芽孢杆菌对养殖水体净化作用的比较研究

利用平板鉴定法比较了5株芽孢杆菌的产蛋白酶、淀粉酶、细菌素能力。并以鳗鱼场的养殖污水作为培养基进一步试验,筛选到1株对养殖污水具有较强净化作用的菌株—芽孢杆菌FB123,接种有FB123菌株的被测试水中氨氮含量由空白的2.7 mg/L下降到0.72 mg/L,挥发性酸从10.9μg/mL上升到16.4μg/mL,乳酸菌数由4.9×104cfu/mL上升到1.21×106cfu/mL,对养殖污水的抑菌能力(以抑菌圈直径表示)则为1.3 cm。结果表明菌株FB123对养殖污水具有较强的净化作用,在改善养殖水质方面具有潜在的应用价值。     

地衣芽孢杆菌20386株特性及其生态制剂的研究

作者在1986年从1例正常待产妇女的阴道中,分离出1株革兰氏阳性需氧地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL_(20386)株。该株体外试验(In Vitro Test)对金葡萄和白念珠菌具有明显的拮抗作用;体内试验(In vivo Test)表明具有调整肠道菌群和治疗作用。对BL_(20386)株的生物特性、生物毒性、生物拮抗、生物耗氧研究显示了安全、有效的指征,符合生态制剂生产用菌株。用该菌株制备的生态制剂—整肠生, 治疗婴幼儿感染性腹泻和非感染性腹泻治愈率分别为70％和85％;成年人细菌感染性腹泻3天治愈率为50％,5天为81％,7天为96.2％。整肠生具有治疗和预防肠道疾病的前景。     

地衣芽孢杆菌胞外蛋白酶的纯化及特性分析

研究不同条件对地衣芽孢杆菌De株产生胞外蛋白酶的量及其酶活性的影响,结果表明在pH为7.4—8.2范围内,温度为30℃时,培养8—12h的菌株所分泌胞外产物中的蛋白酶活性最高。实验先以半透膜法收集芽孢杆菌的胞外产物,然后再经过硫酸铵沉淀过夜S、ephadex G-100凝胶层析和DEAE-Cellulose离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳等四个步骤的分离纯化后,可以得到含有3种主要蛋白质(BLP1、BLP2、BLP3)成分的胞外蛋白酶,其分子量分别为66.2KD、31.0KD及约20.1KD,所得纯化蛋白酶的蛋白浓度为0.773μg/mL,蛋白回收率为11.66%。实验还发现,纯化的胞外蛋白酶在100℃下作用30min,仍可保持其活力,可见具有相当的热稳定性,而其酶活最佳的pH和温度条件分别为7.8和45—65℃。酶活抑制实验显示EDTA、铜、钴、镁离子等均可成为其酶活抑制因子;而丝氨酸蛋白酶抑制剂甲基磺酰氟(PMSF)、铁、锰、钡、钙离子等对酶活性没有明显影响;锌则会令之酶活性其部分丧失。     

不同抑制剂对地衣芽孢杆菌生长影响的研究

报道了地衣芽孢杆菌对不同抑制剂的反应。结果表明,当ｐＨ在７．０时,链霉素浓度为５００μｇ／ｍＬ,青霉素浓度１０００μｇ／ｍＬ,头孢唑啉钠浓度为５００μｇ／ｍＬ时对地衣芽孢杆菌有明显抑制作用。这对正确使用地衣芽孢杆菌制剂（整肠生）提供了可靠的理论依据。     

地衣芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆和特性

克隆了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)谷氨酸脱氢酶基因(gdhA), 并研究其表达和功能. 发现野生型IRC-3 GDH-菌株和突变型IRC-8 GDH+菌株的gdhA基因都能互补大肠杆菌谷氨酸缺陷型菌Q100 GDH-的缺陷性状, 但突变型IRC-8 GDH+菌株的gdhA基因不能互补野生型IRC-3 GDH-菌株的谷氨酸缺陷性状. 经测序发现两者的核苷酸序列完全一致. gdhA基因在野生型IRC-3和突变型IRC-8中都能正常表达, 在野生型IRC-3细胞中未发现有抑制GDH活性的物质存在. 推测由于GDH翻译后调节的差异导致GDH表型的不同. 根据序列分析, 地衣芽孢杆菌GDH属于六聚体GDH中的家族Ⅰ, 而枯草芽孢杆菌GDH则属于家族Ⅱ, 两者间亲缘关系相距甚远.     

