95例肺炎支原体快速液体培养阳性标本分析

目的:采用巢式PCR法(nPCR)及全自动微生物鉴定仪对肺炎支原体(MP)快速液体培养阳性标本进行分析,探讨MP快速培养假阳性情况及原因.方法:收集95例MP快速液体培养阳性标本,巢式PCR检测MP核酸,用全自动微生物鉴定仪检测导致培养假阳性的微生物.结果:95例MP快速液体培养阳性标本中,90例巢式PCR结果阴性,假阳性率94.7%;经全自动细菌鉴定仪鉴定,97.8%为真菌所致.结论:普通的敏感细菌在MP快速液体鉴定培养基中可以被有效抑制;真菌是引起的快速培养假阳性的主要原因.     

肺炎支原体ELISA检测试剂盒的临床应用

目的评价肺炎支原体ELISA检测试剂盒在临床应用的效果。方法用肺炎支原体ELISA检测试剂盒检测呼吸道感染患儿的咽拭子标本,并以肺炎支原体快速检测培养基试剂做同步盲法对照试验,分析该试剂盒的准确性及批内、批间产品的稳定性。结果在100例呼吸道感染患儿咽拭子标本中,肺炎支原体ELISA检测法阳性率为38%,肺炎支原体快速检测培养基法阳性率为37%,两种方法阳性结果符合率为97%。同步盲法试验结果显示,肺炎支原体ELISA检测试剂盒批内、批间产品阳性结果的一致率均为100%。结论该试剂盒具有较好的准确度和特异性,并且操作简便、快速,临床可推广应用。     

咽拭子快速培养在肺炎支原体感染中的临床应用价值

目的:探讨咽拭子快速培养在肺炎支原体感染中的临床应用价值。方法:收集2014年2月~2016年2月期间我院收治的呼吸道感染患儿220例,用肺炎支原体专用液体培养基进行肺炎支原体快速培养,用胶体金法检测肺炎支原体MP-Ig M。比较两种方法的阳性率。结果:咽拭子培养快速培养阳性率与血清MP-Ig M检测阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。MP-Ig检测显示,≤1岁阳性率最低,其阳性率随年龄增加不断增高(P0.05)。肺炎支原体咽拭子培养显示,≤1岁阳性率最高,2~8岁最低(P0.05)。病程≤7 d患者肺炎支原体咽拭子培养阳性率(34.21%)显著高于肺炎支原体MP-Ig检测阳性率(14.04%)(P0.05)。病程7 d患者肺炎支原体咽拭子培养阳性率(11.32%)显著低于肺炎支原体MP-Ig检测阳性率(52.83%)(P0.05)。肺炎支原体咽拭子培养的灵敏度性以及特异性显著高于肺炎支原体MP-Ig检测,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:咽拭子快速培养对肺炎支原体感染的早期诊断有一定临床应用价值,方法简单,无创伤,值得临床进一步研究和应用。     

恒温扩增芯片法在重症监护病房肺部感染患者诊断中的应用

目的评价恒温扩增芯片法在重症监护病房肺部感染患者下呼吸道感染病原体检测中的效果。方法收集合格痰标本146例,通过恒温扩增芯片法和细菌培养法检测病原体,对两种方法检测结果进行分析。结果 146例痰液标本中,恒温扩增芯片法检出阳性标本114例(阳性率为78.1%),其中单一致病菌感染42例,2种及以上致病菌混合感染72例。45例标本检测到mecA基因,其中13例为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。146例痰标本中,有109例痰标本同时进行了痰培养检测,痰培养阳性率为67.9%(74/109),相应的恒温扩增芯片法检测阳性率为82.6%(90/109);痰培养结果阴性共计35例,与之相符合的恒温扩增芯片法检测阴性共计16例(阴性符合率45.7%)。恒温扩增芯片法对肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌的阳性检出率明显高于痰培养,差异具有统计学意义。恒温扩增芯片法检测到2例结核分枝杆菌复合群、1例军团菌、1例肺炎支原体,痰培养检测到3例奇异变形杆菌。结论本实验室所开展的恒温扩增芯片法在重症监护病房肺部感染者下呼吸道病原体检测方面的优势体现在阳性率高、检测时间短,可为临床肺部感染诊断提供及时准确的参考依据。     

EPO工程细胞株支原体检测

支原体污染是细胞培养过程中最常见的问题之一,对细胞支原体的检测是细胞特性鉴定的重要方面。我们采用抗支原体单抗免疫荧光法和培养法(包括液体培养法和固体培养法)检测工程细胞支原体。单抗免疫荧光法检测结果表明:支原体阳性的细胞膜表面有明亮荧光,工程细胞EPO C_2细胞膜表面无荧光。支原体液体培养法结果显示:作为阳性对照的支原体由于在生长过程中产酸使培养液变黄,而加入EPOC_2株细胞悬液的样品管与阴性对照管相同,无颜色变化。固体培养法结果显示:在显微镜下观察,支原体阳性对照在固体培养基上呈荷包蛋样集落,而阴性对照及EPO C_2株细胞样品均无菌落生长。以上结果表明:受检的EPO C_2株细胞未被支原体污染。     

