提供了科学依据。     

6群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究

目的利用分子生物学方法,对25株6群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)进行研究。方法采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术,对25株6群肺炎链球菌进行分型;依据Gen Bank中收录的6群肺炎链球菌cps loci设计合成引物,以25株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行基因测定及分析;采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和wciP、wzy、wzx这三个cps loci的代表基因分别绘制出系统发育树。结果根据MLST技术分析发现7株新的ST型菌株。25株6群肺炎链球菌cps loci的G+C含量为35.4%~35.5%,均属于I类;所有6C型wzy基因均有6个碱基的缺失。根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树,并根据cps loci的3个代表基因wciP、wzy和wzx绘制的系统发育树,差异很大。3个代表基因绘制的系统发育树,6C型为进化距离比较远的分枝,6A型和6B型的分枝进化距离相对较近;6D型与6B型在同一分枝内。结论获得了25株6群肺炎链球菌ST型和全长cps loci,完善了6群肺炎链球菌的菌种档案。     

艰难梭菌荚膜多糖的提纯和分析

本文采用改进的丙酮法制备了艰难梭菌荚膜多糖。制备的荚膜多糖纯品含荚膜多糖达72％,在Sepharope-4B凝胶层析中,该英膜多糖的分配系数(Kd)为0.77。经对流免疫电泳法鉴定,纯化后的荚膜多糖仍保持着原性,用制备的艰难梭菌荚膜多糖免疫小白鼠,经间接法ELISA检测,未见抗荚膜多糖抗体明显增高。     

Antioxidant acitivity in vitro and in vivo of the capsule polysaccharides from Streptococcus equi subsp. zooepidemicus

Crude capsule polysaccharides (CCP) were prepared from the culture of Streptococcus equi subsp. zooepidemicus C55129 and were partially purified through an anion-exchange column chromatography to afford partially purified capsule polysaccharides (PCP). The main component of CCP and PCP was hyaluronic acid. In vitro antioxidant assay, the capsule polysaccharides showed strong inhibition of lipid peroxidation and hydroxyl radical scavenging activity and moderate 1,1-diphenyl-2-picryldydrazyl radical scavenging activity. In addition, CCP exhibited much stronger reductive power than PCP. For antioxidant testing in vivo, CCP and PCP were orally administrated over a period of 15 days in a d-galactose induced aged mice model. As results, administration of capsule polysaccharides inhibited significantly the formation of malondialdehyde in mice livers and serums and raised the activities of antioxidant enzymes and total antioxidant capacity in a dose-dependent manner. However, the antioxidant activity of CCP was lower than that of PCP. The results suggest that the capsule polysaccharides from Streptococcus equi subsp. zooepidemicus C55129 have direct and potent antioxidant activities.     

罗汉果多糖对环磷酰胺所致的免疫 抑制小鼠免疫功能的影响

该研究将小鼠随机分成正常组,模型组,罗汉果多糖低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg~(-1))和左旋咪唑组,采用腹腔注射环磷酰胺(20 mg·kg~(-1))建立免疫抑制小鼠模型,连续灌胃给药14 d后,测定各组小鼠的免疫器官指数、廓清指数(K)、吞噬指数(α)、T和B淋巴细胞增殖水平、耳肿胀度、半数溶血值(HC50)以及免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α的含量,并观察脾组织病理形态变化,考察罗汉果多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。结果表明:罗汉果多糖各剂量组(25、50、100 mg·kg~(-1))均能显著提高免疫抑制小鼠的免疫器官指数、半数溶血值(HC_(50))、B淋巴细胞增殖能力,明显降低耳肿胀度,显著增加IgG、IgM、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α的含量。罗汉果多糖中、高剂量组(50、100 mg·kg~(-1))能显著增强T淋巴细胞增殖能力,明显增加廓清指数(K)、吞噬指数(α)。脾组织病理学观察结果表明,罗汉果多糖可以减轻免疫抑制小鼠脾脏的病理损伤。这表明罗汉果多糖能明显增强环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能。     

一种构建马链球菌兽疫亚种血红素受体基因缺失突变株的方法

【目的】探讨一种构建马链球菌兽疫亚种基因缺失突变株的方法。【方法】PCR扩增目的基因,用pJR700温度敏感载体系统,构建目的基因载体;反向PCR扩增目的基因缺失载体片段,连接,产生目的基因缺失载体;电转化缺失重组质粒导入感受态细胞,先在37℃卡拉霉素(kan)培养基中连续培养,然后在30℃不含kan液体培养基中传代,挑取抗生素敏感菌落,PCR扩增检测抗生素敏感菌染色体上目的基因片段和链黑霉素抗性实验确认血红素受体基因缺失。【结果】获得不含抗生素基因的马链球菌兽疫亚种血红素受体基因缺失突变株。【结论】用pJR700温度敏感载体系统,构建马链球菌兽疫亚种基因缺失突变株是可行的。     

