蝴蝶兰根段的组织培养

１　植物名称　蝴蝶兰（ＰｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓＭｅｌｌｅｒＧｏｌｄ“ＮＦＳ”）。２　材料类别　根段。３　培养条件　（１）愈伤组织的诱导及分化培养基：Ｂ５＋ＮＡＡ１．５ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＫＴ０．２＋ＣＭ１５０ｍｌ·Ｌ－１＋３％蔗糖;（２）原球茎增殖培养基：Ｂ５＋ＧＡ０．０５＋ＣＨ１２０＋３％蔗糖;（３）小苗生长培养基：１／２ＭＳ＋２０％香蕉泥＋２％蔗糖;（４）诱导生根培养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．３＋２％蔗糖。上述培养基均加０．２％活性炭,０．５８％琼脂粉,ｐＨ为５．５;培养基在１２１℃高…     

高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建

重组大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉＨＭＳ１７４（ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ） 含有携带聚羟基烷酸（ＰＨＡ） 合成基因（ ｐｈａＣＡＢ）＊＊ 的质粒ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ,是很有潜力的ＰＨＡ 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成３羟基丁酸（３ＨＢ） 与３羟基戊酸（３ＨＶ） 共聚物［Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ）］ 的缺陷。将ＲＫ２ 质粒上的ｐａｒ ＤＥ 基因引入ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ 构成质粒ｐＪＭＣ２ ,该质粒可以在宿主Ｅ．ＣｏｌｉＨＭＳ１７４ 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至１８ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,发现Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） 能够以丙酸为前体合成Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为５ ％ ～８ ％ 。在５Ｌ自动发酵罐中分批补料培养Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） ,培养基初始磷酸盐浓度为１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,３０ ｈ 后每升培养液中干菌体可达４２－５ ｇ,Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） 占干重的７０ ％ ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为４－９ ％ 。     

深红蔓绿绒的组织培养与快速繁殖

１　植物名称　深红蔓绿绒（Ｐｈｉｌｏｄｅｎｄｒｏｎｍａｎｄａｉａｎｕｍ“ＲｏｙａｌＱｕｅｅｎ”）。２　材料类别　顶芽、侧芽。３　培养条件　以ＭＳ为基本培养基。（１）芽体启动培养基：ＭＳ＋６ＢＡ２ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．０１;（２）不定芽增殖培养基：ＭＳ＋６ＢＡ３～４＋ＮＡＡ０．１;（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋６ＢＡ０．５＋ＩＢＡ２。以上培养基均加琼脂７．５ｇ·Ｌ－１,ｐＨ值为５．８,培养室温度（２６±２）℃,光照度１０００ｌｘ,每日光照时间１２ｈ。培养基（１）与（２）中蔗糖用…     

大鼠海马神经元Na~ Ca~(2 )交换电流在低氧时的变化

目的：探讨在低氧性脑损伤发生过程中,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换体在细胞内钙超载中的作用。方法：采用全细胞膜片钳方法,在急性分离海马神经元上观察低氧对Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流的电流电压（ＩＶ） 曲线的影响。结果：在整个膜电位水平,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流幅值均不同程度的增加,在正膜电位水平呈现一显著的外向电流。１０ ｍＶ 时,电流幅值从（９２ ．８３ ±２０．８）ｐＡ上升到（１３０ ．６７ ±２６．８８）ｐＡ（ Ｐ＜０ ．０５） ,而在５０ ｍ Ｖ,其电流幅值从（－ ７４ ．６７ ±１１ ．８４）ｐＡ上升到（－ ５８ ．５±１０ ．７１）ｐＡ（Ｐ＜ ０ ．０５）。结论：低氧时Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流呈外向性,这种改变有利于低氧后通过Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换的外向转运方式排出细胞内钠,并交换钙进入细胞     