培养-增强套式PCR检测肺炎支原体感染

应用培养 增强套式多聚酶链反应 (C ENPCR)检测 44例肺炎支原体感染住院患儿咽拭子标本。在检测的 44份咽拭子标本中 ,肺炎支原体的检测阳性率为 38.6 3%。结果显示 ,C ENPCR检测MP感染敏感性较高 ,可用于MP感染的临床检测     

肺炎支原体P1重组蛋白的提取纯化及应用研究

提取纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1重组蛋白,建立酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,协助临床肺炎支原体感染的诊断。以GST融合蛋白层析柱提取、纯化Mp P1重组蛋白做抗原,以全肺炎支原体菌体成分做抗原对照,建立间接ELISA实验方法,检测40份正常献血者血清标本和51份疑似MP感染临床血清标本的IgG抗体。重组蛋白经SDS-PAGE可见诱导表达的样品在分子量大约59 ku处有明显条带,经Western blotting可与肺炎支原体免疫血清发生反应。ELISA实验检测51份临床标本,由P1重组蛋白抗原检测阳性31份,阳性率为60.78%。Mp检测阳性20份,阳性率为39.22%。实验精确度检测阳性混合血清的变异系数(CV值)为5.40%,阴性混合血清变异系数为1.10%。用Mp P1重组蛋白抗原建立的ELISA检测方法,其敏感性高于全肺炎支原体抗原,可用于临床肺炎支原体感染的诊断。     

建立一种反向斑点杂交法检测肺炎支原体23S rRNAV区A2063G基因突变的方法

目的建立检测肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP）23S rRNA V区2063基因型的反向斑点杂交方法,并与PCR产物直接测序法的结果进行比较分析。方法19例自临床咽拭子标本分离培养的MP,用自行设计的反向斑点杂交法检测23S rRNA V区2063基因型,同时对相应序列测序分析。抽提标准菌株FH和127份经PCR测定MP阳性的临床标本基因组DNA,用MP阴性的基因组DNA抽提物5份作阴性对照,用反向斑点杂交法检测23S rRNA V区2063基因型。结果19例分离培养的MP,经反向斑点杂交法检测15株有23S rRNA V区基因A2063G位点突变;4株为2063A,与测序结果一致（Kappa一致性检验,P〉0.05）。经反向斑点杂交法检测,127份MP阳性的基因组DNA抽提物中有122份标本为A2063G位点突变,标准菌株FH和2份DNA抽提物的2063位点碱基为A,还有3份抽提物标本的2063位点碱基既有A又有G,5份阴性对照均无显色。结论反向斑点杂交方法能快速、准确检测临床MP 23S rRNA V区2063基因型。     

自制解脲与人型支原体培养基的实验研究

目的用自制解脲与人型支原体培养基对泌尿生殖道标本支原体进行检测,并与传统的培养基比较.方法培养基以布氏肉汤为基础,并增加小牛血清含量;将传统培养基中的抑菌剂青霉素改为万古霉素、氟康唑与多粘菌素B;将解脲培养基中的酚红指示剂改为氯酚红.结果用自制培养基对1 071例泌尿生殖道标本支原体检测,阳性346例,阳性率为32.3%,解脲、人型支原体与其混和感染,分别占阳性总数的63.3%、7.2%和29.5%.221例标本用传统与自制解脲培养基同时检测,传统培养基有尿素分解69例,其中32例有细菌生长,阳性检出率为16.7%.自制培养基有尿素分解82例,仅5例有细菌生长,阳性检出率为37.1%.结论自制培养基营养丰富、配制简单、选择性强和变色灵敏,与传统培养基比较,检出率高,污染小,临床应用效果满意.     

