miR-335对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:通过研究miR-335对骨肉瘤细胞系SOSP-9607增殖和迁移的影响,探讨miR-335在骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法:体外培养SOSP-9607细胞并将其分三组,分别为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组转染miR-335模拟物(has-miR-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染。采用噻唑蓝(MTT)比色实验法检测和比较细胞处理24、48、72和96 h的增殖情况,采用Transwell实验检测和比较各组细胞的迁移情况。结果:MTT结果显示,实验组细胞48、72和96 h增殖率较阴性对照组明显降低(P0.01),而阴性对照组及空白对照组细胞增殖率比较未见明显差异(P0.05)。在Transwell迁移和侵袭实验中,与阴性对照组比较,实验组细胞的侵袭及迁移能力也明显降低(P0.05),而两对照组细胞迁移及侵袭能力也无明显差异(P0.05)。结论:miR-335可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖及迁移,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点,值得深入研究。     

大叶山楝根化学成分与细胞毒活性的研究

为了解大叶山楝(Aphanamixis grandifolia Bl.)根中的抗肿瘤活性成分,利用各种色谱技术从其95% 乙醇提取物中分离得到9 个化合物,经波谱分析分别鉴定为:7-hydroxycadalene (1)、dregeana-1 (2)、4-oxopinoresinol (3)、4-ketopinoresinol (4)、6-deoxyjacareubin (5)、schleicheol 1 (6)、豆甾醇 (7)、β-谷甾醇 (8)和胡萝卜苷 (9).其中化合物1~6 为首次从山楝属植物中分离得到,并首次报道了化合物1的碳谱数据.生物活性测试结果表明,化合物1和5对慢性髓原白血病细胞K562 有生长抑制活性,化合物1、5 和6 对人胃癌细胞SGC-7901 有生长抑制活性.     

姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的姜黄素、顺铂和姜黄素联合顺铂处理人骨肉瘤细胞MG-63不同时间,通过MTT法检测其对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测其对MG-63细胞凋亡的影响。结果:单用姜黄素或顺铂均可以时间和浓度依赖性方式抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖。与空白对照组相比,单用10μmol/L姜黄素和2、4μmol/L顺铂可抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.05);而与姜黄素和顺铂单用处理相比,10μmol/L姜黄素分别与2、4μmol/L顺铂联合应用,可更显著抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.01)。结论:姜黄素联合顺铂与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63细胞的增值,促进其凋亡,两药对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同性。     

甲硫氨酸限制对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及铁死亡的影响

摘要 目的：探讨甲硫氨酸限制对骨肉瘤细胞增殖,凋亡和铁死亡的影响。方法：使用细胞计数检测剥夺甲硫氨酸对三株不同的骨肉瘤细胞系增殖的影响;高通量测序（RNA-seq）分析甲硫氨酸限制后骨肉瘤细胞的转录组学变化;流式细胞术检测细胞周期,凋亡以及ROS,脂质ROS水平;Western blot检测铁死亡关键蛋白谷胱甘肽过氧化物GPX4以及铁死亡标志蛋白前列腺素内过氧化物合成Cox-2的表达。结果：甲硫氨酸限制显著抑制骨肉瘤细胞的增殖（P<0.001）;RNA-seq分析筛选出1719个差异表达基因,基因富集分析发现甲硫氨酸限制可显著激活铁死亡通路并显著抑制细胞周期通路;细胞实验证实甲硫氨酸限制将骨肉瘤细胞阻滞在G2M期,显著诱导凋亡细胞比例增加;同时,细胞内Cox-2的表达增加,GPX4的活性降低,活性氧和脂质活性氧积累,最终导致细胞死亡,且这种作用可以被铁死亡抑制剂Fer-1部分挽救。结论：本研究的结果为甲硫氨酸限制治疗骨肉瘤提供了一定的科学依据。     

