丛枝菌根真菌的垂直平板定时转动培养及菌丝生长观察*

设计了垂直平板定时转动培养方法暗培养丛枝菌根真菌（Gigaspora margarita Becker ＆ Hall）孢子,发现培养基上生长的营养菌丝较少分枝,培养基转动前后生长的菌丝之间有一明显的折点,定时转动所形成的众多折点将延伸菌丝分成若干个节段,使形成的菌丝面局限在易观察的小范围内。此法是诱导菌丝定向生长、测量菌丝长度和生长速度的好方法,为菌丝理化特性和生物学特性的研究提供了实验依据。活跃生长的菌丝,每天生长7.7±0.9mm。试验证明：丛枝菌根真菌菌丝延伸生长部位是菌丝尖端,其生长的向地性是对地心引力的感应,感应的敏感部位也在生长菌丝的尖端。     

欧美107杨树提取物体外对植物病原真菌的抑制活性

制备了欧美107杨树枝条和叶的乙醇粗提物及不同极性溶剂的萃取部分,并测定了它们对植物病原真菌的抑制活性。枝条和叶的乙醇粗提物对棉花枯萎病菌、小麦纹枯病菌、番茄早疫病菌、番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉以及玉米弯孢等7种植物病原真菌均具有一定的抑制作用。而枝条的乙醇粗提物对杨树溃疡病菌的菌丝生长有一定的促进作用。抗菌活性成分主要集中在乙酸乙酯萃取部分。     

几种药用植物精油的抗真菌活性研究

研究了作用浓度为0：7-4．0μL/mL的南方药用植物香茅（Cymbopogon citratus）、广藿香（Pogostemon cablin（Blanco）Benth）、大叶桉（Eucalyptus robusta Smith）和蛇床（Cnidium monnier（L.）Cusson）的精油对6种植物病原真菌的抑制活性。结果表明,大叶桉、广藿香和香茅精油对串珠镰刀病菌（Fussarium moniliforme）、玉米弯孢霉菌（Curvjlaria lunata）对多种供试植物病原真菌的生长有明显抑制活性,其中,香茅精油在浓度为3．3μL/mL时,能完全抑制大部分供试真菌的生长。但不同精油对于各病原真菌的抑制率有一定差异。本研究为复合植物精油抗真菌农药的开发提供依据。     

华蟹甲草对几种植物病原真菌的离体抗菌活性研究

从华蟹甲草共获得46个提取、分离样品,首先测定这些样品在100 mg/L浓度下对5种植物病原真菌菌丝生长的抑制活性,然后测定活性较高的Y-S16/23～90/96号样品对9种真菌菌丝生长的有效抑制中浓度(EC50)以及对辣椒炭疽病菌孢子萌发的抑制作用.结果表明:对于华蟹甲草的不同组织器官,花提取物的活性相对最高,对供试的5种植物病原菌均有不同程度的抑制活性,其次是叶片提取物,但均是对辣椒炭疽病菌的活性最高;而在所有样品中,Y-S16/23～90/96号样品的活性最高,在100 mg/L浓度下对辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率均超过50%,其作用谱较广,对供试的9种植物病原真菌均有抑制活性,其中对番茄灰霉病菌和辣椒炭疽病菌的活性最高,EC50分别为68.96和99.17 mg/L,对黄瓜疫霉病菌、苹果腐烂病菌、玉米小斑病菌等3个病菌的活性次之,EC50介于137.37～161.68 mg/L之间,对水稻稻瘟病菌、辣椒疫霉病菌、苹果斑点落叶病菌、小麦赤霉病菌等4个病菌的活性相对较差,EC50介于303.05～362.54 mg/L之间;Y-S16/23～90/96号样品对辣椒炭疽病菌分生孢子萌发的抑制活性较低.     

侧柏乙醇提取物对21种植物病原真菌的抑菌活性

采用菌丝生长速率法测定了侧柏(Platycladus orientalis)叶、小枝、球果和种子4个不同部位乙醇提取物对21种植物病原真菌的抑菌活性。结果显示:(1)在供试浓度为50g/L(相当于干样)时,侧柏各部位乙醇提取物对4种供试植物病原真菌均具有较好抑制作用,其中侧柏叶提取物的抑菌效果最好,对供试葡萄白腐病菌(Conio-thyrium diplodiella)、葡萄黑痘病菌(Elsinoe ampelina)、番茄绵腐病菌(Phytophthora melongenae)和青霉病菌(Penicilliu mexpansum)的EC50分别为:5.424、3.186、8.913和19.000g/L。(2)侧柏叶乙醇提取物的石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物抑菌活性均较好,在供试浓度为0.5g/L时,石油醚萃取物对苹果腐烂病菌(Valsa mali)和葡萄黑痘病菌(E.ampelina)的抑菌率分别为80.35%和60.23%;乙酸乙酯萃取物对以上2种植物病原菌的抑菌率分别为81.88%和64.06%。结果表明:侧柏叶、小枝、球果和种子乙醇提取物均具有一定抑菌活性,叶乙醇提取物的活性最好,活性成分主要集中在石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物中。     