阳性血培养涂片结果与培养结果不一致的原因探讨

目的分析阳性血培养标本,直接涂片结果与培养结果不一致的原因。方法收集一段时间内(2015年8月-2016年12月)送检的血培养标本,进行分析。实验室出现的涂片结果与培养结果不一致的,对其进行分析总结,找到主要原因和需要注意的关键问题。结果符合要求的36 608份标本,血培养阳性报警3 975份,阳性率10.86%,113份涂片结果与阳性培养结果不一致,绝对不一致率为2.84%。55例涂片结果为不确定的标本中,凝固酶阴性葡萄球菌、微球菌、棒状杆菌和α-溶血链球菌共有29例,占52.73%。结论容易误读为阳性球菌的阴性杆菌包括肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粘质沙雷菌、莫拉菌和鲍曼不动杆菌等。容易误读为阴性杆菌的阳性球菌包括凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌和微球菌。避免将某些阴性杆菌(肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粘质沙雷菌、莫拉菌和鲍曼不动杆菌等)误读为阳性球菌十分重要。注意革兰染色中脱色步骤的操作,显微镜检查时要注意形态和排列方式不同的阳性细菌。减少危急值的报告错误率,为临床早期诊断与选择抗菌药物治疗,提供准确信息。     

儿童肺炎支原体咽拭子快速液体培养结果分析

目的分析儿童肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养的结果及与患儿年龄以及季节的关系,为临床诊断、治疗肺炎支原体感染提供依据。方法选取深圳市宝安区人民医院1217例急性呼吸道感染的患儿,采用咽拭子快速液体培养基进行筛查,观察其阳性率。结果在1217例患儿中,共检出阳性281例,阳性率为23．09％。〈1岁、1～3岁、3～6岁和6～14岁各年龄组的阳性率分别为15．13％、26．52％、28．31％和18．07％;不同季节MP感染率分别为春23．75％,夏20．11％,秋18．61％,冬29．72％。1～3岁,3—6岁小儿感染率明显高于6—14和〈1岁儿童（P〈0．01）;冬春季阳性率较夏秋季高。结论MP快速液体培养鉴定对MP诊断具有重要的临床诊断价值。肺炎支原体感染全年均可发病,好发于冬季,以3—6岁小儿多见。     

PCR和分离培养同时检测儿童呼吸道感染的支原体

为了解广州市儿童呼吸道支原体感染情况,用一条共同的上游引物,二条特异性的下游引物建立的ＰＣＲ方法能同时扩增ＭＰ的６９１ｂｐ和ＭＧ的４３８ｂｐ粘附因子基因片段,但不会扩增其他支原体和细菌的ＤＮＡ。     

小儿肺炎支原体的分离培养及其药敏试验分析

对356例小儿肺炎患者的咽拭子进行肺炎支原体(MP)分离培养并对9种抗生素进行药敏试验.结果显示,MP阳性55例,阳性率为15.4%,耐药性由高到低为罗红霉素(54.5%)>克拉霉素(32.7%)=阿奇霉素(32.7%)>红霉素(21.8%)=加替沙星(21.8%)>克林霉素(20.0%)>乙酰螺旋霉素(9.1%)>司...     

241 例儿童社区获得性肺炎支原体感染的临床分析

目的：总结2011-2012 年黄岛地区儿童社区获得性肺炎(CAP)患儿中支原体的感染情况,以指导临床诊断和治疗。方法：选取 2011-2012 年间因CAP住院的患儿241 例,所有CAP 患儿均于住院第2 天采集空腹血行9 项呼吸道感染病原体IgM检查,包括 肺炎支原体、嗜肺军团菌、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒。结 果：241 例社区获得性肺炎患儿中支原体感染阳性74 例(30.7%),其中132例男性CAP患儿中支原体感染38 例(28.8%),109 例女 性CAP 患儿中支原体感染36 例;＞3 岁患儿的感染率为41.2%,1-3 岁患儿感染率26.2%,＜1 岁婴幼儿感染率为5.4%;2011 年 CAP患儿支原体感染率为19.4%,而2012 年为34.6%;74 例支原体阳性患儿合并其他感染者6 例。结论：黄岛地区儿童社区获得 性肺炎中支原体感染占重要地位,且有升高趋势,应重视婴幼儿支原体感染及难治性支原体肺炎的诊治。     

1796例泌尿生殖道支原体培养及药敏结果分析

目的分析新乡地区1796例泌尿生殖道标本的支原体培养及抗生素药物敏感试验,指导临床合理使用抗生素。方法支原体培养鉴定、药敏试剂盒购自贝瑞特公司。同时检测解脲支原体和人型支原体,并进行10种抗生素的药敏试验。数据统计采用χ^2检验。结果支原体培养1596例标本中,541例解脲脲原体（Uu）阳性,阳性率为33.9%;39例人型支原体（Mh）阳性,阳性率为2.4%;解脲脲原体、人型支原体均阳性76例,阳性率为4.8%。200例正常对照组27例阳性,阳性率为13.5%。药敏结果显示,强力霉素、克拉霉素和美满霉素的抗菌活性较强。结论支原体感染以Uu为主,Uu＋Mh次之,正常人泌尿生殖道支原体阳性率为13.5%。只有某些血清型感染且在达到一定浓度以上同时宿主处于多种病原体感染或免疫机制紊乱时,Uu才能致病。避免滥用抗生素引起生殖道菌群失调。临床上治疗Uu感染、Mh感染或Uu＋Mh混合感染时,建议选用强力霉素、克拉霉素和美满霉素。     