地衣芽孢杆菌对家兔体液免疫功能的影响研究

本研究采用地衣芽孢杆菌制成微生态制剂,饲喂断奶后的家兔４０天,再用兔病毒性出血病（ＲＨＤ）组织灭活疫苗免疫,检测家兔产生的血清抗体对ＲＨＤ病毒的特异性血凝抑制价和血清免疫球蛋白的含量。结果,试验组家兔的血清抗体对ＲＨＤ病毒的特异性血凝抗体和血清免疫球蛋白含量均明显高于对照组。表明,地衣芽孢杆菌对家兔的体液免疫功能有促进作用,ＲＨＤ组织灭活疫苗与地衣芽孢杆菌制剂相结合较单独使用疫苗的效果更佳     

地衣芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究

为了解决地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)工业菌株难以转化的问题,将原生质体制备、电穿孔和原生质体再生技术相结合,建立了一种地衣芽孢杆菌原生质体电击转化方法。在对菌体生长状态、溶菌酶作用时间、电转电压、渗透压保护剂等条件进行优化后,试验了将不同类型的表达载体,即游离型质粒p GJ103(3.3kb)和整合型质粒p AX01(9.3kb),分别转入两株地衣芽孢杆菌工业生产菌株B.licheniformis CICC 10181和B.licheniformis CICC 20204中。实验结果显示,对数生长期后期的菌体酶解40min后制备的地衣芽孢杆菌原生质体得率为96%,再生率达25%以上。原生质体与质粒DNA在最适电压0.6k V/mm下电击转化,并以0.5mol/L山梨醇或甘露醇作为渗透压保护剂进行再生培养后,最终游离型质粒的转化率可达0.88×102~1.1×102CFU/μg p GJ103,整合型质粒的转化率达到0.45×102~0.52×102CFU/μg p AX01。该方法为地衣芽孢杆菌野生工业菌株的遗传改造提供了一种新的、高效的转化手段。     

短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)对鲤鱼养殖水质及其生长特性的影响

试验共设单因素4 水平, 分别对应水体中含0 mL、20 mL、60 mL、100 mL4 种体积短短芽孢杆菌的试验组。通过测定养殖水体COD、NH4+-N、DO、pH 等指标, 鲤鱼生长性能及消化酶活性等指标, 研究短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)对鲤鱼养殖水体水质及鲤鱼生长特性的影响。结果显示, 短短芽孢杆菌能有效降低养殖水体中COD 和NH4 +-N 浓度(P<0.05), 维持DO 在较高水平(P<0.05), 保持pH 稳定, 改善养殖水质。试验组中鲤鱼的肥满度、增重率及特定生长率与对照组相比均显著提高(P<0.05), 鲤鱼肠道蛋白酶、淀粉酶和肝胰脏淀粉酶活性与对照组相比显著升高(P<0.05)。     

地衣芽孢杆菌的应用现状及展望

地衣芽孢杆菌是一种革兰氏染色呈阳性的益生菌,俗称整肠生,其细胞呈杆状排列、单生,能产生近中生的芽孢,形态为椭圆状,孢囊稍膨大。它在生活中主要应用于饲料添加、医药、工业等方面,本文综述了地衣芽孢杆菌的主要应用。     

地衣芽孢杆菌α—淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达

采用PCR技术扩增了sacB基因的启动子-信号序列,并将扩增的序列重组进含地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因的质粒载体上构建了含α-淀粉酶基因的分泌型表达载体pSA60。将pSA60转化枯草芽孢杆菌QB1098后,α-淀粉酶基因在sacB基因启动子-信号序列的调控和蔗糖的诱导下获得表达,表达产物分泌至胞外。     

地衣芽孢杆菌原生质体最佳形成和再生条件的研究

近年来,微生物原生质体融合及诱变受到广泛重视,实验方法日趋完善,实践证明它是一种有效的育种方法。在微生物原生质体制备和再生过程中,各种微生物所需的最佳条件差别很大。我们研究厂地衣芽孢杆菌53-A,菌株原生质体形成和再生的各种因素及最佳条件,并用光学显微镜和电镜观察了原生质体形成、再生和原生质体的聚集现象,现将结果报道如下。     

一株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究I.