Genistein对大鼠垂体前叶细胞增殖的抑制作用

应用细胞培养、^3H-TdR掺入、流式细胞和电镜技术,观察酪氨酸蛋白激酶（PTK）抑制剂genistein对正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20增殖的影响,并探讨其可能的机制。结果显示：genistein作用48h后可明显抑制正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20增殖。流式细胞仪检测发现,50和100μmol/L genistein可将AtT-20细胞阻断于G0／G1期及G2／M期,并出现凋亡峰,凋亡率分别灰19.9％和36.4％。电镜照片显示有凋亡细胞。结果表明,PTK抑制剂可以明显抑制正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20的殖,并诱导细胞凋亡,说明PTK活性对细胞增殖和分化有重要作用。     

土壤自然干旱处理对钩藤生长与生理特征及主要药用成分积累的影响

以一年生钩藤实生苗为试材,通过连续土壤控水12 d盆栽试验,研究持续性土壤自然干旱对钩藤幼苗生长、抗逆生理指标及其主要药用成分含量的影响。结果表明:(1)随着干旱胁迫时间的延长,钩藤根和茎叶生物量以及叶片相对含水量(RWC)显著持续下降(P0.05),而根冠比、叶片丙二醛(MDA)含量及相对电导率(REC)逐渐升高。(2)随着干旱胁迫时间的延长,钩藤叶片叶绿素a、b含量先增高后下降,叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性先上升后下降,且POD活性最先达到峰值,CAT活性增幅最大;叶片中脯氨酸(Pro)、可溶性糖(SS)和可溶性蛋白(SP)含量逐渐升高,且Pro表现出更强的渗透调节能力。(3)钩藤幼苗叶片、主茎和带钩茎枝中钩藤碱与异钩藤碱含量随着干旱胁迫时间的延长而呈先增高后下降的趋势,响应时间先后顺序依次为叶片、主茎、带钩茎枝,生物碱含量由高到低依次为带钩茎枝、叶片、主茎。研究发现,在土壤持续自然干旱条件下,钩藤幼苗生长受到一定影响,但植株能通过提高其抗氧化酶活性和积累渗透调节物质来提高吸水和保水能力,有效抵御干旱逆境;且土壤自然干旱胁迫4～8 d有利于主要药效成分钩藤碱与异钩藤碱的积累;土壤相对含水量在42%～53%时,钩藤幼苗耐旱性较强且钩藤碱与异钩藤碱含量较高。     

二巯基乙醇对大鼠骨肉瘤细胞增殖的诱导作用

目的:观察二巯基乙醇(2-ME)对大鼠骨肉瘤细胞增殖的诱导作用.方法:将含10%小牛血清的RPMI1640完全培养基分装成六瓶,每瓶100ml,一瓶不加2-ME作为对照组Ⅰ,其余五瓶分别加入不同剂量2-ME作为实验组,再设一个含10%胎牛血清的完全培养基一瓶作对照组Ⅱ,分别在96孔板中培养大鼠骨肉瘤UMR106细胞,24h、48h和72h后,观察细胞生长状态,采用MTT法检测细胞增殖情况.结果:对照组Ⅰ生长缓慢,对照组Ⅱ生长状态良好,分裂增殖相较多.实验组随着2-ME浓度的增加,细胞生长的速度逐渐增快.其中0.3μl组生长速度适中,细胞生长状态与对照组Ⅱ相似.结论:二巯基乙醇有明显诱导大鼠骨肉瘤细胞增殖的作用.     

姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制和凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制及凋亡相关基因表达的影响.方法:用姜黄素处理MG-63细胞,细胞计数法检测细胞增殖抑制的效果;荧光染色观察细胞的凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期时相分析;免疫细胞化学法和western blotting免疫法检测细胞凋亡相关基因的表达水平.结果:随着姜黄素浓度的增加及其作用时间延长,对细胞的增殖抑制作用增强,最高抑制率可达89.07%;光镜下可观察到细胞发生染色质浓缩,细胞核凝聚和碎裂等典型的凋亡形态学改变;FCM检测结果显示细胞经姜黄素处理后出现明显的凋亡峰;免疫反应结果显示,凋亡相关基因bcl-2和P53表达水平降低,而bax和Fas表达水平升高.结论:姜黄素能显著抑制MG-63细胞增殖并可有效诱导其凋亡,其作用机制可能与bcl-2和bax二者的比值发生变化从而接受了凋亡刺激信号有关.     