241例儿童社区获得性肺炎支原体感染的临床分析

目的：总结2011-2012年黄岛地区儿童社区获得性肺炎（CAP）患儿中支原体的感染情况,以指导临床诊断和治疗。方法：选取2011-2012年间因CAP住院的患儿241例,所有CAP患儿均于住院第2天采集空腹血行9项呼吸道感染病原体IgM检查,包括肺炎支原体、嗜肺军团菌、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒。结果：241例社区获得性肺炎患儿中支原体感染阳性74例（30.7%）,其中132例男性CAP患儿中支原体感染38例（28.8%）,109例女性CAP患儿中支原体感染36例;〉3岁患儿的感染率为41.2%,1-3岁患儿感染率26.2%,〈1岁婴幼儿感染率为5.4%;2011年CAP患儿支原体感染率为19.4%,而2012年为34.6%;74例支原体阳性患儿合并其他感染者6例。结论：黄岛地区儿童社区获得性肺炎中支原体感染占重要地位,且有升高趋势,应重视婴幼儿支原体感染及难治性支原体肺炎的诊治。     

泌尿生殖系统感染支原体培养及药敏结果分析

目的 :了解解脲支原体和人型支原体在泌尿生殖系统感染中的致病作用和对抗生素的药敏情况。方法 :对 5 87例泌尿系感染患者进行支原体培养 ,并对阳性标本行 12种抗生素药敏试验。采用支原体培养、鉴定、药敏一体化试剂盒进行检测。结果 :5 87例患者中支原体阳性 16 4例 ,感染率为 2 7 9% ,解脲支原体 (Uu)、人型支原体 (Mh)及Uu +Mh混合感染的阳性率分别为 2 1 3%、1 5 %和 5 1%。女性感染率显著高于男性 (P <0 0 1)。支原体对 12种抗生素敏感性最高的是交沙毒素 (92 7% ) ,其次为可乐必妥(85 4 % )、司帕沙星 (84 8% )。结论 :泌尿生殖系统感染者支原体感染率为 2 7 9% ,主要由解脲支原体引起 (占 76 2 % ,12 5 / 16 4 ) ,泌尿生殖系感染支原体患者应首选交沙霉素治疗。     

2006～2010年泌尿生殖道炎症患者支原体感染率检测与耐药性分析

目的 了解杭州市萧山区2006～ 2010年泌尿生殖道炎症患者支原体感染及耐药情况.方法 对4 023例泌尿生殖道炎症患者用支原体鉴定及药敏试剂盒进行支原体培养及药敏试验.结果 支原体总检出率为48.1％,女性检出率51.2％明显高于男性41.8％ (P ＜0.05).支原体培养阳性患者中Uu单独感染1701例(88.0％),Mh单独感染57例(2.9％),Uu+ Mh混合感染176例(9.1％),Uu单独感染明显高于Mh单独感染和Uu+ Mh混合感染(P＜0.05).5年间支原体阳性检出率从2006年的39.4％到2010年的58.1％逐年增高,感染模式观察期内无明显变化.支原体对交沙霉素、原始霉素和强力霉素均敏感(敏感率≥91.4％),对四环素、红霉素、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率高,均大于50％.比较2006年至2010年各种支原体对9种药物的耐药率,除四环素外耐药率呈不同程度上升,四环素耐药率2007年和2008年较高,后逐年下降,2010年为53.5％.混合感染总体耐药率比Uu或Mh单独感染耐药率高.结论 泌尿生殖道炎症患者支原体感染Uu比较常见,且女性检出率显著高于男性.临床分离支原体大多具有多重耐药性,临床治疗需根据药敏结果加以选择.     

Application of PCR for detection and identification of mycoplasma contamination in virus stocks

Summary A nested polymerase chain reaction (PCR) was used to detect and identify mycoplasma contaminants in viral stocks. The results of the PCR assay proved to be a sensitive and accurate indicator of the true status of the stock tested. Those samples positive by agar culture or Hoechst stain were also positive by PCR. Those samples that were inconclusive by Hoechst stain (10.05%) could be clearly determined to be mycoplasma positive or negative by PCR. The PCR assay also detected those fastidious species of mycoplasma that gave false negative results by the direct culture method. In many respects the PCR-based mycoplasma detection method described is superior to the agar culture and Hoechst staining detection methods. In this study, the PCR assay detected substantially more mycoplasma-positive viral stocks than did the agar culture assay. Due to its speed, sensitivity, and reliability, the PCR assay is of particular value in monitoring the process of removing mycoplasma from contaminated stocks. Furthermore, the PCR amplification products can be analyzed by restriction analysis to rapidly identify the species of the mycoplasma contaminating the stock tested.