荧光指示剂法测定植物细胞胞质游离Ca^2＋浓度

利用钙离子荧光指示剂Ｉｎｄｏ－１ ＡＭ 建立了测定植物细胞胞质游离Ｃａ２＋ 浓度的技术。应用此技术测出,ＢＭＳ（ｂｌａｃｋ Ｍｅｘｉｃｏ ｓｗ ｅａｔ）玉米悬浮细胞原生质体静息水平下的胞质游离Ｃａ２＋ 浓度是１２７±５６ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １;Ｃａ２＋ 螯合剂ＥＧＴＡ 可使胞质游离Ｃａ２＋ 浓度由７８ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １降至１２．５ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １,而Ｃａ２＋ 载体Ａ２３１８７ 则可使胞质游离Ｃａ２＋ 浓度升至接近介质Ｃａ２＋ 水平。同时,证明ＡＢＡ 处理可使ＢＭＳ玉米悬浮细胞原生质体Ｃａ２＋ 浓度在１—１．５ 分钟内迅速升高,由７５ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １升至７９０ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １     

酸枣的组织培养和植株再生

１植物名称酸枣（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ　ｊｕｊｕｂａｖａｒ．Ｓｐｉｎｏｓａ）。２材料类别沂河岸堤自然生长的野生植株上的嫩芽。３培养条件诱导愈伤组织培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ２ｍｇ·Ｌ’（单位下同）＋ＮＡＡ０．１;（２）ＭＳ＋６－ＢＡ２＋ＮＡＡ０．２;（３）ＭＳ＋６．ＢＡ２＋ＮＡＡ０．４;（４）ＭＳ＋６．ＢＡ２＋ＮＡＡ１;（５）ＭＳ＋６．ＢＡ２＋ＮＡＡ０．０１;（６）ＭＳ＋６．ＢＡ２＋ＮＡＡ０．０５;（７）ＭＳ＋６－ＢＡＩ＋ＮＡＡ０．５。芽分化培养基：（８）ＭＳ＋６－ＢＡＩ;（９）ＭＳ＋６－ＢＡ２;（…     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

甜瓜的组织培养与快速繁殖

１植物名称甜瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓｍｅｌｏ）品种“状元”。２材料类别顶芽、侧芽。３培养条件初代培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ０．２ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＩＡＡ０．２。增殖培养基：（２）ＭＳ＋６－ＢＡＩ＋ＩＡＡ０．２。生根培养基：（３）Ｍｉｌｌｅｒ＋ＩＡＡ０．２;（４）Ｍｉｌｌｅｒ（无激素）。以上培养基ｐＨ均为５．８～６．０。琼脂浓度在（１）、（２）中为０．７％,在（３）、（４）中为０．６％;糖浓度在（１）、（２）中为３％,在（３）、（４）中为２％。培养温度均为（２５±３）℃,光照度２０００ｌｘ,光…     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中表达水平初探

将含有鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的重组转移质粒ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３ Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ 和ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ ,ｇａｌ＋ ） 共转染草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 和 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。将重组毒株分别感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,并进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 检测。结果表明, Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 蛋白, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后７２ ｈ Ｓ１ 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的３５ ．８ ％ ,而 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 感染的细胞内检测不出 Ｓ１ 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 Ｓ１ 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。     