从皖北盐碱地土样中分离到 0 1 1菌株 ,对其进行了菌种鉴定以及胞外碱性蛋白酶的初步研究。结果表明 :0 1 1菌株符合地衣芽孢杆菌种的特征 ,但该菌芽孢端生、孢囊膨大、中度耐盐、高度耐碱 ,可在NaCl浓度为 1 3%和pH1 1的培养基中生长 ,这些特征又不同于该种几个模式株 ,因而将 0 1 1菌株鉴定为地衣芽孢杆菌的一个亚种 ,命名为地衣芽孢杆菌砀山亚种(Bacilluslicheniformissubsp .dangshanensis)。该菌在发酵培养基中能产生较高产量的胞外碱性蛋白酶 ( 72 5u/mL)。酶的最适作用条件 :60℃、pH9.0 ,该酶在pH6.0～ 1 1范围内稳定     

整肠生菌的生长条件和罐上发酵试验

对整肠生菌进行了最佳生长条件的研究。获得了该菌生长的最佳C/N为4-4.5:1,以及所需的各种维生素,氨基酸,提出了优化的生长培养基组成,经发酵中试表明,在最适pH5.5-6.5,最适生长温度35℃-37℃条件下,提高菌数产量3倍。     

苏云金芽孢杆菌发酵上清中增效物质生成的相关研究

利用BIOSTAT ^?-CL1 5L全自动发酵罐和 2 0t不锈钢发酵罐 ,对苏云金芽孢杆菌不同菌株 (GC-91 ,MP342 ,HD-1 )发酵上清液中增效物质的生成进行了研究 ,发现增效物质于对数生长期前期开始产生并积累 ,至对数生长期末期达到高峰 ,并保持稳定 ;不同菌株的发酵上清中增效物质生成量不同 ,其中GC-91最强 (增效倍数f=6.0 ) ,MP342次之 (f=3.7) ,HD 1最弱 (f=1.5 ) ;GC-91菌株上清液中增效物质生成曲线与晶体含量 ,效价代     

湖泊和地下水中异养细菌群落结构和生理特征的比较研究

对武汉东湖三个定点观测站和潜江市一深水机井中异养细菌群落的种群组成、对不同基质的反应、菌株和群落的生理特征和活力水平等方面比较研究结果表明:环境差异较小的东湖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ站异养细菌群落间的差异亦较小,具有类似的结构特征和生理活力水平,对特定基质表现了相似的作用模式;地下水中的异养细菌群落在上述几方面均显示了明显的差别。此外,在异养细菌群落结构和功能研究方法上亦是有益的探讨。     

FINE-SCALE GENETIC AND PHENOTYPIC STRUCTURE IN NATURAL POPULATIONS OF BACILLUS SUBTILIS AND BACILLUS LICHENIFORMIS: IMPLICATIONS FOR BACTERIAL EVOLUTION AND SPECIATION

The genetic and phenotypic structure of sympatric populations of wild bacteria traditionally identified as Bacillus subtilis and B. licheniformis was analyzed. Small soil samples were taken from a single, tiny site in the Sonoran Desert of Arizona, USA, to provide a true population analysis, in contrast to many analyses of genetic structure using bacterial strain collections of widely heterogeneous origin. Genetic analyses of isolates used multilocus enzyme electrophoresis, mismatches in restriction fragment length polymorphism, and variants from Southern hybridization with B. subtilis DNA probes. Phenotypic analyses of isolates used the API test system for detection of growth and acid production on specific carbon sources. The two species were distinct both phenotypically and genetically, despite their known potential for genetic exchange in laboratory experiments. Genic and genotypic diversity were high in both species, and only 16% of observed allozyme variants might possibly be common to both species. Hence, there is probably modest genetic exchange, if any, between the species in nature. Clear hierarchies of population-genetic structure were found for both species. Different types of genetic data yield concordant population structures for B. subtilis. For both species, two-locus and multilocus statistical analyses of linkage demonstrated modest to strong disequilibrium at the species level but truly panmictic subunits within each species. The evidence for extensive genetic recombination within these fine-scale subdivisions is unequivocal, indicating that the sexuality of these bacteria can be well expressed in nature. The relation of these results to processes of bacterial evolution and speciation is discussed.     

苏芸金杆菌感染粘虫后中肠组织学病变的研究

本文描述了Bacillus thuringiensis HD-1纯晶体感染粘虫Mythimna separata 5龄初幼虫后,其中肠肠壁细胞的超微结构变化.电镜观察表明:首先线粒体,发生病变,随后,细胞顶部肿胀、胞质电子密度下降,顶部胞质之下的各种细胞器均受损伤.随着病变加重,柱状细胞基膜内褶及杯状细胞质突起,这两个富含线粒体的区域发生病变最为明显.最终,肠壁细胞解体从基膜脱落.