槟榔碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察槟榔碱对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度（0、10、30、50、100、300、500μmol/L）槟榔碱对MCF-7细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax,Bcl-2和P53蛋白表达。结果：低浓度（0、10、30、50μmol/L）槟榔碱不影响细胞的增殖和凋亡;而高浓度（100、300、500 μmol/L）槟榔碱呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖、诱导MCF-7细胞凋亡、提高P53和Bax蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达。结论：高浓度槟榔碱抑制MCF-7细胞增殖、诱导凋亡,其机制可能与提高P53和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。     

盐酸罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制*

目的:探讨盐酸罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及分子机制。方法:采用逐步增加药物剂量诱导法建立骨肉瘤多柔比星耐药细胞株(U2OS/DOX),用浓度分别为0、20、50、100 μg/ml的盐酸罗哌卡因处理U2OS/DOX细胞,作为不同浓度盐酸罗哌卡因处理组;将pcDNA3.1、pcDNA3.1-Livin转染至U2OS/DOX细胞中再用浓度为100 μg/ml的盐酸罗哌卡因处理,记为盐酸罗哌卡因100 μg/ml+pcDNA3.1组、盐酸罗哌卡因100 μg/ml+pcDNA3.1-Livin组。MTT检测细胞增殖抑制率及细胞半数抑制浓度(IC₅₀);蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Livin蛋白表达;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Livin mRNA表达水平。结果:多柔比星浓度大于1 μg/ml时,骨肉瘤细胞U2OS增殖抑制率显著升高,且具有剂量依赖性(P＜0.05);多柔比星浓度大于10 μg/ml时,骨肉瘤细胞骨肉瘤耐药细胞U2OS/DOX增殖抑制率显著升高,且具有剂量依赖性(P＜0.05)。盐酸罗哌卡因处理的U2OS/DOX细胞中P21、Caspase-3、E-cadherin表达水平显著升高,MMP-2表达水平显著降低,细胞增殖抑制率显著升高,克隆形成数显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移、侵袭数显著降低,Livin表达水平显著降低,且呈浓度依赖性(P＜0.05)。过表达Livin部分逆转了盐酸罗哌卡因对细胞U2OS/DOX增殖、迁移、侵袭的抑制作用及凋亡的促进作用。结论:盐酸罗哌卡因能明显抑制对多柔比星具有耐药性的骨肉瘤细胞的增殖,迁移和侵袭,明显促进骨瘤细胞凋亡,其机制可能与Livin有关。     

秦艽与小秦艽光合日变化的研究

运用光合作用测定系统,对野生秦艽(Gentiana macrophylla Pall．)和小秦艽(G．dahurica Fisch．)的开花期的光合特性进行研究。结果表明,2种秦艽的净光合速率、蒸腾速率、气孔导度日变化曲线都呈双峰型,有明显的光合“午休”现象。小秦艽的光合速率、蒸腾速率、气孔导度照著高于秦艽,分别高出2．7 μmolCO2·m-2·s-1、1．5 mmol·m-2·s-1和140．7 mmol．m-2·s-1而叶温则低于秦艽2．8C。相关分析表明,开花期的温度、光照对2种秦艽的光合都有一定影响,蒸腾速率、气孔导度调节光合作用,而引起2种秦艽光合速率降低的主要因素为非气孔因素。     

HPLC-DAD法测定血满草中熊果酸和齐墩果酸的含量(英文)

建立了HPLC-DAD法测定血满草中熊果酸和齐墩果酸含量,并进行方法学考察。采用HPLC-DAD进行分析,fusion-RP C18柱(4.6 mm×250 mm,4μm),甲醇-0.2%磷酸水溶液(90∶10)为流动相,检测波长210 nm,体积流量1.0 mL/min。同时采用微波辅助提取、回流提取、索氏提取、冷浸提取、超声提取五种方法对血满草中熊果酸和齐墩果酸含量进行测定并比较不同方法所得结果的差异,还比较了血满草不同部位中熊果酸和齐墩果酸的含量差异。测定结果表明熊果酸进样量在3.6～8.4μg范围内,齐墩果酸进样量在3.2～16μg范围内,呈良好线性关系。血满草中熊果酸和齐墩果酸平均回收率分别为98.3%和101.4%(n=5),相对标准偏差分别为1.13%和0.72%(n=5)。五种方法比较得出索氏提取得熊果酸和齐墩果酸含量最高;血满草花中熊果酸和齐墩果酸含量最高,而根中含量最低。该方法使血满草中熊果酸和齐墩果酸达到基线分离,操作简便,结果稳定可靠。     