乙肝病毒核衣壳启动子内三链DNA的形成

用电泳迁移分析方法研究了２１ｎｔ脱氧寡核苷酸Ｇ３ＴＧ２ＴＧＴ２Ｇ５ＴＧ２ＴＧＴ（ＣＰ１）与１２９ｂｐ的乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳启动子（Ｃｐ）片段内一位点结合形成的三链ＤＮＡ的特异性及稳定性．在克隆有ＨＢＶ基因组的质粒ｐＣＰ１０的酶切产物中,ＣＰ１仅与含Ｃｐ的１２９ｂｐ片段结合．在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中其解离常数（Ｋｄ）为１．４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．不同离子稳定三链ＤＮＡ的效果依次为ｓｐ４＋（精胺）＞Ｍｇ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｎａ＋＞Ｋ＋,离子之间存在相互竞争作用．比ＣＰ１多一误配碱基的脱氧寡核苷酸Ｇ２ＴＧ２ＴＧＴＧ３ＴＧ２ＴＧ２ＴＧ２Ｔ（ＣＰ２）在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中与Ｃｐ结合的Ｋｄ值约为ＣＰ１的１／７,而在６０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋或５ｍｍｏｌ／ＬＺｎ２＋溶液中检测不到它与Ｃｐ的结合,这进一步显示了三链ＤＮＡ形成的特异性．细胞的生理离子浓度被认为是：Ｓｐ４＋１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋１４０ｍｍｏｌ／Ｌ,因此,ＣＰ１在细胞内将能特异地与Ｃｐ结合并具有较好的稳定性．     

凝血酶对荧光标记的人单个血小板游离[Ca^2＋]和膜电位的动态影响

本文将ｆｌｕｏ－３和ｄ_ｉ－ＢＡ－Ｃ４（３）荧光标记的血小板固定于纤维蛋白原表面,以５７０型粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）动态观察了凝血酶激活的人单个血小板细胞内游离［Ｃａ~（２＋）］（钙离子浓度）和膜电位的变化。静息状态时细胞游离［Ｃａ~（２＋）］和膜电位荧光较低,波动不明显。当加入０．１Ｕ／ｍｌ凝血酶激活时,［Ｃａ~（２＋）］（细胞内游离钙离子浓度）与膜电位迅速升高,随后［Ｃａ~（２＋）］出现反复振荡,幅度达约５００荧光单位,而膜电位基本上保持峰值水平。［Ｃａ~（２＋）］_ｉ升高与膜电位变化在时间和程度上不一致。本文结果提示,凝血酶引起血小板［Ｃａ~（２＋）］振荡和膜去极化,后者不是Ｃａ~（２＋）内流引起的。     

尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A2泊表达及其生化特征

将尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２Ｉ（Ａ．ａＡＰＬＡ２Ｉ）的基因克隆至表达载体ｐＢＬＭＶＬ２,在大肠杆菌ＲＲ１中成功表达,表达产物Ａ．ａＡＰＬＡ２Ｉ约占细菌蛋白质总量的３０％,以包含体的形式存在。纯化包含体后,将产物变性,复性,然后用ＦＰＬＣ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ ＾ＴＭ１２纯化,产物经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测只有单一条带。     

丙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫效果观察

将丙型肝炎病毒Ｃ＋Ｅ１区基因克隆到不同的真核细胞表达载体ｐＣＤＮＡ３．１（＋）和ｐＳＶＬ中,通过肌肉注射和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／Ｃ及Ｆ１小鼠后,产生了抗ＨＣＶ／Ｃ区抗体。其中核酸疫苗ｐｃＤＮＡ３．１－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１的免疫高峰的出现早于ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１,Ｆ１小鼠的抗体应答强于ＢＡＬＢ／小鼠。肌肉注射优于皮下注射。     

铝和铝＋钙对小麦幼苗根尖质膜,液泡膜微囊ATP酶和膜流动性？…

研究了铝和铝＋＿钙对小麦功苗根尖质膜、液泡膜微囊Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及共动力学参数和膜流动性的影响。在质膜和液泡膜微囊制剂中加入１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＩ＾３＋（ＡＩＣＩ３）时,Ｈ＾２＋－ＡＴＰ囊制剂中加入１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＩ＾３＋（ＡＩＣＩ３）时,Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活笥和酶促反应的Ｖｍａｘ及膜流动性下降,而酶     