迷迭香酸对几种植物病原真菌的抗菌活性*

研究了迷迭香酸对不同植物病原真菌菌丝生长和孢子萌发的抑制活性。试验结果表明,迷迭香酸对供试的8种植物病原真菌菌丝生长均有抑制作用,其中对番茄灰霉病菌、芒果灰斑病菌、柑桔青霉和梨黑斑病菌抑制作用较强,EC50分别为615．04μg/mL、698．23μg/mL、714．50μg/mL和809．10μg/mL;对杉木猝倒病菌和苹果树腐烂病菌抑制作用次之,EC50分别为1039．92μg／mL和1044．72μg/mL;对松枯梢病菌和种实霉烂病菌的抑制作用较弱,EC50分别为1256．90μg/mL和1270．87μg/mL。迷迭香酸对供试的6种植物病原真菌孢子萌发也有明显的抑制作用,EC50大致在400～700μg/mL范围,其中对梨黑斑病菌孢子萌发抑制作用最强,EC50为395．37μg/mL。     

40种杂草的丙酮提取物对3种植物病原真菌的抑菌活性

在离体条件下研究了40种杂草的丙酮提取物对辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporium Schl.)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pets.)3种植物病原真菌的抑菌活性.结果表明,有7种杂草的丙酮提取物至少对1种供试病原菌的抑制率在60%以上.其中,黄花蒿(Artemisia annua L.)、苍耳(Xanthiumsibiricum Patrin)和荔枝草(Salvia plebeia R. Br.)的丙酮提取物对3种病原菌的抑制率都在60%以上;鳢肠(Ecliptaprostrata L.)的丙酮提取物对辣椒疫霉和尖孢镰刀霉的抑制率在60%以上;车前(Plantago asiatica L.)、夏至草[Lagopsis supina(Steph.)IK.-Gal.]和泽漆(Euphorbia helioscopia L.)的丙酮提取物对灰葡萄孢的抑菌效果较好.     

11种植物精油对6种植物病原真菌的抑菌活性研究

为筛选有效的植物杀菌成分,采用菌丝生长法,测定了香茅油、薰衣草油、菊花油、月桂油、柠檬油、广藿香油、肉桂油、天竺葵油、迷迭香油、茶树油、薄荷油对6种植物病原真菌的抑菌活性。发现在2 g/L的浓度下,上述11种精油对6种供试病菌均有明显的抑制作用,其中香茅油、肉桂油、天竺葵油、月桂油、茶树油和薄荷油对6种病原真菌的抑制率均为100%。剂量效应试验表明,肉桂油对灰葡萄孢（Botrytis cinerea）和禾谷镰孢菌（Fusariumgraminearum）的EC50值分别为29.05μg/mL和42.96μg/mL,而天竺葵油对灰葡萄孢（Botrytis cinerea）和禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）的EC50值分别为34.02μg/mL和68.48μg/mL。     

环境因子对乌桕内生真菌生长及脂肪酸的影响

为探讨内生菌和植物的生态关系,以生物量和脂肪酸组分作为主要指标,研究了乌桕韧皮部分离获得的5种内生真菌(丝核菌、小菌核菌、小单头孢、毛壳菌、拟盘多毛孢)在不同环境因子下的生长．与合成培养基相比,在液体马铃薯培养基上发酵,生物量较高,脂肪酸不饱和指数较低;其脂肪酸主要为棕榈酸、油酸、亚油酸．与未添加乌桕汁的合成培养基相比,添加乌桕浸汁对小菌核菌生长有促进作用,对其余4种菌有抑制作用;脂肪酸不饱和指数均进一步增加．在合成培养基中添加NaCl培养小菌核菌,生物量均无显著差异;在0～0．5mol·L^-1 NaCl时,脂肪酸不饱和指数无显著差异;在0．6～1．0mol·L^-1 NaCl时随着盐浓度增加,脂肪酸不饱和指数却下降;表明该菌有较强的耐盐能力．添加植物油对小菌核菌菌丝生长有促进作用,其中在添加1．5％的植物油时,生物量最大;其脂肪酸随添加植物油而改变．以上特点均和二者的共生关系有关．     