广西钩藤属植物中总生物碱含量变化研究

对广西不同品种、不同产地、不同部位、不同采收时间的钩藤进行了总生物碱含量变化研究 ,为充分开发利用广西钩藤资源提供了试验依据。     

秦艽及其近缘种植物资源在我国的分布

秦艽是我国大宗中药材之一,在传统中医药理论中有重要的应用价值。近年来伴随秦艽药用价值研究的不断深入,其需求量不断增加,致使秦艽野生资源日趋减少。通过野外考察和资料查阅,系统阐述了秦艽组植物资源在我国的分布概况,并详细介绍了药典规定品种的具体分布,从而为合理利用和保护秦艽资源,开发新资源提供参考。     

Identification and quantification of components in extracts of Uncaria tomentosa by HPLC-ES/MS

The two main classes of secondary metabolites, alkaloids and quinovic acid glycosides, of Uncaria tomentosa (Willd.) DC. (Rubiaceae), a Peruvian plant commonly known as ‘uña de gato’, have been analysed. Separation of the alkaloidal fraction was achieved using a solid phase extraction method based on cationic exchange, and an analytical method employing HPLC‐ES/MS has been developed. Quantitative data for commercial wild bark, cultivated bark and leaves are reported. The analysis of quinovic acid glycosides was performed directly on the crude extract using both a fast analytical method based on ?ow injection ES/MS, and a more complete analytical technique using HPLC‐MS. Copyright © 2004 John Wiley & Sons, Ltd.     

秦艽根中柱裂分结构的发生及龙胆苦苷的积累研究

采用植物解剖学、组织化学、分析化学和现代仪器分析技术相结合的方法,系统研究了秦艽根的中柱裂分发生、有效成分积累部位及其结构与有效成分的积累关系。结果表明：（1）秦艽根的中柱裂分发生是由于维管形成层和薄壁细胞的异常活动,使原维管柱裂分为几个相对独立的维管柱,这些独立的维管柱被木栓化细胞包围,主根裂分为支根;（2）秦艽根中的有效成分主要存在于维管组织的韧皮薄壁细胞和木薄壁细胞中;（3）秦艽根中裂分部位的龙胆苦苷含量为未裂分部位的60%。     

Induced accumulation of oleanolic acid and ursolic acid in cell suspension cultures of <Emphasis Type="Italic">Uncaria tomentosa</Emphasis>

Increasing sucrose from 20 to 50 g l⁻¹ in Uncaria tomentosa cell suspension cultures enhanced ursolic acid and oleanolic acid production from 129 ± 61 to 553 ± 193 μg g⁻¹ cell dry wt. The maximal concentration of both triterpenes (1680 ± 39 μg g⁻¹ cell dry wt) was 8 days after elicitation by jasmonic acid, while yeast extract or citrus pectin treatments produced 1189 ± 20 or 1120 ± 26 μg g⁻¹ cell dry wt, respectively. The ratio of ursolic acid:oleanolic acid was constant at 70:30.     

雪花构的营养价值研究

本文对野生植物雪花构(Daphne papyracea Wall)的成分进行了研究.实验结果表明,雪花构中含有多种营养成分、丰富的矿质元素、维生素、β胡萝卜素和17种氨基酸.这为雪花构植物资源的开发应用提供了科学依据.     

大叶黑桫椤孢子超低温保存

大叶黑桫椤孢子在液氮中长期保存的结果表明：（1）大叶黑桫椤孢子可以保存于液氮中;（2）液氮保存后的孢子萌发率比未用液氮保存的普遍下降,保存90d的用室温慢速化冻的孢子萌发率最高（65.3％）,相对保持率最高可达79.3％;（3）采用室温（22～25℃）慢速化冻的效果优于37℃温水浴快速化冻的。据此认为,液氮超低温长期保存大叶黑桫椤孢子是可行的。