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1.
动脉平滑肌细胞sis/PDGF—B链的表达和调控 总被引:1,自引:0,他引:1
介绍平滑肌细胞sis/PDGF-B链表达和调控的进展。c-sis原癌基因是PDGF-B的同源基因,将外源的PDGF基因导入哺乳类细胞是研究PDGF功能和调控的重要手段。内皮素IL、TNF、血管紧张素Ⅱ和蛋白激酶C可调节sis基因的表达。suramin和新霉素的人工合成为拮抗PDGF效应提供广阔的前景。c-sis可通过激活c-myc,c-fos等原癌基因而促进细胞增殖。 相似文献
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本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子A链、B链(PDGF-A,PDGF-B)和c-myc原癌基因mRNA在正常和缺氧时的含量变化。正常肺组织可表达1.7kb的PDGF-AmRNA和3.5kb的PDGF-BmRNA,还有少量2.2kbc-mycmRNA。在缺氧过程中,PDGF-B链mRNA和c-mycmRNA迅速增加,至缺氧14d时,分别为正常的3倍和5倍。而PDGF-AmRNA在缺氧7d时增高,而后又略有降低。结果表明:缺氧的肺组织局部生成的PDGF激活了c-myc原癌基因,这对于缺氧性肺动脉高压的形成具有重要作用。 相似文献
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缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中血小板源性生长因子和c—my… 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子A链、B链和c-myc原癌基因mRNA。正常肺组织可表达1.7kb的PDGF-AmRNA和3.5kb的PDGF-BmRNA,还有少量2.2kbcmRNA.在缺氧过程中,PDGF-B链mRNA和c-mycmRNA迅速增加,至缺氧14d时,分别为正常的3倍和5倍。而PDGF-AmRNA在缺氧7d时增高,而后又略有降低。结果表明:缺氧的肺组织局生成的PDGF激活 相似文献
4.
缺氧对大鼠肺组织肺血管sis原癌基因和PDGF-BB蛋白表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
为了探讨血小板生长因子BB(PDGF-BB)在缺氧性肺血管结构重塑中作用,通过建立大鼠缺氧性肺血管重塑动物模型,运用原位杂交技术和免疫组织化学染色技术检测不同缺氧时期大鼠肺组织中原癌基因sismRNA和PDGF-BB蛋白表达。结果:(1)随着缺氧时间的延长,肺动脉壁肌层增厚,管腔变窄;(2)正常对照组肺组织及肺血管壁c-sismRNA和PDGF-BB蛋白质均极少表达(+);(3)缺氧3天后,两者表达均增多();(4)缺氧7天后其表达达高峰并持续至14天(~);(5)缺氧21天后,两者表达均降低,但仍高于正常对照组()。提示:缺氧可以刺激大鼠肺组织sismRNA和PDGF-BB蛋白表达,其在缺氧性肺血管结构重塑形成中可能具有重要作用。 相似文献
5.
在建立大鼠肾小球系膜细胞(MC)体外培养方法的基础上,通过3H-TdR参入实验,RNA印迹分析和斑点杂交观察bFGF对MCDNA合成及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响.结果表明,bFGF作用于MC18h,MC的3H-TdR参入率明显增加(P<0.05),24h达到高峰(P<0.01);bFGF显著诱导原癌基因c-fos和c-myc表达,其表达活性分别于30min和1h达到高峰.提示bFGF是MC的强效丝裂原,其对MCDNA合成的促进作用与诱导原癌基因c-fos和c-myc表达有关. 相似文献
6.
L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究 总被引:12,自引:2,他引:10
从5L罐发酵L-山梨糖的Gluconibacter oxydans SCB329和Bacillus thuringiensis SCB933混合菌株中差速离心收集SCB329菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经DEAE Cellulose 52和Q Sepharose FF柱层析分得到了L-册梨糖脱氢酶(SDH),它能将L-册梨糖脱氢氧化为L-册梨酮,SDS-PAGE电泳测 相似文献
7.
用pUC19质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒(Agrolissegetumgranulosisvirus,简称AsGV)DNAPstI-D.E.F.G.H.J.K.等7个片段。以[ ̄(32)P]-dCTP标记的油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzurasuppressarianuclcarpolyhedrosisvirus简称BsNPV)多角体蛋白基因为探针,在37℃条件下对AsGV)颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于BslⅡ-S或TPsTI-A或B和EciRI-A片段上。 相似文献
8.
L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
从5L罐发酵L-山梨糖的Gluconobacter SCB329和Bacillus thuringiensis SCB933混合菌株中差速离心收集SCB329菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经DEAECellulose 52和Q Sepharose FF柱层析分离得到了L-山梨糖脱氢酶(SDH),它能将L-山梨糖脱氢氧化为L-山梨酮,SDS-PAGE电泳测得分子量约为60KD。动力学性研究表明它为一个典型的Michaelis-Menten氏酶,对L-山 相似文献
9.