多孔板-MTT比色法评价植物和微生物代谢产物的抗真菌活性

多孔板-MTF比色法测定植物和微生物代谢产物对真菌抑制活性的步骤为:在多孔板的每孔中依次加入浓度为105孢子/mL的供试真菌孢子悬液90μL,不同浓度的药液10 μL.25℃暗培养48 h,然后每孔中加入8mg/mL的MTT溶液10μL,继续培养10 h后,离心去上清,加入DMS0 150 μL,振荡30 min,离心后上清液在510nm测定吸光值.采用上述条件测定了白屈菜红碱对稻瘟病菌和西瓜枯萎病菌的MIC值分别为80和1.5μg/mL,IC50值分别为21.99和0.78 μg/mL;Diepoxinζ对稻瘟病菌的MIC和IC50值分别为200和96.21 μg/mL.多孔板-MTT比色法为快速有效地筛选和评价植物和微生物抗真菌活性成分创造了条件.     

美丽镰刀菌培养液对东北红豆杉悬浮细胞防御反应及紫杉醇合成的影响

美丽镰刀(Fusarium mairei)是一分离自南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)的产紫杉醇内生真菌,用B5培养基培养6 d,去菌尘幺后制得美丽镰刀菌培养液,并从中提取其胞外多糖.研究了4%(V/V)美丽镰刀菌培养液及4%(W/V)胞外多糖两种处理,对东北红豆杉(T.cuspidata)悬浮细胞防御反应及紫杉醇合成的影响.结果表明:两种处理均能诱导东北红豆杉细胞的防御反应.但美丽镰刀菌培养液的影响明显大于胞外多特(P<0.05).另外,两种处理均可促进东北红豆杉细胞紫杉醇的合成与释放.美丽镰刀菌培养液处理得到的紫杉醇与其释放率分别是对照的2.5倍8.8倍,而胞外多糖处理得到的紫杉醇与其释放率则分别是对照的1.5倍与3倍.     

A Thin‐Layer Liquid Culture Technique for the Growth of Helicobacter pylori

Background and Aims: Several attempts have been successful in liquid cultivation of Helicobaccter pylori. However, there is a need to improve the growth of H. pylori in liquid media in order to get affluent growth and a simple approach for examining bacterial properties. We introduce here a thin‐layer liquid culture technique for the growth of H. pylori. Methods: A thin‐layer liquid culture system was established by adding liquid media to a 90‐mm diameter Petri dish. Optimal conditions for bacterial growth were investigated and then viability, growth curve, and released proteins were examined. Results: Maximal growth of H. pylori was obtained by adding 3 mL of brucella broth supplemented with 10% horse to a Petri dish. H. pylori grew in both DMEM and RPMI‐1640 supplemented with 10% fetal bovine serum and 0.5% yeast extract. Serum‐free RPMI‐1640 supported the growth of H. pylori when supplemented with dimethyl‐β‐cyclodextrin (200 μg/mL) and 1% yeast extract. Under optimal growth, H. pylori grew exponentially for 28 hours, reaching a density of 3.4 OD₆₀₀ with a generation time of 3.3 hours. After 24 hours, cultures at a cell density of 1.0 OD₆₀₀ contained 1.3 ± 0.1 × 10⁹ CFU/mL. γ‐Glutamyl transpeptidase, nuclease, superoxide dismutase, and urease were not detected in culture supernatants at 24 hours in thin‐layer liquid culture, but were present at 48 hours, whereas alcohol dehydrogenase, alkylhydroperoxide reductase, catalase, and vacuolating cytotoxin were detected at 24 hours. Conclusions: Thin‐layer liquid culture technique is feasible, and can serve as a versatile liquid culture technique for investigating bacterial properties of H. pylori.     

三叶半夏悬浮培养下的体细胞胚胎发生及植株再生

用三叶半夏幼嫩叶片诱导产生的胚性愈伤组织建立了胚性细胞悬浮系,研究了悬浮培养下体细胞胚胎的发生及植株的再生。结果表明,胚性悬浮细胞在附加1．0mg／L2,4-D、0．2 mg／LBA和300mg／L LH的MS液体培养基中产生大量的球形胚,转入液体分化培养基(MS 0．1 mg／LNAA 0．2 mg／L BA 300 mg／L LH)中进一步发育成心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚。收集成熟胚转移到MS固体分化培养基上培养获得了再生植株。另外还观察到某些成熟胚上产生了许多次生胚。     

羊草与灰色赖草F1代细胞悬浮系的建立及植株再生

本研究以羊草(L eym us ch inensis)与灰色赖草(L eym us cinereus)杂种F1代幼穗为外植体诱导愈伤组织,在3.0 m g/L 2,4-D M S培养基上继代1次后,转入不同浓度激素(2,4-D、IAA、KT)配比和不同浓度蔗糖的M S液体培养基进行振荡培养,建立杂种F1代细胞悬浮系和植株再生体系.结果表明,细胞悬浮培养时,M S 1.0 m g/L2,4-D 0.1 m g/L KT 4%蔗糖的液体培养基最佳;悬浮细胞分化时,1.0 m g/L 2,4-D 0.1 m g/L KT 4%蔗糖 M S和1.0 m g/L 2,4-D 4%蔗糖 M S培养的悬浮细胞在1.0 m g/L NAA 0.5 m g/L KT M S分化培养基上的绿苗分化率分别达到83%和80%.细胞悬浮系及再生体系的建立为杂种F1代育性恢复的研究奠定了基础.     