阿里红多糖对小鼠抗疲劳和耐缺氧的作用*

目的:研究阿里红多糖对小鼠的抗疲劳和耐缺氧作用。方法:将48只小鼠随机分为4组(n=12),即对照组,低、中、高剂量阿里红多糖组(100、200、400 mg/kg)。各组小鼠按0.20 ml/10 g每日连续灌胃21 d后,观察不同剂量的阿里红多糖对小鼠负重游泳时间,运动后血清尿素氮、血乳酸、肝糖原、肌糖原含量和常压耐缺氧存活时间、断头后呼吸维持时间的影响。结果:与对照组相比,阿里红多糖能延长小鼠负重游泳时间、耐缺氧存活时间及断头后呼吸维持时间,其中中、高剂量组差异均极显著(P＜0.01),低剂量组差异显著(P＜0.05);阿里红多糖能降低运动小鼠血清尿素氮、血乳酸含量,增加运动小鼠肝糖原、肌糖原含量,且大都差异显著(P＜0.05)或极显著(P＜ 0.01)。结论:阿里红多糖具有抗疲劳作用和提高耐缺氧能力作用。     

Development of an in vivo Himar1 transposon mutagenesis system for use in Streptococcus equi subsp. equi

Streptococcus equi subsp. equi is the causative agent of the equine disease strangles. In this study we describe the development of an in vivo Himar1 transposon system for the random mutagenesis of S. equi and, potentially, other Gram-positive bacteria. We demonstrate efficient and random transposition of a modified mini-transposon onto the chromosome by Southern blot analysis and insertion site sequencing. Non-haemolytic mutants were isolated at a frequency of 0.2%, and acapsular mutants at a frequency of 0.04%. Taken together, these data demonstrate that in vivo Himar1 mutagenesis can be used for genomic-scale mutational analysis of S. equi, and is likely to be applicable to the study of other streptococci.     

蔓三七茎多糖理化性质及抗氧化和免疫调节研究

为提取蔓三七茎中的多糖及研究它的理化性质并评价其抗氧化、免疫调节活性,以蔓三七茎为原料,采用水提醇沉法获得蔓三七茎粗多糖(GPSCP),先测定了粗多糖的含量、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量。再采用Sevage试剂和透析法对蔓三七茎粗多糖进行纯化,得到蔓三七茎多糖(GPSP)。采用气相色谱法测定GPSP中单糖组分和红外光谱测定多糖的结构,通过总抗氧化能力、DPPH自由基、OH自由基的清除能力评价GPSP的体外抗氧化能力;通过体外实验评估GPSP对RAW264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,所得GPSCP的得率为15.56%,总糖含量为52.32%;GPSP的得率为8.67%,含量为78.54±2.13%;GPSP中单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为1.69∶4.64∶9.17∶1.00∶1.92∶4.85。体外抗氧化实验结果表明,GPSP具有良好的抗氧化能力,对总抗氧化能力、DPPH和OH自由基清除效果明显。GPSP可显著提高RAW264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度,在给药浓度为50.0μg/mL时,NO的分泌量达到最大,为39.28±3.25μmol/L,GPSP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。     

Neither the A- nor B-repeat regions of the fibrinogen-binding protein of Streptococcus equi subsp. equi are essential for fibrinogen binding

The major cell wall-associated protein (FgBP) of Streptococcus equi subsp. equi possesses two internal blocks of repeated sequence (A and B) and binds horse fibrinogen (Fg) avidly through residues located in the N-terminal half of the molecule. In the present study, we investigated the roles of the two repeats blocks in Fg binding through construction of recombinant FgBP proteins containing defined internal deletions of sequence. Ligand binding experiments clearly showed that neither repeat is essential for Fg binding. However, residues within the B repeats seem to play a major role in the aberrant mobility observed for FgBP following sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis.     

Antioxidant effects and cytotoxicity of three purified polysaccharides from Ligusticum chuanxiong Hort.

Water-soluble crude polysaccharide LC was obtained from Ligusticum chuanxiong Hort. by boiling-water extraction and ethanol precipitation. The major polysaccharides LCA, LCB, and LCC were isolated and purified from the crude polysaccharide LC, and the monosaccharide components, average molecular weight and the main skeleton were analyzed and determined. The antioxidant properties of LCA, LCB, and LCC were extensively investigated with several biochemical methods, and the antiproliferative activities were also involved. Experimental results showed that all purified polysaccharides exhibited antioxidation and cytotoxicity, and LCB has the highest antioxidant and cytotoxic activity among them. It is possible that LCB is explored as a novel potential antioxidant and cytotoxic natural bioactive macromolecule.     

兽疫链球菌透明质酸合成相关基因hasB的克隆以及性质研究

透明质酸是链球菌荚膜的主要组成部分,有着重要的生理功能。UDP-葡萄糖脱氢酶(HasB)是透明质酸合成中的一个关键酶,而C类链球菌的UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因(hasB)尚未被克隆。通过hasB基因的上下游序列设计引物从兽疫链球茵的基因组中克隆出一段序列,测序结果显示其包含一个由1206个碱基组成的开放阅读框,所编码的蛋白序列同化脓链球菌和乳链球菌的UDP-葡萄糖脱氢酶蛋白序列分别有63．1％和70．6％的相似性。将这段基因置于T7启动子下,并在大肠杆菌中进行表达,能够得到一个约47kDa的蛋白,酶活测定显示其具有UDP-葡萄糖脱氢酶活性。这些结果表明所克隆的基因是兽疫链球菌的UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因。