PDGF在大鼠断层供皮区创面愈合过程中表达变化的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
实验研究已经证明Platelet-derivedgrowthfactor(PDGF)能够促进各种类型的伤口愈合,然而在伤口愈合过程中内源性PDGF表达变化的研究却少有报道,为探讨PDGF对伤口愈合的影响,我们应用原位杂交、斑点杂交技术观察了内源性PDGF在大鼠创面愈合过程中的表达变化,结果发现:在创面愈合过程中,肉芽组织中的成纤维细胞,毛细血管内皮细胞及创缘真皮内的毛囊上皮细胞均能表达PDGF-BB基因,在伤后6天,组织修复的高峰期,PDGF-BB基因表达达到最强,伤后12天,伤口完全上皮化,PDGF的基因表达也恢复正常,说明PDGF的基因表达和伤口愈合时间有密切的关系。提示PDGF在创面愈合过程中可能起着重要的调控作用。 相似文献
10.
将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中,在粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中进行表达。SDS-PAGE分析结果表明,表达产物分子量为41kD左右,Western印迹分析结果表明,以HRP标记的生物素进行蛋白质印迹在41kD处可见表达条带,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ScFv-CS蛋白能特异性结合癌胚 相似文献
11.
血小板生长因子(PDGF-BB)刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞DNA和蛋白质合成 总被引:1,自引:0,他引:1
应用细胞培养、3H-TdR和3H-Leucine掺入方法,观察血小板生长因子BB(Platelet-derivedGrowthFactorBB)对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞DNA和蛋白质合成的影响。结果表明:(1)当PDGF-BB浓度为10ng/ml时,3H-TdR掺入值已较对照组显著增高(6262.5±412.9vs833.5±124.0,P<0.05);当PDGF-BB浓度为20ng/ml时,3H-Leucine掺入值亦较对照线显著增高(10212.8±638.3vs7340.3±1197.9,P<0.05)。(2)PDGF-BB浓度在5-25ng/ml范围内,3H-TdR,3H-Leucine掺入值与剂量直线相关(rDNA=0.97,rprot=0.90P<0.05)。说明PDGF-BB刺激体外培养兔肺动脉平滑肌细胞DNA和蛋白质合成。 相似文献
12.
观察自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)的生长曲线、c-fos原癌基因表达和c-fos基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠(WKY)进行对比.结果显示,在小牛血清作用下SHR的VSMCs生长速率和c-fos原癌基因表达明显大于WKY;c-fos原癌基因限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析表明,经BamHⅠ或EcoRⅠ酶切后的SHR和WKY的酶切图谱一致,同时也未发现SHR的fos基因扩增现象.提示,VSMCs的异常增殖和c-fos原癌基因的表达异常与高血压的形成有关,而c-fos原癌基因的过度表达可能是由于某些与基因转录调控有关的因素异常所致. 相似文献
13.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。 相似文献
14.
人表皮生长因子(EGF)与单核—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)融合?… 总被引:1,自引:0,他引:1
应用基因工程技术,将EGF,GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf载体的EcoRI,BamHI位点上,再钭重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220扔EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot表明EG-FGM-CSF融全蛋白获得表达,并且具有EGF,GM-CSF免疫学活活。 相似文献
15.
日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
研究了外源基因日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)在卡介苗(bacilusCalmete-Guerin,BCG)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)和大肠杆菌(E.coli)中的表达.运用重组DNA和聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,以表达Sj26GST的E.colipGEX衍生质粒为模板,经PCR得到编码Sj26GST的全长cDNA片段.将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70的启动子下游,再将HSP70启动子和Sj26GST基因一起亚克隆到E.coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,得到E.coli-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-Sj26.pBCG-Sj26电转化入BCG和M.smegmatismc2155中表达Sj26GST抗原,所表达的天然重组Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带.其表达量分别占BCG和M.smegmatis菌体总蛋白的15%和10%.可见,Sj26GST基因能在BCG中高效表达. 相似文献
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研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原表达的影响。应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用流式细胞仪分析RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原及DNA含量的变化,并用WesternBlot分析技术观察了RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化的影响。结果表明:与对照组相比,RG50864处理组可显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原的表达,发现细胞周期S期受抑制。West-ernBlot分析显示RG50864可明显地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化程度。提示RG50864可显著地抑制PDGF诱导肺动脉平滑肌增殖细胞核抗原的表达,其机制可能是抑制酪氨酸蛋白激酶活性 相似文献
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将中国株HIV-1B亚型gp120全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游,构建成重组转座载体pFastBacI-gp120,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV-1的外膜糖蛋白gp120,SDS-PAGE和Western blot分析结果一致,证明表达了2种糖基化程度不同的gp120。 相似文献
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一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo … 总被引:3,自引:0,他引:3
在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮(NO)对血管紧张素Ⅱ(AⅡ)和内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达的影响。用Bradford法测定心肌细胞总蛋白含量(作为心肌细胞肥大的指标);用基因特异性引物和SuperScript一步法进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测大鼠心肌细胞原癌基因c-fos的表达(以GAPDH为内标)。结果显示,AⅡ和ET-1分别作 相似文献