冬瓜的组织培养及快速繁殖

１植物名称台湾冬瓜（Ｂｅｎｉｎｃａｓａｈｉｓｐｉｄａ）。２材料类别顶芽、带腋芽的茎段。３培养条件（１）预培养的培养基：１／２ＭＳ和１／２ＭＳ分别添加０．１、０．５、１．０ｍｐ·Ｌ~（－１）（单位下同）ＮＡＡ、６－ＢＡ、ＺＴ、２,４－Ｄ。（２）诱导丛生芽培养基：①ＭＳ＋ＮＡＡＩ＋６－ＢＡ４;②ＭＳ＋ＮＡＡ２＋６－ＢＡ３;③ＭＳ＋ＮＡＡ３＋６－ＢＡ２;④ＭＳ＋ＮＡＡ４＋６．ＢＡ１。（３）生根培养基：⑤１／２大量元素减半的ＭＳ培养基;⑥１／２ＭＳ;⑦ＭＳ。培养温度：２５～２８℃,光照度２０００～２５０…     

绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达

将改良的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因,插入到植物表达载体中,构建双ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的植物表达载体ｐＢＩＧＦＰ,在Ｋａｍ浓度为２０ｍｇ／Ｌ的筛选培养基上,用含有ｐＢＩＦＰ质粒的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４感染青蒿叶片,获得５个抗Ｋａｎ阳性丛生芽系。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,外源ＧＦＰ基因已整合到青蒿转基因芽Ｇ－１系的基因组中。在ＯＬＹＭＰＵＳ－ＢＨ２型荧光显微镜下,观察到转基因     

抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ, 与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ 基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为２８ｋＤ, 前者占细胞总蛋白的６ ％ , 后者为０ ．３ ｍｇ／ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化, 前者纯度可达９０％ 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ 结合活力, 其亲和常数分别为５ ．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１ , 略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０ ２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 。     

大鼠酰胺化酶的信号肽引导的昆虫细胞表达外泌系统

将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建ＰＡＢＣｈＧＲＦ（Ｇｌｙ）、ＰＡＢＣＩＧＦＩ融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒ｐＢａｃＰＡＧ２、ｐＢａｃＰＡＩ,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒ＢａｃＰＡＫ６线性化ＤＮＡ共转染秋粘虫细胞Ｓｆ２１,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒ＢａｃＰＡＧ、ＢａｃＰＡＩ。将重组病毒感染Ｓｆ２１细胞,ＰＡＢＣｈＧＲＦ（Ｇｌｙ）和ＰＡＢＣＩＧＦＩ均得到有效外泌表达,表达产物通过ＩｇＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ柱可获得快速纯化。     

芋的组织培养

１植物名称芋（Ｃｏｌｏｃａｓｉａｅｓｃｕｌｅｎｔａ）品种江汉芋（多子芋类型）。２材料类别茎尖及微芽。３培养条件分化培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ３．０～５．０ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．５;（２）ＭＳ＋６．ＢＡ１．０～２．０＋ＮＡＡ０．５。诱导生根培养基：（３）ＭＳ＋６－ＢＡ１．０～２．０＋ＮＡＡ０．１。培养基（１）、（２）中另加蔗糖３０ｇ·Ｌ－１,培养基（３）中加蔗糖１０ｇ·Ｌ１,琼脂６～７ｇ·Ｌ－１,ｐＨ５．８～６．０,１２１℃高温高压灭菌１５ｍｉｎ左右。光照度１５５～２０００ｌｘ,光…     

刺槐宽叶和四倍体无性系的组织培养

１植物名称刺槐（Ｒｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ）优良无性系：Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｌｏｃｕｓｔ、Ｇｌｇａｓｔｙｐｅｌｏｃｕｓｔ。２材料类别带腋芽的茎段。３培养条件（１）启动培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ０．２５ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．０５。（２）分化培养基和继代培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．１＋ＡｇＮＯ３１０,ＭＳ＋６ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．１。上述培养基均添加３％蔗糖、０．６％琼脂。（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．２＋ＮＡＡ０．２,添加２％蔗糖０．６％琼脂。培养基ｐＨ…