太子参细胞悬浮培养及其皂苷含量分析

以太子参的幼叶为外植体,诱导培养获得太子参愈伤组织,并通过细胞悬浮培养获取皂苷.结果表明：用MS＋BA 0.2 mg L^-1＋2,4-D 1.0 mg L^-1＋KT 1.0 mgL^-1液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞.由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同,但纯度较好.细胞悬浮培养约30 d时,每克干重细胞的培养液内可提取总皂苷量为2.13-2.92 mg,略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量（3.6-4.3 mg）,与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近.     

尖顶羊肚菌液体培养基质与条件的研究

通过对尖顶羊肚菌液体培养基质与条件的研究,明确其菌丝生长的最适pH值、最适温度、适宜光照条件、适宜葡萄糖和蛋白胨浓度、适宜培养基,以便应用于尖顶羊肚菌液体菌种的生产和工业发酵。结果表明:菌丝的最适生长温度为2 5℃;最适生长pH值为6 ;葡萄糖和蛋白胨最适浓度分别为2 0 0g/L和10g/L ;菌丝在黑暗环境下生长良好,光照对菌丝生长具有抑制作用;用胡萝卜酵母膏培养基振荡培养形成的菌丝球多,菌丝生长量大;菌丝球在不同培养基中生长,可引起培养液pH值的上升或者下降;菌丝球可利用培养基内的氨基酸,使氨基酸降解,在胡萝卜酵母膏培养基中振荡培养8d的菌液总氨基酸含量较原液减少了36 71% ,亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸含量的下降幅度最大     

Establishment of Orthosiphon stamineus Cell Suspension Culture for Cell Growth

Callus of Orthosiphon stamineus could be induced successfully from petiole, leaf and stem tissues but not roots when cultured on MS medium containing different concentration of NAA (0–4.0 mg l^–1) and 2,4-D (0–2.0 mg l^–1). Highest fresh weight callus production was obtained from leaf explants and those with best friability were obtained on MS medium plus 1.0 mg l^–1 2,4-D plus 1.0 mg l^–1 NAA. Cell suspension cultures were established from these cultures. The appropriate cell inoculum size for the best cell growth was 0.75 g of cells in 20 ml culture medium. Cell suspension culture using MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D promoted the best cell growth with maximum biomass of 8.609 g fresh weight and 0.309 g dry weight 24 days after inoculation. Cells that grew in MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D reached the stationary growth phase in 15 days as compared to the cells that grew in MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D + 1.0 mg l^–1 NAA reached the stationary phase in 24 days. MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D was considered as the maintenance medium for maintaining the optimum cell growth of O. stamineus in the cell suspension cultures with 2-week interval subculture.     

50mL-管摇床培养暨24孔板法筛选麦角菌突变株

麦角菌原生质体用０．３ｍｇ／ｍＬ亚硝基胍（ＮＴＧ）分别处理２０,４０,６０和８０ｍｉｎ。随机挑取ＮＴＧ处理后的原生质体再生单菌落共８０个,分别接种到５０ｍＬ离心管（内装１０ｍＬ液体培养基）中,在２４℃,２２０ｒ／ｍｉｎ摇床上培养１２ｄ。在紫外灯（２５４ｎｍ）下选出４６株荧光相对较中的培养物在２４孔板上作Ｖａｎ Ｕｒｋ蓝色反应分析。挑选９株呈深蓝色反应的菌株作ＨＰＬＣ分析,其结果与２４孔板法有明显的     

MDCK细胞的悬浮驯化及初步应用

目的：驯化MDCK细胞使之适应悬浮培养,以之作为生产流感病毒疫苗的介质,为以细胞代替鸡胚制备流感病毒疫苗提供保证。方法：通过直接法和间接法分别驯化MDCK细胞,放大培养能悬浮生长的MDCK细胞,并以之作为介质培养流感病毒。结果：获得了能悬浮培养的MDCK细胞,其在悬浮条件下生长良好;以之作为载体培养流感病毒,可获得较高产量的病毒。结论：建立了悬浮培养的MDCK细胞,以之作为载体培养流感病毒可获得较高病毒滴度,为细胞培养生产流感病毒疫苗奠定了基础。